FLEX Polyclonal Rabbit Anti-Human Kappa Light Chains Ready

FLEX
Polyclonal Rabbit
Anti-Human
Kappa Light Chains
Ready-to-Use
(Link)
Nr. kat. IR506
Przeznaczenie
Do stosowania w diagnostyce in vitro.
Przeciwciała FLEX Polyclonal Rabbit Anti-Human Kappa Light Chains, Ready-to-Use, (Link) są przeznaczone do
stosowania w immunohistochemii w aparatach Autostainer Link. Przeciwciała te są przydatne w identyfikacji
komórek plazmatycznych i pokrewnych komórek limfoidalnych zawierających łańcuchy lekkie typu kappa. Są
uŜytecznym narzędziem do klasyfikacji pacjentów z gammopatią monoklonalną (2) i amyloidozą (3, 4). Dodatkowo
przeciwciała mogą być wykorzystane do róŜnicowania nowotworowych, monoklonalnych proliferacji z reaktywnego
rozrostu komórek B (5-7). Interpretacja kliniczna dodatniego lub ujemnego odczynu musi być uzupełniona przez
ocenę morfologiczną, wykonanie odpowiednich prób kontrolnych i interpretowana przez doświadczonego patologa w
kontekście historii choroby pacjenta i innych badań diagnostycznych.
Streszczenie
i informacje ogólne
Ludzkie immunoglobuliny składają się głównie z dwóch identycznych łańcuchów cięŜkich (masa cząsteczkowa ok.
50 000) i dwóch identycznych łańcuchów lekkich (masa cząsteczkowa ok. 20 000). Cztery łańcuchy są związane
wiązaniami kowalencyjnymi za pomocą wiązań dwusiarczkowych. Łańcuchy lekkie są typu kappa lub lambda. Pięć
immunoglobulin, IgA, IgD, IgE, IgG i IgM, róŜni się w zaleŜności od łańcuchów cięŜkich. Immunoglobuliny IgA i IgM
występują takŜe w formach polimerycznych (8).
W jednej komórce B wytwarzane są łańcuchy lekkie tylko jednego typu: albo lambda, albo kappa. W populacji
poliklonalnej stosunek komórek B typu kappa do lambda wynosi 2:1. Występowanie mieszaniny typów komórek
łańcuchów lekkich kappa i lambda sugeruje poliklonalność i reaktywną lub nienowotworową proliferację komórek B
(9). Choroby takie jak szpiczak mnogi i chłoniak z komórek B są charakteryzowane przez proliferację
monoklonalnych nowotworowych komórek plazmatycznych wytwarzających tylko jeden typ łańcuchów lekkich. Dzięki
temu wykazanie populacji komórek ograniczonych łańcuchami lekkimi kappa lub lambda jest uŜyteczne w diagnozie
histopatologicznej tych chorób (4). Podstawowa amyloidoza AL (amyloidowy łańcuch lekki) jest takŜe zaburzeniem
komórek plazmatycznych, w którym wykazanie monotypowego lekkiego łańcucha kappa lub lambda w złogach
amyloidowych jest istotne pod kątem diagnostycznym i odróŜnia tę chorobę od amyloidozy AA, w której nie
występuje zjawisko odkładania się łańcuchów lekkich immunoglobulin (3).
Zobacz dokument Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych firmy Dako lub następujące
części instrukcji do systemu detekcji IHC: 1) Zasada przeprowadzenia odczynu, 2) Niezbędne materiały
niedostarczone z zestawem, 3) Przechowywanie, 4) Przygotowanie preparatu, 5) Wykonanie barwienia, 6) Kontrola
jakości, 7) Rozwiązywanie problemów, 8) Interpretacja wyniku barwienia, 9) Ograniczenia metody.
Dostarczany
odczynnik
Gotowe do uŜycia królicze przeciwciała poliklonalne są dostarczane w postaci ciekłej w buforze zawierającym białko
stabilizujące i roztwór NaN3 o stęŜeniu 0,015 mol/L.
Immunogen
Poliklonalne łańcuchy lekkie typu kappa izolowane z puli ludzkiej surowicy.
Swoistość
Przeciwciała reagują z niezwiązanymi łańcuchami kappa oraz z łańcuchami kappa w nienaruszonych cząsteczkach
immunoglobulin. Ślady zanieczyszczeń przeciwciałami usunięto przez absorpcję w fazie stałej z innymi białkami
ludzkiego osocza.
Testy swoistości; barwienie błękitem Coomassie Brilliant Blue:
Podwójna immunodyfuzja: Nie stwierdzono reakcji z łańcuchami lambda ani gamma przy uŜyciu 15 µL stęŜonego
przeciwciała z 15 µL IgG typu lambda.
Immunoelektroforeza krzyŜowa: Zaobserwowano tylko osady związane z łańcuchami kappa przy uŜyciu stęŜenia
przeciwciała 12,5 µL na cm2 Ŝelu w badaniach z 2 µL ludzkiego osocza lub 2 µL puli stęŜonego moczu pacjentów z
białkomoczem cewkowym.
