fluorochrome conjugated single reagent

Monoclonal Mouse
Anti-Human CD15/FITC
Klon C3D-1
Nr kat. F0830
Przeznaczenie
Do diagnostyki in vitro.
F0830 przeznaczony jest do użycia w cytometrii przepływowej. W cytometrii przepływowej, anty-CD15 jest
wartościowym narzędziem do wstępnej oceny białaczek szpikowych ostrych wraz z panelem innych przeciwciał
(1-3). Interpretacja wyników musi być przeprowadzona przez wykwalifikowany personel w powiązaniu z historią
choroby pacjenta oraz wynikami innych testów diagnostycznych.
Synonimy antygenu
antygen Lewisa X, X-hapten, lakto-N-neo-fukopentoze III (LNFP III), swoisty dla stadium embrionalnego
antygen-1 (SSEA-1), 3-FAL oraz 3-FL (4,5).
Wstęp
CD15 jest złożoną grupą glikoprotein i glikolipidów. Struktura niniejszego antygenu jest następująca
Galβ1→4[Fucα1→3]GlcNAcβ1→3Galβ1→R. CD15 funkcjonuje jako ligand dla selektyn, jak również może być
zaangażowany w adhezję komórkową poprzez bezpośrednie oddziaływanie Lewis X-Lewis X (5).
CD15 głównie jest ekspresjonowane w dojrzałych granulocytach i monocytach, ale również w dojrzałych
komórkach szpiku kostnego oraz komórkach białaczkowych linii mielo-monocytowej (5). Ponadto, CD15 jest
ekspresjonowane w sporadycznych przypadkach białaczek limfatycznych ostrych (ALL) (5,6), jak również w
komórkach gruczolakoraka i niedojrzałych komórkach nabłonkowych (5).
Odczynnik dostarczony
Koniugat anty-CD15, F 0830, otrzymano z oczyszczonego monoklonalnego przeciwciała mysiego. Koniugat
dostarczany jest w formie płynnej w buforze zawierającym 1% albuminę surowicy wołowej (BSA) i 15
mmol/LNaN3, pH 7,2. Każde opakowanie wystarcza na 100 testów (10 µL koniugatu na 106 leukocytów z
prawidłowej krwi obwodowej człowieka).
Isotyp: IgM, kappa. Stężenie koniugatu mg/L: Patrz etykieta na opakowaniu.
Immunogen
Oczyszczone ludzkie neutrofile (7).
Swoistość
Anty-CD15, C3D-1, zostało zaprezentowane na Sixth International Workshop and Conference on Human
Leucocyte Differentiation Antigens, a badania przeprowadzone przez różne laboratoria potwierdziły jego
reaktywność z CD15 (5).
Anty-CD15, C3D-1, oddziałuje z granulocytami i monocytami krwi obwodowej (5). W przypadku białaczki
szpikowej ostrej (AML), anty-CD15, C3D-1, znakowało 21/35 (61.7%) przypadków ekspresjonowania CD15
wspólnie z CD117 i/lub CD34 (3).
W przypadku białaczki limfatycznej ostrej (ALL) anty-CD15, C3D-1, znakowało 8/128 (6.25%) przypadków ALL
z limfocytów B i 0/26 przypadków ALL z limfocytów T (6).
Środki ostrożności
1. Do stosowania przez osoby przygotowane zawodowo.
2. Produkt zawiera azydek sodu (NaN3), odczynnik chemiczny silnie toksyczny w czystej postaci. W stężeniu
obecnym w produkcie, chociaż nie klasyfikowanym jako niebezpieczne, azydek sodu może reagować z
elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, tworząc silnie wybuchowe pochodne lub azydki tych
metali. Przy usuwaniu odpadów przepłukać spływ dużą ilością wody, aby uniknąć tworzenia się azydków.
3. Jak w przypadku każdego materiału biologicznego należy stosować odpowiednie procedury.
Przechowywanie
Procedura barwienia
(114451-001)
Przechowywać bez dostępu światła w temp. 2-8oC. Nie używać po upływie daty ważności wskazanej na
opakowaniu. Jeśli produkt był przechowywany w warunkach innych niż wskazane, użytkownik musi sprawdzić
jakość produktu. Nie ma wyraźnych oznak wskazujących na niestabilność produktu, dlatego równocześnie z
próbkami badanymi powinno się oznaczać wiarygodną kontrolę. Jeżeli uzyskuje się nieoczekiwane wyniki bez
zmiany procedur laboratoryjnych i można podejrzewać, że dzieje się to z winy przeciwciała, należy
skontaktować się z serwisem technicznym.
