Specsheet Template CE

Monoclonal Mouse Anti-Human CD34 Class III, Klon BIRMA-K3
Nr katalogowy C 7238
Nr katalogowy F 7081
Nr katalogowy R 7125
Nr katalogowy C 7126
Przeznaczenie
APC-Conjugated
FITC-Conjugated
RPE-Conjugated
RPE-Cy5-Conjugated
Do diagnostyki in vitro.
C 7238, F 7081, R 7125 i C 7126 są przeznaczone do użycia w cytometrii przepływowej. CD34 występuje na
wczesnych hematopoetycznych komórkach pnia i komórkach progenitorowych a także na komórkach
endotelialnych. Przeciwciała przeciw CD34 mogą być używane do oznaczania ilościowego i oczyszczania
progenitorowych komórek hematopoetycznych w transplantologii i do celów naukowych (1-6). CD34 jest
użytecznym markerem komórek pnia i progenitorowych, wykorzystywanym także w klasyfikacji białaczek.
Interpretacja badań musi być przeprowadzona przez wykwalifikowanego patologa z uwzględnieniem historii
choroby i innych testów diagnostycznych.
Wprowadzenie
CD34 jest jednołańcuchowym, przezbłonowym białkiem o masie cząsteczkowej około 116 KD, obecnym na
niedojrzałych progenitorowych komórkach hematopetycznych, kapilarnych komórkach endotelialnych,
zarodkowych fibroblastach i rzadziej komórkach glejowych tkanki nerwowej (1, 5). Ekspresja CD34 osiąga
najwyższy poziom na najmłodszych komórkach progenitorowych i spada w miarę ich dojrzewania (2, 4). CD34
jest antygenem różnicowania leukocytów związanym bardziej z ich stopniem zróżnicowania niż z
poszczególnymi liniami leukocytów. Większość niedojrzałych prekursorów limfocytów B (CD19+/CD10+/TdT+)
są CD34+ (2, 4, 5). Niedojrzałe prekursory limfocytów T także wykazują ekspresję TdT i CD34 (5). Normalne
limfocyty krwi obwodowej, monocyty, granulocyty i płytki nie wykazują ekspresji CD34 (4). Około 60% ostrych
białaczek limfoblastycznych i 40% ostrych białaczek mieloblastycznych (AML) i 1% do 5% ostrych białaczek Tkomórkowych wykazuje ekspresję CD34 (4). Przewlekłe białaczki limfatyczne, chłoniaki i szpiczaki są CD34
negatywne (2, 4, 5)
W zależności od swoistości epitopowej uwarunkowanej wrażliwością na swoiste enzymy, przeciwciała
monoklonalne przeciw CD34 można podzielić na trzy główne klasy: klasę I, klasę II i klasę III. Np., przeciwciała
monoklonalne klasy III rozpoznają epitop CD34 odporny na neuraminidazę, chymopapainę i glikoproteazę (1,
3).
Odczynnik dostarczony
Koniugaty anty CD34, C 7238, F 7081, R 7125 i C 7126, uzyskano z oczyszczonego mysiego przeciwciała
monoklonalnego. Koniugaty są dostarczone w postaci płynnej w buforze zawierającym 1% bydlęcej albuminy
(BSA) i 15 mmol/L NaN3, pH 7.2. Każda probówka C 7238 zawiera 50 testów (10 L koniugatu dla ponad 106
komórek KG-1a ). Każda probówka F 7081, R 7125 i C 7126 zawiera 100 testów (10 L koniugatu dla ponad
106 komórek KG-1a).
Izotyp: IgG1, kappa. Stężenie koniugatu mg/L: zob. opis na fiolce.
Koniugaty anty CD34
Nr
katologowy
Nr katalogowy
Fluorochrom
kontroli negatywnej
przeciwciała
F 7081
FITC (izotiocyjanian fluoresceiny izomer 1)
X 0927
R 7125
RPE (R-fikoerytryna)
X 0928
C 7126
RPE-Cy5 (R-fikoerytryna-cyanina 5)
X 0955
C 7238
APC (allofikocyanina)
X 0968
Immunogen
Komórki KG-1a (3).
Swoistość
Anti-CD34, BIRMA-K3, zostały zaakceptowane przez Sixth International Workshop i Conference on Human
Leucocyte Differentiation Antigens (Kobe 1996) oraz badane przez różne laboratoria, które potwierdziły ich
reaktyw- ność z CD34 i epitopem klasy III (1).
W cytometri przepływowej przeciwciało znakuje komórki KG-1a (linia prymitywnych komórek białaczki
szpikowej reagujących z CD34) (3).
Środki ostrożności
1. Do stosowania przez osoby przygotowane zawodowo.
2. Produkt zawiera azydek sodowy (NaN3 ), odczynnik chemiczny silnie toksyczny w czystej postaci. W
stężeniu obecnym w produkcie, chociaż nie klasyfikowanym jako niebezpieczne, azydek sodowy może
reagować z elementami kanalizacji z miedzi lub ołowiu tworząc silnie wybuchowe azydki tych metali. Przy
usuwaniu odpadów przepłukać spływ dużą ilością wody, aby uniknąć tworzenia się azydków.
