PODSTAWY BIOTECHNOLOGII WYKORZYSTANIE BAKTERII
Transkrypt
PODSTAWY BIOTECHNOLOGII WYKORZYSTANIE BAKTERII
PODSTAWY BIOTECHNOLOGII WYKORZYSTANIE BAKTERII FERMENTACJI MLEKOWEJ W PROCESACH PRZEMYSŁOWYCH (2h) Część praktyczna 1. Sporządzenie i obserwacja preparatów mikroskopowych z następujących materiałów: - próbka zsiadłego mleka - kefir - jogurt Technika sporządzania preparatów z produktów mlecznych: • • • • • • • • Wykonać cienki rozmaz. Preparat wysuszyć na powietrzu. (nie ogrzewać nad płomieniem!) Utrwalić wysuszony rozmaz w metanolu przez 3 min. i odtłuścić w eterze przez kilkanaście sekund. Spłukać poprzez zanurzenie preparatu w zlewce z dużą ilością wody destylowanej. Wysuszyć na powietrzu. Barwić fuksyną około 2 min. Fuksynę spłukać delikatnie wodą destylowaną. Preparat wysuszyć na powietrzu a następnie oglądać pod immersją. 2. Analiza mikrobiologiczna kiszonek: a) Przy pomocy pH-metru zmierzyć pH próbek (zalewa z ogórków kiszonych, sok z kiszonej kapusty, żurek) b) Z soku kapusty kwaszonej oraz zalewy z ogórków wykonać preparat mikroskopowy barwiony metodą Grama. Na podstawie obrazu mikroskopowego i pH ocenić jakość kiszonki. Kryteria oceny mikrobiologicznej kiszonek : Stosunek drożdży do bakterii pH Kiszonka bardzo dobra: 1: 80 do 200 3,5 Stosunek drożdży do bakterii pH Kiszonka dobra : 1: 3 do 30 4,5 Przy większej ilości drożdży i wyższym pH kiszonki są złej jakości. a) Oznaczenie zawartości kwasu mlekowego 10 cm3 roztworu pofermentacyjnego przenieść do kolby miarowej o poj. 100 cm3 i uzupełnić wodą destylowaną do kreski. Do 10 cm3 rozcieńczonego roztworu dodać 10 cm3 roztworu BaCl2 (ODCZYNNIK A), wymieszać, następnie dodać 10 cm3 NaOH (ODCZYNNIK B), ponownie wymieszać a po dodaniu 5 cm3 roztworu ZnSO4 (ODCZYNNIK C) i wymieszaniu przesączyć przez bibułę. 10 cm3 klarownego filtratu wprowadzić do kolby miarowej o poj. 100 cm3, dodać 10 3 cm roztworu FeCl3 (ODCZYNNIK D) i uzupełnić wodą destylowaną do 100 cm3, przed użyciem odczynnik rozcieńczyć wodą w stosunku 1:5), uzupełnić wodą do kreski. Pomiar absorbancji roztworu wykonać przy długości fali 410 nm. Pomiar kolorymetryczny należy wykonać przed upływem 30 min. od dodania odczynnika D. Przygotowanie krzywej wzorcowej: Przygotować roztwory zawierające 0,0; 0,5; 1,5; 2,5; 3,5; 4,5 g kwasu mlekowego w 100 cm3. Następnie 10 cm3 każdego z roztworu przenieść do kolby miarowej o poj. 100 cm3 i uzupełnić wodą destylowaną do kreski. Do 10 cm3 rozcieńczonych roztworów standardowych dodać odczynniki A, B, C w ilościach podanych wyżej, wymieszać i przesączyć. Do kolby miarowej o poj. 100 cm3 pobrać 10 cm3 przesączu i dodać 10 cm3 rozcieńczonego odczynnika D, uzupełnić wodą destylowaną do kreski i mierzyć absorbancję roztworu wobec próby odczynnikowej jak poprzednio. Wykreślić krzywą wzorcową odkładając na osi rzędnych wartości absorbancji a na osi odciętych zawartość kwasu mlekowego w roztworze. Zawartość kwasu mlekowego w roztworze badanym wyrażoną w g/100 cm3 wyznaczyć z krzywej wzorcowej. Obserwacje, wyniki i wnioski należy zamieścić w zeszycie w formie sprawozdania Literatura: 1. Gołębiowska J., Kaszubiak H., Pędziwilk Z., Kaczmarek W.: Ćwiczenia z mikrobiologii, Poznań 2001. 2. Ilczuk Z.: Ćwiczenia z mikrobiologii przemysłowej, UMCS, Lublin, 1997. 3. Sobczak E.: Teoria i ćwiczenia z mikrobiologii ogólnej i technicznej, skrypt SGGW, Warszawa, 1993. 4. Szostak – Kotowa J.: Ćwiczenia z mikrobiologii ogólnej i przemysłowej, Wyd. Akademii Ekonomicznej w Krakowie, Kraków 2002. Morfologia wybranych bakterii fermentacji mlekowej Bifidobacterium bifidum Lactobacillus bulgaricus Streptococcus thermophilus Lactobacillus acidophilus Leuconostoc mesenteroides Lactobacillus casei Lactococcus lactis