Monoclonal Mouse Anti-Human CD1a Clone 010 Nr Kat

Monoclonal Mouse Anti-Human CD1a Clone 010 Nr Kat

Monoclonal Mouse
Anti-Human CD1a
Clone 010
Nr Kat. M3571
Przeznaczenie
Do badań diagnostycznych in vitro.
Przeciwciało Mouse Anti-CD1a, klon 010 jest przeznaczone do uŜytku laboratoryjnego, do identyfikacji jakościowej w mikroskopie świetlnym
komórek dodatnich w tkankach normalnych i nowotworowych, przy uŜyciu technik immunohistochemicznych (IHC). Wyniki dodatnie
wspomagają róŜnicowanie grasiczaków i rozrostów T-komórkowych oraz diagnostyki histiocytozy z komórek Langerhansa1. Identyfikacja
róŜnicująca jest wspomagana przez wyniki panelu przeciwciał. Interpretację powinien przeprowadzić wykwalifikowany patolog w oparciu o
historię choroby pacjenta oraz inne testy diagnostyczne.
Podsumowanie i wyjaśnienie
CD1a, jest członkiem rodziny antygenów CD1, jest nie-polimorficzną glikoproteiną powierzchniową komórek związaną z głównym
kompleksem zgodności tkankowej MHC klasy I. Jej ekspresja jest związana z Beta-2-mikroglobuliną. 1,2
Zobacz dokument „Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych” firmy Dako lub następujące części instrukcji do
systemu detekcji IHC: 1) Zasady procedury, 2) Niezbędne materiały niedostarczone z zestawem, 3) Przechowywanie, 4) Przygotowanie
preparatu, 5) Wykonanie odczynu, 6) Kontrola jakości, 7) Rozwiązywanie problemów, 8) Interpretacja wyniku odczynu, 9) Ograniczenia
metody.
Odczynnik dostarczony
Anti-CD1a, Klon 010 jest dostarczane w objętości 1.0 mL jako supernatant hodowli komórkowej zdializowanej, 0.05 mol/L Tris/HCl, pH 7.2, i
zawierającej 15 mmol/L.
Izotyp: IgG1, kappa
Klon: 0101
StęŜenie mysich lgG mg/L: zobacz etykieta na fiolce.
M3571 moŜna uŜywać w rozcieńczeniu 1:50 przy uŜyciu systemu detekcji LSAB2, Liquid DAB. (to jest tylko ogólna wskazówka).
Optymalne stęŜenie przeciwciała moŜe się róŜnić od podanego, zaleŜnie od badanej próbki i powinno być ustalone przez kaŜde
laboratorium.
Immunogen
Ludzkie tymocyty
Swoistość
Anti-Human CD1a, Klon 010 zostało sklasyfikowane jako CD1a na Czwartych Międzynarodowych Warsztatach i Konferencji: Ludzkie
antygeny róŜnicowania leukocytów (International Workshops and Conferences on Leucocyte Differentiation Antigens).2 Klon 010 wykazuje
immunoprecypitację z antygenem CD1a z lizatu komórek grasicy oraz z lizatu epidermalnych komórek Langenhansa.2 Przeciwciało silnie
precypituje natywną molekułę CD1 (masa cząsteczkowa 49 kD) i Beta-2-mikroglobulinę ( masa cząsteczkowa 12 kD), ale nie precypituje
cząsteczki CD1 rozciętej trypsyną ( masa cząsteczkowa 27 kD).2 W immunohistochemii wykazano aktywność tego przeciwciała z
powierzchniową glikoproteiną CD1a występującą na korowych tymocytach, komórkach Langerhansa oraz komórkach splatających się
(retikularnych) w tkankach mroŜonych, jak teŜ w skrawkach utrwalonych w formalinie, zatopionych w parafinie.1,2
Materiały wymagane, ale nie dostarczone z odczynnikiem
Zobacz „Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych” firmy Dako i/lub instrukcje do systemu detekcji. Jako diluent
dla procedur IHC zalecany jest:
Dako Antibody Diluent (Nr Kat. S0809)
Zalecane jest uŜycie następującej kontroli negatywnej:
Mouse IgG1 (Nr Kat X0931)