1.
Pobrać krew żylną do próbówki z antykoagulantem.
2.
Wyodrębnić komórki jednojądrowe przez wirowanie w medium rozdzielającym. Alternatywnie,
przeprowadzić lizę krwinek czerwonych po etapie 6
3.
Przemyć komórki jednojądrzaste dwukrotnie używając RPMI 1640 lub PBS, pH 7,2-7.4.
4.
Zmieszać w próbówce 100 µL zawiesiny komórkowej z 10 µL F0830.
5.
W kolejnej probówce, zmieszaj 100 µL zawiesiny komórkowej z odpowiednią objętością, np., 10 µL
odczynnika kontroli ujemnej. Jako kontrolę ujemną zaleca się dla produktu o numerze katalogowym F0830,
odczynnik o nr kat. X0934.
6.
Inkubować w ciemności w temp. 4 °C przez 30 minut.
7.
Przemyć dwukrotnie PBS zawierającym 2% BSA. Ponownie wykonać zawieszenie komórek w każdej
probówce w odpowiednim medium dla cytometrii przepływowej, np. 0,3 mL 1% paraformaldehydu (utrwalacz)
w 0,01 mol/L PBS, pH 7,4.
8.
Wykonać analizę na cytometrze przepływowym.
F0830/PL/SSA/17.05.04 str. 1/2
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Zaleca się wykonanie kontroli ujemnej i dodatniej równolegle z przygotowaniem badanych próbek. Należy także
zwrócić uwagę na fakt że, próbki zawierające fluorochromy są nieodporne na światło, dlatego należy je
ochraniać w trakcie całej procedury przygotowania i analizy.
Literatura
1.
van Dongen JJM, Adriaansen HJ. Immunobiology of leukemia. In: Henderson ES, Lister TA, Greaves
MF, editors. Leukemia. Philadelphia, London, Toronto, Montreal, Sydney, Tokyo: WB Saunders
Company; 1996. p. 83-130.
2.
Nakamura K, Ogata K, An E, Dan K. Flow cytometric assessment of CD15+CD117+ cells for the
detection of minimal residual disease in adult acute myeloid leukaemia. Br J Haematol 2000;108:710-6..
3.
Bahia DMM, Yamamoto M, MLF Chauffaille, Kimura EYS, Bordin JO, Filgueiras MAC, et al. Aberrant
phenotypes in acute myeloid leukemia: a high frequency and clinical significance. Haematologica
2001;86:801-6.
4.
Turni L, Shaw S, Watson B, Mason D. CD guide. In: Mason D, André P, Bensussan A, Buckley C, Civin
C, Clark E, De Haas M, et al, editors. Leucocyte typing VII. White cell differentiation antigens.
Proceedings of the 7th International Workshop and Conference; 2000 June; Harrogate, UK. Oxford, New
York: Oxford Univeristy Press Inc.; 2002. p. 763.
5.
Kannagi R. AS5. CD15 workshop panel report. In: Kishimoto T, Kikutani H, von dem Borne AEG, Goyert
SM, Mason DY, Miyasaka M, et al., editors. Leucocyte typing VI. White cell differentiation antigens.
Proceedings of the 6th International Workshop and Conference; 1996 Nov 10-14; Kobe, Japan. New
York, London: Garland Publishing Inc.; 1997. p. 348-351.
6.
Maynadié M, Campos L, Moskovtchenko P, Sabido O, Aho S, Lenormand B, et al. Heterogenous
expression of CD15 in acute lymphoblastic leukemia; a study of ten anti-CD15 monoclonal antibodies in
158 patients. Leuk Lymphoma 1997;25:135-43.
7.
Stein H, Hansmann ML, Lennert K, Brandtzaeg P, Gatter KC, Mason DY. Reed-Sternberg and Hodgkin
cells in lymphocyte-predominant Hodgkin’s disease of nodular subtype contain J chain. Am J Clin Pathol
1986;86:292-7.
Legenda
(114451-001)
Numer katalogowy
Temperatura przechowywania
Zużyć przed
Wyrób medyczny do
diagnostyki in vitro
Chronić przed światłem
dziennym
Producent
Sprawdzić w instrukcji
stosowania
Numer serii
F0830/PL/SSA/17.05.04 str. 2/2
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17