fluorochrome conjugated single reagent
Transkrypt
fluorochrome conjugated single reagent
Monoclonal Mouse Anti-Human CD10, Klon SS2/36 Nr kat. F0826 Nr kat. R0848 FITC-skoniugowany RPE-skoniugowany Przeznaczenie Do diagnostyki in vitro. F0826 i R0848 przeznaczone są do użycia w cytometrii przepływowej. CD10 jest użyteczne do podklasyfikacji białaczek z limfocytów B, ale może również występować w innych typach komórek białaczkowych (1). Interpretacja wyników musi być przeprowadzona przez wykwalifikowany personel w powiązaniu z historią choroby pacjenta oraz wynikami innych testów diagnostycznych. Synonimy antygenu Antygen białaczki limfatycznej ostrej (CALLA) (1). Wstęp CD10 jest białkiem o masie 100 kDa należącym do rodziny metaloproteaz transbłonowych typu II, które również obejmują antygeny leukocytów CD13, CD26, CD73 oraz aminopeptydazę. Gen kodujący CD10 zlokalizowany jest na chromosomie 3. CD10 jest enzymem zależnym od cynku i uważa się, że zmniejsza odpowiedzi komórkowe wzgledem hormonów peptydowych (2). W limfocytach, CD10 ekspresjonowane jest w niedojrzałych limfocytach T i prekursorach limfocytów B, jednak jest tracona w momencie osiągnięcia przez te komórki dojrzałości. CD10, jednakże, ulega powtórnej ekspresji w proliferujących limfocytach B i dojrzałych neutrofilch (3). W schorzeniach związanych z limfocytami, CD10 ekspresjonowane jest w białaczce limfatycznej ostrej (ALL) z prekursorów limfocytów B, aczkolwiek jest również obserwowana w części ALL z limfocytów T. Ponadto, ekspresjonowane jest wybiórczo w białaczce z dojrzałych limfocytów B, m.in. szpiczak mnogi oraz w chłoniakach (2, 3). Odczynnik dostarczony Koniugaty anty-CD10, F0826 oraz R0848, otrzymano z oczyszczonego monoklonalnego przeciwciała mysiego. Koniugaty dostarczono w formie płynnej w buforze zawierającym 1% albuminę surowicy wołowej (BSA) i 15 mmol/LNaN3, pH 7,2. Każde opakowanie wystarcza na 100 testów (10 µL koniugatu na 106 leukocytów z prawidłowej krwi obwodowej człowieka). Isotyp: IgG1, kappa. Stężenie koniugatu mg/L: Patrz etykieta na opakowaniu. Przeciwciało Nr kat. Fluorochrom Kontrla ujemna Nr kat. F0826 FITC (Izomer 1 Izotiocjanianu Fluoresceiny) X0927 R0848 RPE (R-Fikoerytryna) X0928 Immunogen Komórki białaczki limfatycznej ostrej. Swoistość Anty-CD10, SS2/36, zostało zaprezentowane na the Third International Workshop and Conference on Human Leucocyte Differentiation Antigens, a badania przeprowadzone przez różne laboratoria potwierdziły jej reaktywność względem CD10 (4). Środki ostrożności 1. Do stosowania przez osoby przygotowane zawodowo. 2. Produkt zawiera azydek sodu (NaN3), odczynnik chemiczny silnie toksyczny w czystej postaci. W stężeniu obecnym w produkcie, chociaż nie klasyfikowanym jako niebezpieczne, azydek sodu może reagować z elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, tworząc silnie wybuchowe pochodne lub azydki tych metali. Przy usuwaniu odpadów przepłukać spływ dużą ilością wody, aby uniknąć tworzenia się azydków. 3. Jak w przypadku każdego materiału biologicznego należy stosować odpowiednie procedury. Przechowywanie Procedura barwienia (114450-001) Przechowywać bez dostępu światła w temp. 2-8oC. Nie używać po upływie daty ważności wskazanej na opakowaniu. Jeśli produkt był przechowywany w warunkach innych niż wskazane, użytkownik musi sprawdzić jakość produktu. Nie ma wyraźnych oznak wskazujących na niestabilność produktu, dlatego równocześnie z próbkami badanymi powinno się oznaczać wiarygodną kontrolę. Jeżeli uzyskuje się nieoczekiwane wyniki bez zmiany procedur laboratoryjnych i można podejrzewać, że dzieje się to z winy przeciwciała, należy skontaktować się z serwisem technicznym. 