3. Jak w przypadku każdego materiału biologicznego należy stosować odpowiednie procedury.
Przechowywanie
Przechowywać bez dostępu światła, w temp. 2-8 C. Nie używać po upłynięciu daty ważności określonej na
probówce. Jeżeli odczynnik jest przechowywany w innych warunkach niż wymienione, ich jakość musi zostać
zweryfikowana przez użytkownika. Nie oznacza to niestabilności produktu. Jednak, równocześnie z materiałem
pochodzącym od chorego, powinny być wykonane kontrole pozytywna i negatywna. W przypadku wystąpienia
(111613-002)
C 7238/F 7081/R 7125/C 7126/PL/TIA/010702 str. 1/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17
nieoczekiwanych wyników barwienia, które nie mogą być wytłumaczone wariantami procedur laboratoryjnych
oraz w przypadku podejrzenia problemów z przeciwciałem, prosimy o kontakt z naszym serwisem technicznym.
Procedura barwienia
1.
Pobrać krew żylną do probówki zawierającej antykoagulant.
2.
Wyizolować komórki jednojądrzaste przez wirowanie na medium izolacyjnym. Alternatywnie, zlizować
erytrocyty po kroku 6.
3.
Dwukrotnie płukać komórki jednojądrzaste w RPMI 1640 lub PBS, pH 7.2-7.4.
4.
Zmieszać 100 L zawiesiny komórek z 10 L znakowanych fluorochromem anty-CD34.
5.
Użyć nieaktywnych przeciwciał monoklonalnych tego samego izotopu i znakowanych tym samym
fluorochromem jako kontroli negatywnej (zob. tabela)
6.
Inkubować bez dostępu światła w temp. 4C przez 30 minut.
7.
Dwukrotnie płukać w PBS zawierającym 2% BSA. Zawiesić komórki w odpowiednim dla cytometrii
przepływowej płynie, np. 0.3 mL 0.01 mol/L PBS, pH 7.4.
8.
Przeprowadzić analizę cytometryczną.
Zaleca się stosowanie pozytywnej i negatywnej kontroli. Ponieważ koniugaty fluorochromów są wrażliwe na światło,
próbki powinny być chronione przed światłem w czasie procedury barwienia i do czasu analizy.
Swoiste ograniczenia
Wykazano, że wiązanie przeciwciała monoklonalnego CD34 może być ograniczone przez utrwalacze obecne w
płynach lizujących erytrocyty. Sugeruje to uszkodzenie epitopów CD34. Dlatego utrwalacze powinny być
używane ostrożnie jeżeli przeciwciało monklonalne jest wykorzystywane do badń ilościowych (7, 8). Dodatkowo
zaobserwowano, że koniugaty RPE-Cy5 mogą wiązać się z monocytami tworząc tło (9).
Piśmiennictwo
1.
Nishio H, Tada J, Hashiyama M, Hirn J, Ingles-Esteve J, Suda T. MC7. CD34 workshop panel report. In:
Kishimoto T, Kikutani H, von dem Borne AEG, Goyert SM, Mason DY, Miyasaka M, et al., editors.
Leucocyte typing VI. White cell differentiation antigens. Proceedings of the 6th International Workshop
and Conference; 1996 Nov 10-14; Kobe, Japan. New York, London: Garland Publishing Inc.; 1997. p.
974-84.
2.
Civin CI, Trischmann TM, Fackler MJ, Bernstein ID, Bühring HJ, Campos L, et al. M7.1. Report on the
CD34 cluster workshop. In: Knapp W, Dörken B, Gilks WR, Rieber EP, Schmidt RE, Stein H, et al.,
editors. Leukocyte typing IV. White cell differentiation antigens. Proceedings of the 4th International
Workshop and Conference; 1989 Feb 21-25; Vienna, Austria. Oxford, New York, Tokyo: Oxford
University Press; 1989. p. 818-25.
3.
Höffkes H-G, Lowe JA, Pedersen RO, Schmidkte G, McDonald DF. BIRMA-K3, a new monoclonal
antibody for CD34 immunophenotyping and stem and progenitor cell assay. J Hematother 1996;5:261-70.
4.
Civin CI, Strauss LC, Fackler MJ, Trischmann TM, Wiley JM, Loken MR. Positive stem cell selection basic science. Prog Clin Biol Res 1990;333:387-402.
5.
Krause DS, Fackler MJ, Civin CI, May WS. CD34: structure, biology, and clinical utility (review). Blood
1996;87:1-13.
6.
Campos L, Guyotat D, Archimbaud E, Devaux Y, Treille D, Larese A, et al. Surface marker expression in
adult acute myeloid leukaemia: correlations with initial characteristics, morphology and response to
therapy. Br J Haematol 1989;72:161-6.
7.
Macey MG, McCarthy DA, van Agthoven A, Newland AC. How should CD34+ cells be analysed? A study
of three classes of antibody and five leucocyte preparation procedures. J Immunol Methods
1997;204:175-88.
8.
Serke S, van Lessen A, Huhn D. Quantitative fluorescence flow cytometry: a comparison of the three
techniques for direct and indirect immunofluorescence. Cytometry 1998;33:179-87.
9.
van Vugt MJ, van den Herik-Oudijk IE, van de Winkel JGJ. Binding of PE-CY5 conjugates to the human
high-affinity receptor for IgG (CD64). Blood 1996;88:2358-61.
Objaśnienia symboli
(111613-002)
Numer katalogowy
Temperatura przechowywania
Zużyć przed
Wyrób medyczny do
diagnostyki in vitro
Chronić przed silnym światłem
(sprawdź w zasadach
przechowywania)
Producent
Sprawdź w instrukcji
stosowania
Numer serii
C 7238/F 7081/R 7125/C 7126/PL/TIA/010702 str. 2/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17