Środki ostroŜności
1. Odczynniki są przeznaczone dla przeszkolonych UŜytkowników.
2. Opisywany produkt zawiera silnie toksyczny związek — azydek sodu (NaN3), w czystej postaci. StęŜenie NaN3 występujące w
produkcie nie jest klasyfikowane jako niebezpieczne. Jednak w wyniku reakcji NaN3 z ołowiem lub miedzią, wchodzącymi w skład
instalacji kanalizacyjnych, mogą powstawać silnie wybuchowe azydki metali. Przy usuwaniu resztek odczynnika uŜywać duŜych ilości
wody do przepłukiwania, aby uniknąć gromadzenia się azydków w instalacji kanalizacyjnej. 3
3. Podobnie jak w przypadku kaŜdego produktu otrzymywanego z materiału biologicznego, naleŜy stosować odpowiednie procedury
postępowania.
4. NaleŜy stosować właściwe wyposaŜenie ochronne, zabezpieczające przed kontaktem odczynnika ze skórą bądź oczami.
5. Niewykorzystane odczynniki naleŜy usuwać zgodnie ze stosownymi przepisami lokalnymi i ogólnokrajowymi.
(115012-002)
303743PL_002 str. 1/4
Przechowywanie
Przechowywać w temperaturze 2–8°C. Nie nale Ŝy uŜywać odczynników po upływie terminu waŜności podanego na fiolce. JeŜeli odczynniki
są przechowywane w warunkach innych niŜ podane na ulotce dołączanej do opakowania, UŜytkownik powinien je zweryfikować. Nie ma
jednoznacznych oznak świadczących o niestabilności tego produktu. Dlatego równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od
pacjentów naleŜy wykonywać dodatnie i ujemne próby kontrolne. W wypadku nieoczekiwanego wyniku odczynu, którego nie moŜna wyjaśnić
róŜnicami w procedurach laboratoryjnych, gdy podejrzewa się problem z przeciwciałem, naleŜy się skontaktować z działem wsparcia
technicznego firmy Dako.
Przygotowanie próbek
Skrawki parafinowe
Przeciwciała Anti-CD1a, Klon 010, moŜna stosować do skrawków utrwalanych w formalinie i zatopionych w parafinie
Odparafinowane skrawki muszą być przygotowane termicznie przed właściwą procedurą barwienia immunohistochemicznego (IHC)
Docelowe odzyskanie epitopu wymaga zanurzenia skrawka tkanki w podgrzanym roztworze buforu i utrzymanie ciepła w łaźni wodnej
(95–99 °C), parowniku (95–99 °C), albo w autoklawie (121 °C). W celu zwi ększenia przylegania skrawka do szkiełka podstawowego zaleca
się uŜycie szkiełek sialinizowanych Dako Silanized Slides (Nr Kat. S3003). W procedurze 20 minutowego ogrzewania zaleca się uŜycie
docelowego roztworu odzyskiwania Dako Target Retrieval Solution (Nr Kat. S1700) albo koncentrat 10x (Nr Kat. S1699).
Skrawki mroŜone i rozmazy komórkowe
Przeciwciało Anti-CD1a, Klon 010 moŜna uŜyć do znakowania utrwalonych acetonem skrawków mroŜonych i utrwalonych rozmazów
komórkowych. Odzyskiwanie epitopu nie jest w tym przypadku wymagane
Procedura barwienia
NaleŜy postępować zgodnie z procedurą opisaną w instrukcji dołączonej do wybranego systemu detekcji.
Interpretacja wybarwienia
Odczyn komórkowy w przypadku antygenu CD1a ma charakter cytoplazmatyczny i/lub błonowy.1, 2, 4
Ograniczenia produktu
Dla uzyskania optymalnych wyników barwienia skrawków zatopionych w parafinie zaleca się uŜycie jako chromogenu DAB z systemem
LSAB2, HLP (płynny DAB).
