FLEX Polyclonal Rabbit Anti-Human IgG Ready-to

FLEX
Polyclonal Rabbit
Anti-Human IgG
Ready-to-Use
(Link)
Nr kat. IR512
Przeznaczenie
Do stosowania w diagnostyce in vitro.
Przeciwciała FLEX Polyclonal Rabbit Anti-Human IgG, Ready-to-Use, (Link), są przeznaczone do stosowania
w immunohistochemii w aparatach Autostainer Link. Przeciwciała są przydatne w identyfikacji komórek
plazmatycznych i pokrewnych komórek limfoidalnych zawierających IgG. Są uŜytecznym narzędziem do klasyfikacji
pacjentów z powstającymi nowotworami z komórek B (1-3). Ponadto przeciwciało moŜna wykorzystać
do róŜnicowania nowotworowej, monoklonalnej poliferacji z reaktywnego rozrostu komórek plazmatycznych (1, 4).
Interpretacja kliniczna dodatniego lub ujemnego odczynu musi być uzupełniona przez ocenę morfologiczną,
wykonanie odpowiednich prób kontrolnych i interpretowana przez doświadczonego patologa w kontekście historii
choroby pacjenta i innych badań diagnostycznych.
Streszczenie
i informacje ogólne
Ludzkie immunoglobuliny składają się głównie z dwóch identycznych łańcuchów cięŜkich (Mr ok. 50 000) i dwóch
identycznych łańcuchów lekkich (Mr ok. 20 000). Cztery łańcuchy są związane wiązaniami kowalencyjnymi
za pomocą wiązań dwusiarczkowych. Łańcuchy lekkie są typu kappa lub lambda. Pięć immunoglobulin, IgA, IgD,
IgE, IgG i IgM, róŜni się w zaleŜności od łańcuchów cięŜkich. Immunoglobuliny IgA i IgM występują takŜe w formach
polimerycznych. Łańcuch cięŜki immunoglobuliny IgG jest łańcuchem typu gamma. W prawidłowej surowicy IgG jest
główną klasą immunoglobulin, tworząc ok. 75% wszystkich immunoglobulin (5).
Prawidłowa populacja komórek B jest poliklonalna i wykazuje ekspresję zakresu róŜnych cząsteczek
immunoglobulin. Większość powstających nowotworów z komórek B jest charakteryzowana przez proliferację
komórek monoklonalnych wykazujących ekspresję tylko jednego typu łańcucha lekkiego, natomiast ta sama
komórka moŜe wykazywać ekspresję więcej niŜ jednego typu łańcucha cięŜkiego. Ograniczona ekspresja
immunoglobulin przez poliferacje linii komórkowej monoklonalnych komórek B powoduje, Ŝe przeciwciała stają się
swoiste dla łańcuchów lekkich i cięŜkich immunoglobulin przydatnych do identyfikacji i oznaczania izotypowego tych
powstających nowotworów (6).
Zobacz dokument Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych firmy Dako lub następujące
części instrukcji do systemu detekcji IHC: 1) Zasada przeprowadzenia odczynu, 2) Niezbędne materiały
niedostarczone z zestawem, 3) Przechowywanie, 4) Przygotowanie preparatu, 5) Wykonanie barwienia, 6) Kontrola
jakości, 7) Rozwiązywanie problemów, 8) Interpretacja wyniku barwienia, 9) Ograniczenia metody.
Dostarczany
odczynnik
Gotowe do uŜycia królicze przeciwciała poliklonalne są dostarczane w postaci ciekłej w buforze zawierającym białko
stabilizujące i roztwór NaN3 o stęŜeniu 0,015 mol/L.
Immunogen
IgG wyizolowane z puli prawidłowych surowic ludzkich.
Swoistość
Przeciwciało reaguje z łańcuchami gamma ludzkiej immunoglobuliny IgG. Śladowe ilości innych przeciwciał usunięto
metodą absorpcji w fazie stałej.