1. Pobrać krew żylną do próbówki z antykoagulantem. 2. Wyodrębnić komórki jednojądrzaste przez wirowanie w medium rozdzielającym. Alternatywnie, przeprowadzić lizę krwinek czerwonych po etapie 6. 3. Przemyć komórki jednojądrzaste dwukrotnie używając RPMI 1640 lub PBS, pH 7,2-7,4. 4. Zmieszać w próbówce 100 µL zawiesiny komórkowej z 10 µL anty-CD10 skoniugowanym z fluorochromem. 5. Jako kontroli ujemnej użyj niereaktywnego przeciwciała monoklonalnego o tym samym izotypie i skoniugowanym z tym samym fluorochromem (patrz tabela). Kontrola ujemna może być użyta w objętości 10 uL, kiedy dostosuje się ją do takiego samego stężenia koniugatu, co stosowany konjugat. Jednakże, optymalna objętość kontroli ujemnej może się różnić, np., w zależności od preparatu i metody preparacyjnej, zatem powinna być ustalana przez każde laboratorium indywidualnie. 6. Inkubować w ciemności w temp. 4 °C przez 30 minut. F0826/R0848/PL/ROP/01.07.02 str. 1/2 Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17 7. Przemyć dwukrotnie PBS-em zawierającym 2% BSA. Ponownie wykonać zawieszenie komórek w każdej z próbówek w medium odpowiednim dla cytometrii przepływowej np. 0,3 mL 1% paraformaldehydu (utrwalacz) w 0,01 mol/L PBS, pH 7,4. 8. Wykonać analizę na cytometrze przepływowym. Zaleca się wykonanie kontroli ujemnej i dodatniej równolegle z przygotowaniem badanych próbek. Należy także zwrócić uwagę na fakt że, próbki zawierające fluorochromy są nieodporne na światło, dlatego należy je ochraniać w trakcie całej procedury przygotowania i analizy. Literatura 1. Béné MC, Faura GC, GEIL (Groupe d’Etude Immunologique des Leucemies). Recent advances in the cytobiology of leukemias (review). CD10 in acute leukemias. Haematologica 1997;82:205-10. 2. Barclay AN, Brown MH, Law SKA, McKnight AJ, Tomlinson MG, van der Merwe PA. CD10. Common acute lymphoblastic leukaemia antigen (CALLA). The leucocyte antigen facts book. 2nd ed. London, San Diego: Academic Press; 1997. p. 154-5. 3. Jones M, Mason DY. BC2. CD10 workshop panel report. In: Kishimoto T, Kikutani H, von dem Borne AEG, Goyert SM, Mason DY, Miyasaka M, et al., editors. Leucocyte typing VI. White cell differentiation antigens. Proceedings of the 6th International Workshop and Conference; 1996 Nov 10-14; Kobe, Japan. New York, London: Garland Publishing Inc.; 1997. p.131-32. 4. Majdic O, Sugita K, Stockinger H, Skrobal A, Knapp W. B4.14. Comparative evaluation of CD10 antibodies. In: McMichael AJ, Beverley PCL, Cobbold S, Crumpton MJ, Gilks W, Gotch FM, et al., editors. Leucocyte typing III. White cell differentiation antigens. Proceedings of the 3rd International Workshop and Conference; 1986 Sept 21-26; Oxford, England. Oxford, New York, Tokyo: Oxford University Press; 1987. p. 488-9. Legenda (114450-001) Numer katalogowy Temperatura przechowywania Zużyć przed Wyrób medyczny do diagnostyki in vitro Chronić przed światłem dziennym Producent Sprawdzić w instrukcji stosowania Numer serii F0826/R0848/PL/ROP/01.07.02 str. 2/2 Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17