Charakterystyka działania
Tkanki prawidłowe
Podczas testów przeprowadzonych na skrawkach tkankowych migdałków utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie (FFPE)
stwierdzono, Ŝe przeciwciało Anti-CD1a, klon 010, jest immunoreaktywne w przypadku komórek Langerhansa oraz zmiennie
immunoreaktywne w przypadku komórek międzypalczastych, a podczas testów przeprowadzonych na zatopionych w parafinie tkankach
skóry – znakuje komórki Langerhansa.1 NaleŜy odrzucić wszelkie wybarwienia komórek centrum rozrodczego migdałków. Zaobserwowano
barwienie pojedynczych komórek międzypalczastych i tymocytów rdzeniowych w rdzeniu grasicy.1, 2 NaleŜy zwrócić uwagę, Ŝe moŜe
wystąpić barwienie komórek mięśni gładkich.
Rodzaj tkanki
(liczba badanych przypadków)
Nadnercza (3)
Szpik kostny (3)
Gruczoły sutkowe (3)
MóŜdŜek (3)
Mózgowie (3)
Szyjka macicy (3)
Jelito grube (3)
Przełyk (3)
Serce (3)
Nerki (3)
Wątroba (3)
Płuca (3)
Komórki międzybłonka (3)
Nerwy obwodowe (3)
Jajniki (3)
(115012-002)
Składniki tkankowe
wykazujące odczyn
dodatni
0/3
0/3
1/3
0/3
0/3
1/3
0/3
3/3
0/3
0/3
0/3
2/3
0/3
0/3
1/3
Rodzaj tkanki
(liczba badanych przypadków)
Trzustka (3)
Przytarczyce (3)
Przysadka mózgowa (3)
Gruczoł krokowy (3)
Ślinianki (3)
Mięśnie szkieletowe (3)
Skóra (3)
Jelito cienkie (3)
Śledziona (3)
śołądek (3)
Jądra (3)
Grasica (3)
Tarczyca (3)
Migdałki (3)
Macica (3)
Składniki tkankowe
wykazujące odczyn
dodatni
2/3
0/3
0/3
0/3
0/3
0/3
3/3
0/3
0/3
0/3
0/3
2/3
0/3
3/3
0/3
303743PL_002 str. 2/4
Tkanki patologiczne
Zaprezentowano następujące wyniki barwiąc Anti-CD1a, klon 010 skrawki parafinowe z patologicznych tkanek.1, 4, 5
Tabela 1. Odczyny z Tkankami Patologicznymi
Typ tkanki
Dodatnio i ujemnie wybarwione elementy tkanki
17/17 dodatnie, jednojądrzaste komórki Langerhansa
Kość: Histiocytoza z komórek
Langerhansa
Płuca: Histiocytoza z komórek
2/2 dodatnie, jednojądrzaste komórki Langerhansa
Langerhansa
Skóra: Histiocytoza z komórek
13/14 dodatnie, jednojądrzaste komórki Langerhansa
Langerhansa
Węzły chłonne: Histiocytoza z komórek
1/1 dodatnie, jednojądrzaste komórki Langerhansa
Langerhansa
Kości czaszki: Histiocytoza z komórek
4/4 dodatnie, jednojądrzaste komórki Langerhansa
Langerhansa
Podwzgórze: Histiocytoza z komórek
7/7 dodatnie, histiocytoza komórek Langerhansa
Langerhansa
Histiocytoza z komórek Langerhansa:
4/4 dodatnie, histiocytoza komórek Langerhansa
Eosinophilic granuloma
Histiocytoza z komórek Langerhansa:
4/4 dodatnie, histiocytoza komórek Langerhansa
Płucna
Histiocytoza z komórek Langerhansa:
1/1 dodatnie, histiocytoza komórek Langerhansa
Hand-Schuller-Christian
T-ALL/LBL
4/8 dodatnie, komórki nowotworowe
Znamię
3/3 ujemne
Czerniak
2/2 ujemne
Neurofibromaa
2/2 ujemne
Adenopatia Rosai-Dorfman
