62798_Platelia Candida Ag - Bio-Rad

MUELLER – HINTON + NaCl
56136
PODŁOŻE DO OZNACZANIA WRAŻLIWOŚCI GRONKOWCÓW NA OKSACYLINĘ
1- ZASTOSOWANIE
Wyróżniamy dwa mechanizmy oporności gronkowców na β-laktamy:
oporność związana z produkcją penicylinazy
oporność na metycylinę (oksacylinę i pochodne) związana z modyfikacją miejsca docelowego działania
Standaryzowane podłoże Mueller-Hinton z NaCl jest zalecanym do oznaczania wrażliwości na metycylinę (1).
2- ZASADA METODY
Suplementacja chlorkiem sodu podnosi osmolarność podłoża Mueller-Hinton. Czynnik ten wpływa na promocję ekspresji
oporności na metycylinę (oraz oporności na oksacylinę i pochodne) .
3- POSTAĆ PODŁOŻA
•
Podłoże gotowe do użycia (do rozlania):
butelki 6 x 100 ml (MH+NaCl)
nr kat. 56136
4- PODSTAWOWE SKŁADNIKI (g/l wody destylowanej)*
Podłoże Mueller-Hinton +NaCl przygotowuje się tak jak podłoże Mueller-Hinton i dodaje NaCl (2).
Wyciąg mięsny
2
Hydrolizat kazeiny
17.5
Skrobia kukurydziana
1.5
Agar
17
NaCl
4%
Końcowe pH:
7.3 ± 0.1
2+
Ca
2+
Mg
20-25 mg/L
10-12.5 mg/L
*skład zaadaptowany w celu podwyższenia jakości podłoża.
5- PRZECHOWYWANIE
•
Podłoże gotowe użycia (do rozlania): w temperaturze +2 do 25°C.
Data ważności i numer serii znajduje się na opakowaniu.
6- PROCEDURA
Materiał:
•
Materiał dostarczony: podłoże Mueller Hinton + NaCl
•
Materiał nie dostarczony:
Standard gęstości równy 0,5 MacFarlanda
Sprzęt laboratoryjny konieczny do oznaczania antybiotykowrażliwości met. dyfuzyjno-krążkową
Krążki z 5 μg oksacyliny (nr kat 66848).
Uwaga: Należy postępować zgodnie z najnowszymi wytycznymi [CA-SFM (1)], dotyczącymi wykonywania testów wrażliwości,
oraz z zasadami bezpieczeństwa pracy z czynnikami zakaźnymi.
Przygotowanie podłoża:
Przed użyciem upłynnić podłoże we wrzącej łaźni wodnej i zawartość butelki wylać na płytki Petriego, warstwa agaru powinna
mieć grubość 4 mm. Wysuszyć płytki przez 30 minut w temp. 37°C.
Inokulacja poprzez wylanie inokulum na powierzchnię podłoża (metoda rekomendowana przez CA-SFM):
Z czystej, młodej hodowli na agarze, przygotować zawiesinę bakterii, o gęstości 0.5 w skali McFarlanda. Protokół standaryzacji
inokulum zawierają standardy CA-SFM.
Przed użyciem doprowadź podłoże do temp. pokojowej (+18-30°C).
Jeśli na powierzchni występuje woda kondensacyjna, przed użyciem wysuszyć płytki przez 10-30 minut w cieplarce w temp.
35°C.
Postępując wg procedury podanej przez CA-SFM, z wystandaryzowanego wyjściowego inokulum, sporządza się
rozcieńczenie bakterii, o gęstości właściwej dla badanego szczepu Staphylococcus.
Otrzymaną zawiesiną bakterii zalewa się całą powierzchnię podłoża, poczym zbiera się nadmiar zawiesiny.
Inokulacja poprzez pokrycie podłoża zawiesiną bakterii lub metodą zalewową. W razie konieczności usuń nadmiar
zawiesiny.
Umieść krążek z 5 μg oksacyliny na płytce.
Inkubacja:
Należy postępować ściśle wg aktualnych zaleceń CA-SFM.
0
Niektóre szczepy gronkowców mogą słabiej rosnąć po 24-godzinnej inkubacji w 37 C na podłożu z wysokim stężeniem soli. W
takim wypadku, należy wydłużyć inkubację do 48 godzin.
1
7- ODCZYT WYNIKÓW
Interpretacja testu wrażliwości wykonanego metodą dyfuzyjno-krążkową jest na bieżąco aktualizowana w Standardach CASFM.
8- KONTROLA JAKOŚCI
•
Podłoże gotowe do użycia jest bursztynowe.
•
Wzrost na podłożu Mueller-Hinton + NaCl kontrolowany jest z użyciem podanych szczepów wzorcowych:
SZCZEP
Staphylococcus aureus CIP 107399
WRAŻLIWOŚĆ DLA KRĄŻKA Z 5 μg OKSACYLINY
oporny
9- KONTROLA JAKOŚCI PRODUCENTA
Każdy produkt Bio-Rad został przygotowany zgodnie z systemem jakości, poczynając od materiałów wyjściowych, aż do
ostatecznego produktu komercyjnego.
Każda seria ostatecznego produktu podlega oznaczeniu kontrolnemu, i jest dopuszczona do użytku, jeśli spełnia wymagane
kryteria. Bio-Rad posiada protokoły produkcji i kontroli jakości każdej serii.
10- OGRANICZENIA METODY
•
Aby uzyskać powtarzalne wyniki, zawsze należy używać czystych, młodych hodowli.
•
Niektóre szczepy bakterii mogą nie rosnąć na tym podłożu z powodu wyższych wymagań odżywczych. Odpowiednie
podłoża należy używać do badania niektórych bakterii: HTM dla Haemophilus sp., Mueller-Hinton z 5% krwią baranią dla
Streptococcus pneumoniae i paciorkowców beta-hemolizujących, GC Agar dla Neisseria gonorrhoeae.
•
Uzyskanie prawidłowego wyniku zależy od szeregu czynników (wielkości inokulum, czasu i warunków inkubacji, etc).
Dlatego ważne jest postępowanie zgodne z najnowszymi zaleceniami (CA-SFM).
•
Obecność mikrokoloni wewnątrz strefy zahamowania wzrostu świadczy o heterogennej oporności występującej u
niektórych szczepów Staphylococcus.
11- BIBLIOGRAFIA
1. Communiqué périodique du Comité de l’Antibiogramme de la Société Française de Microbiologie (http://www.sfm.asso.fr)
2. International Journal of Antimicrobial Agents. 21 (2003) 364-391.
3. World Heath Organization Expert Committee on Biological Standardization. 1981. Technical report series 673 (Révision
1981). W.H.O., Geneva – p156-192.
Bio-Rad
3, boulevard Raymond Poincaré
92430 Marnes-la-Coquette France
Tel. : +33 (0) 1 47 95 60 00
Fax : +33 (0) 1 47 41 91 33
03/2009
2