Swoistość tych przeciwciał określono następująco:
Immunoelektroforeza krzyŜowa: Przy uŜyciu 12,5 µL roztworu stęŜonego przeciwciała na cm2 Ŝelu i 2 µL ludzkiego
osocza pojawia się wyłącznie osad IgG. Barwnik: Coomassie Brilliant Blue.
ELISA: W testach prowadzonych pośrednią metodą ELISA, z ludzkimi immunoglobulinami IgA lub IgM uŜywanymi
w charakterze antygenów powlekających, nie obserwuje się istotnej reaktywności. W testach ELISA z antygenem
uwięzionym między przeciwciałami (sandwich) nie obserwuje się istotnych reakcji z ludzkim osoczem pozbawionym IgG.
Środki ostroŜności
1. Odczynniki przeznaczone dla przeszkolonych UŜytkowników.
2. Opisywany produkt zawiera silnie toksyczny związek — azydek sodu (NaN3), w czystej postaci. StęŜenie NaN3
występujące w produkcie nie jest klasyfikowane jako niebezpieczne. Jednak w wyniku reakcji NaN3 z ołowiem lub
miedzią, wchodzącymi w skład instalacji kanalizacyjnych, mogą powstawać silnie wybuchowe azydki metali.
Przy usuwaniu resztek odczynnika uŜywać duŜych ilości wody do przepłukiwania, aby uniknąć gromadzenia się
azydków w instalacji kanalizacyjnej.
3. Podobnie jak w przypadku kaŜdego produktu otrzymywanego z materiału biologicznego, naleŜy stosować
odpowiednie procedury postępowania.
4. NaleŜy stosować właściwe wyposaŜenie ochronne, zabezpieczające przed kontaktem odczynnika ze skórą bądź
oczami.
5. Niewykorzystany odczynnik naleŜy usuwać zgodnie ze stosownymi przepisami lokalnymi i krajowymi.
Przechowywanie
Przechowywać w temperaturze 2–8 °C. Nie stosowa ć po upływie terminu waŜności podanego na opakowaniu.
JeŜeli odczynniki są przechowywane w warunkach innych niŜ podane na ulotce dołączanej do opakowania,
uŜytkownik powinien je zweryfikować. Nie ma jednoznacznych oznak świadczących o niestabilności produktu.
Z tego względu jednocześnie z badaniem próbek pochodzących od pacjentów, naleŜy wykonywać dodatnie i ujemne
próby kontrolne. W wypadku nieoczekiwanego wyniku odczynu, którego nie moŜna wyjaśnić róŜnicami
w procedurach laboratoryjnych, gdy podejrzewa się problem z przeciwciałem, naleŜy się skontaktować z działem
wsparcia technicznego firmy Dako.
(115778-002)
Dako Denmark A/S
IR512/PL/MNI/2009.12.04 s. 1/3
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Przygotowanie
próbek
oraz materiały
wymagane, ale
niedostarczane
Przeciwciała mogą być wykorzystane do znakowania utrwalonych formaliną skrawków zatapianych w parafinie.
Preparaty tkankowe naleŜy pociąć na skrawki o wymiarach około 4 µm.
Wymagane jest poddanie cieplnemu odmaskowaniu antygenu (HIER) z uŜyciem Dako PT Link (nr kat.
PT100/PT101). Szczegółowe instrukcje zawiera Instrukcja uŜytkownika aparatu PT Link. Optymalne wyniki uzyskuje
się w wyniku wstępnej obróbki tkanek przy uŜyciu roztworu EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH
(50x) (nr kat. K8000/K8004).
Skrawki zatapiane w parafinie: Do obróbki wstępnej utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków
tkankowych, zalecana jest procedura 3 w 1 z uŜyciem odczynnika Dako PT Link. Postępować według procedury
wstępnej obróbki tkanek, zamieszczonej w ulotce roztworu EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x)
(nr kat. K8000/K8004). Uwaga: Po przeprowadzeniu barwienia skrawki muszą być odwodnione, oczyszczone
zakryte za pomocą środka do trwałego zatapiania.