2/2 ujemne
Xanthogranuloma juvenilea
3/3 ujemne, komórki nowotworowe
Węzeł chłonny hiperplazja podkorowa
3/4 zmienne-dodatnie, normalne komórki dendrytyczne splatajace
się
Węzeł chłonny limfadenopatia
7/7 dodatnie, normalne duŜe komórki dendrytyczne i komórki
welonowate zmienne-dodatnie, normalne komórki
dendrytyczne splarajace się
Skóra: hiperplazja limfoidalna
2/2 dodatnie, normalne komórki Langerhansa oraz skórne komórki
dendrytyczne zmienne-dodatnie, normalne komórki
dendrytyczne splatajace się
Skóra: Ŝółtak (Xanthoma)
1/1 dodatnie, normalne komórki Langerhansa
Chłoniak skóry: Mycosis fungoides
2/2 dodatnie, normalne komórki Langerhansa, duŜe komórki
dendrytyczne i skórne komórki dendrytyczne
Chłoniak skóry: Low-grade B-cell
1/1 dodatnie, normalne komórki Langerhansa
Chłoniak skóry: T-immunoblastyczny
1/1 dodatnie, normalne komórki Langerhansa, duŜe komórki
dendrytyczne i skórne komórki dendrytyczne
Chłoniak skóry: Anaplastyczne (Kil+)
1/1 dodatnie, normalne komórki Langerhansa
wielkie komórki
Obwodowy chłoniak T-komórkowy
5/5 ujemne
Grasica: choroba Hodgkina
2/2 dodatnie, normalne tymocyty korowai duŜe komórki
dendrytyczne zmienne - dodatnie, normalne dendrytyczne
komórki splatające się
Grasica: Thymoma typu korowego
2/2 dodatnie, nowotworowe tymocyty korowe
Chłoniak Burkitta
1/1 dodatnie, normalne komórki Langerhansa
a
Wszystkie próbki skóry zawierające normalne epidermalne komórki Langerhansa barwią się dodatnio Anti-CD1a, Klon 010.4
(115012-002)
303743PL_002 str. 3/4
Piśmiennictwo
1. Krenács L, Tiszalvicz L, Krenács T, Boumsell, L. Immunohistochemical detection of CD1a antigen in formalin-fixed and paraffinembedded tissue sections with monoclonal antibody 010. J Pathol 1993; 171:99
2. Boumsell L. Cluster Report: CD1 in Leucocyte Typing IV. Eds. W Knapp, B Dörken, WR Gilks, EP Rieber, RE Schmidt, H Stein, and
AEG Dr. von dem Borne. Oxford: Oxford UP, 1989: 251
3. Department of Health, Education and Welfare, National Institute for Occupational Safety and Health, Rockville, MD. “Procedures for the
decontamination of plumbing systems containing copper and/or lead azides.” DHHS (NIOSH) Publ. No. 78-127, Current 13. August 16,
1976
4. Emile JF, Wechsler J, Brousse N, Boulland ML, Cologon R, Fraitag S, Voisin MC, Gaulard P, Boumsell L, Zafrani ES. Langerhans’ cell
histiocytosis: Definitive diagnosis with the use of monoclonal antibody O10 on routinely paraffin-embedded samples. Amer J Surg
Pathol 1995; 19(6):636
5. Mazal PR, Hainfellner JA, Preiser J, Czech T, Simonitsch I, Radaszkiewicz T, Budka H. Langerhans cell histiocytosis of the
hypothalamus: Diagnostic value of immunohistochemistry. Clin Neuropath 1996; 15(2):87
Edition 01/15
(115012-002)
303743PL_002 str. 4/4