Odparafinowane skrawki: Do obróbki wstępnej utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków
tkankowych, zalecane jest uŜycie odczynnika Dako PT Link i przeprowadzenie procedury opisane dla skrawków
parafinowych. Po zakończeniu barwienia szkiełka naleŜy zatopić w wodnym lub trwałym środku do zatapiania.
W trakcie przygotowywania oraz podczas procedury znakowania immunohistochemicznego skrawki nie powinny
wyschnąć. W celu uzyskania lepszego przylegania skrawków do szkiełek podstawowych, zaleca się stosowanie
szkiełek FLEX IHC Microscope Slides (nr kat. K8020).
Wykonanie odczynu
oraz materiały
wymagane, ale
niedostarczane
Zalecanym systemem wizualizacji jest EnVision FLEX, High pH (Link) (nr kat. K8000). W systemie Autostainer Link
wstępnie zaprogramowano etapy odczynu i czasy inkubacji. Zalecana objętość uŜytego odczynika to 1 x 200 µL lub
2 x 150 µL na preparat. Szczegółowe informacje dotyczące wkładania szkiełek i odczynników przedstawiono w
Instrukcji uŜytkownika aparatu Autostainer Link. Jeśli protokoły nie są dostępne w uŜywanym systemie Autostainer,
naleŜy skontaktować się z działem wsparcia technicznego firmy Dako. Wszystkie procedury inkubacji naleŜy równieŜ
przeprowadzać w temperaturze pokojowej.
Optymalne warunki mogą się zmieniać w zaleŜności od rodzaju materiału i sposobu jego przygotowania i powinny
być określone indywidualnie w kaŜdym laboratorium. JeŜeli patolog oceniający preparat Ŝyczy sobie wybarwienia
innym natęŜeniu, czasy inkubacji oraz uŜycie szablonów wizualizacji EnVision FLEX/EnVision FLEX+ mogą
zostać zmienione. W celu uzyskania informacji dotyczącej zmiany programowania protokołu, naleŜy skontaktować
się z działem obsługi/obsługą techniczną firmy Dako. NaleŜy upewnić się, Ŝe działanie zmodyfikowanego protokołu
jest prawidłowe — w tym celu naleŜy ocenić, czy odczyn jest taki jak opisany w części „Charakterystyka
wydajnościowa”.
Zalecane jest barwienie kontrastowe hematoksyliną za pomocą EnVision( FLEX Hematoxylin (Link) (nr kat. K8008).
Zaleca się stosowanie bezwodnego, trwałego środka do zatapiania.
Równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów naleŜy wykonywać dodatnie i ujemne próby
kontrolne z uŜyciem identycznego protokołu. Dodatnia kontrola tkankowa powinna obejmować migdałki, natomiast
we wszystkich dodatnich preparatach komórki/struktury powinny wskazywać odczyn reakcji taki jak opisany dla tej
tkanki w części „Charakterystyka wydajnościowa”. Zalecana kontrola ujemna to FLEX Negative Control,
Rabbit (Link) (nr kat. IR600).
Interpretacja odczynu
Charakterystyka
wydajnościowa
Odczyn komórkowy ma charakter cytoplazmatyczny i/lub błonowy.
Tkanki prawidłowe: Wykazano reaktywność przeciwciał anty-IgG z immunoglobulinami IgG w komórkach B (7,8),
w komórkach plazmatycznych szpiku kostnego (w obecności zakaŜenia) (9), sutka (10), ślinianek (11) i migdałków
(pod nabłonkiem mieszka i w grudkach chłonnych) (11,12). IgG wykrywano takŜe, w niewielkich ilościach (13),
w komórkach plazmatycznych wyrostka robaczkowego i migdałków(9), jelita cienkiego (13) i okręŜnicy.
Tkanki nieprawidłowe: W dwóch badaniach przebadano 33 (2) i 29 (3) tkanek utrwalonych w formalinie powstających
nowotworów z komórek plazmatycznych róŜnych typów. Odczyn dodatni z przeciwciałami wykazał dobrą korelację
z monoklonalnymi immunoglobulinami w surowicy lub moczu. Wystąpiło wyraźne rozróŜnienie między reaktywnym
rozrostem komórek i powstawaniem nowotworu z monoklonalnych komórek B, gdy uŜywane było przeciwciało wraz
z panelem innych przeciwciał do immunoglobulin (1), a zwłaszcza z przeciwciałami do łańcuchów lekkich (4).
Piśmiennictwo
1. Taylor CR, Burns J. The demonstration of plasma cells and other immunoglobulin-containing cells in formalinfixed, paraffin-embedded tissues using peroxidase-labelled antibody. J Clin Pathol 1974;27:14-20.
2. Taylor CR, Mason DY. The immunohistological detection of intracellular immunoglobulin in formalin-paraffin
sections from multiple myeloma and related conditions using the immunoperoxidase technique. Clin exp Immunol
1974;18:417-29.
3. Taylor CR, Russell R, Chandor S. An immunohistologic study of multiple myeloma and related conditions, using
an immunoperoxidase method. Am J Clin Pathol 1978;70:612-22.
4. Beschorner R, Horny H-P, Petrusch UR, Kaiserling E. Frequent expression of haemopoietic and nonhaemopoietic antigens by reactive plasma cells: an immunohistochemical study using formalin-fixed, paraffinembedded tissue. Histol Histopathol 1999;14:805-12.
5. Klein J, Hořejši V. Immunology. 2nd ed. Abingdon (UK): Blackwell Science Ltd; 1999. p. 226-7, 238-46.
6. Leong ASY, Cooper K, Leong FJWA. Manual of diagnostic antibodies for immunohistology. London: Oxford
University Press; 1999. p. 217-9.
7. Nadji M, Morales AR. Immunoperoxidase techniques, a practical approach to tumor Diagnosis. Chicago:
American Society of Clinical Pathologists Press 1986; 11
8. Boenisch T, Farmilo AJ, Stead RH. Handbook: Immunochemical Staining Methods. 3rd Edition. DakoCytomation
2001.
9. Stul MS, Logghe GN, Bergmans GB, Vanvuchelen JK, Louwagie AC. Discordances of cytoplasmic
immunoglobulin G staining with the immunoperoxidase technic in plasma cells from bone marrow, tonsils and
appendix. Amer J Clin Pathol 1985; 83(6):725.
(115778-002)
Dako Denmark A/S
IR512/PL/MNI/2009.12.04 s. 2/3
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
10. Hsu S-M, Hsu P-L, Nayak RN. Warthin’s tumor: An immunohistochemical study of its lymphoid stroma. Human
Pathol 1981; 12(3):251.
11. Curran RC, Gregory J. Demonstration of immunoglobulin in cryostat and paraffin sections of human tonsil by
immunofluorescence and immunoperoxidase techniques: Effects of processing on immunohistochemical
performance of tissues and on the use of proteolytic enzymes to unmask antigens in sections. J Clin Pathol
1978; 31:974.
12. Curran RC, Jones EL. Immunoglobulin-containing cells in human tonsils as demonstrated by immunohistochemistry. Clin Exp Immunol 1977; 28:103.
13. Brandtzaeg P, Baklien K. Immunoglobulin-producing cells in the intestine in health and disease. Clin
Gastroenterol 1976; 5(2):251.
Objaśnienie symboli
Numer katalogowy
Temperatura przechowywania
ZuŜyć przed
Wyrób medyczny do
diagnostyki in vitro
Zawartość wystarcza na <n>
testów
Producent
Sprawdzić w instrukcji
stosowania
Numer serii
(115778-002)
Dako Denmark A/S
IR512/PL/MNI/2009.12.04 s. 3/3
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17