Środki ostroŜności
1. Odczynniki przeznaczone dla przeszkolonych UŜytkowników.
2. Opisywany produkt zawiera silnie toksyczny związek — azydek sodu (NaN3), w czystej postaci. StęŜenie NaN3
występujące w produkcie nie jest klasyfikowane jako niebezpieczne. Jednak w wyniku reakcji NaN3 z ołowiem lub
miedzią, wchodzącymi w skład instalacji kanalizacyjnych, mogą powstawać silnie wybuchowe azydki metali. Przy
usuwaniu resztek odczynnika uŜywać duŜych ilości wody do przepłukiwania, aby uniknąć gromadzenia się
azydków w instalacji kanalizacyjnej.
3. Podobnie jak w przypadku kaŜdego produktu otrzymywanego z materiału biologicznego, naleŜy stosować
odpowiednie procedury postępowania.
4. NaleŜy stosować właściwe wyposaŜenie ochronne, zabezpieczające przed kontaktem odczynnika ze skórą bądź
oczami.
5. Niewykorzystany odczynnik naleŜy usuwać zgodnie ze stosownymi przepisami lokalnymi i krajowymi.
(115806-002)
Dako Denmark A/S
IR506/PL/MNI/2009.12.04 s. 1/3
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Przechowywanie
Przechowywać w temperaturze 2–8°C. Nie stosowa ć po upływie terminu waŜności podanego na opakowaniu. JeŜeli
odczynniki są przechowywane w warunkach innych niŜ podane na ulotce dołączanej do opakowania, uŜytkownik
powinien je zweryfikować. Nie ma jednoznacznych oznak świadczących o niestabilności produktu. Z tego względu
jednocześnie z badaniem próbek pochodzących od pacjentów, naleŜy wykonywać dodatnie i ujemne próby
kontrolne. W wypadku nieoczekiwanego wyniku odczynu, którego nie moŜna wyjaśnić róŜnicami w procedurach
laboratoryjnych, gdy podejrzewa się problem z przeciwciałem, naleŜy się skontaktować z działem wsparcia
technicznego firmy Dako.
Przygotowanie
próbek
oraz materiały
wymagane, ale
niedostarczane
Przeciwciała mogą być wykorzystane do znakowania utrwalonych formaliną skrawków zatapianych w parafinie.
Preparaty tkankowe naleŜy pociąć na skrawki o wymiarach około 4 µm.
Wymagane jest poddanie cieplnemu odmaskowaniu antygenu (HIER) z uŜyciem Dako PT Link (nr kat.
PT100/PT101). Szczegółowe instrukcje zawiera Instrukcja uŜytkownika aparatu PT Link. Optymalne wyniki uzyskuje
się w wyniku wstępnej obróbki tkanek przy uŜyciu roztworu EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH
(50x) (nr kat. K8000/K8004).
Skrawki zatapiane w parafinie: Do obróbki wstępnej utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków
tkankowych, zalecana jest procedura 3 w 1 z uŜyciem odczynnika Dako PT Link. Postępować według procedury
wstępnej obróbki tkanek, zamieszczonej w ulotce roztworu EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x)
(nr kat. K8000/K8004). Uwaga: Po przeprowadzeniu barwienia skrawki muszą być odwodnione, oczyszczone
zakryte za pomocą środka do trwałego zatapiania.
Odparafinowane skrawki: Do obróbki wstępnej utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków
tkankowych, zalecane jest uŜycie odczynnika Dako PT Link i przeprowadzenie procedury opisane dla skrawków
parafinowych. Po zakończeniu barwienia szkiełka naleŜy zatopić w wodnym lub trwałym środku do zatapiania.
W trakcie przygotowywania oraz podczas procedury znakowania immunohistochemicznego skrawki nie powinny
wyschnąć. W celu uzyskania lepszego przylegania skrawków do szkiełek podstawowych, zaleca się stosowanie
szkiełek FLEX IHC Microscope Slides (nr kat. K8020).
Wykonanie odczynu
oraz materiały
wymagane, ale
niedostarczane
Zalecanym systemem wizualizacji jest EnVision FLEX, High pH (Link) (nr kat. K8000). W systemie Autostainer Link
wstępnie zaprogramowano etapy odczynu i czasy inkubacji. Zalecana objętość uŜytego odczynika to 1 x 200 µL lub
2 x 150 µL na preparat. Szczegółowe informacje dotyczące wkładania szkiełek mikroskopowych i odczynników
przedstawiono w Instrukcji uŜytkownika aparatu Autostainer Link. Jeśli protokoły nie są dostępne w uŜywanym
systemie Autostainer, naleŜy skontaktować się z działem wsparcia technicznego firmy Dako. Wszystkie procedury
inkubacji naleŜy równieŜ przeprowadzać w temperaturze pokojowej.
Optymalne warunki mogą się zmieniać w zaleŜności od rodzaju materiału oraz sposobu jego przygotowania i
powinny być określone indywidualnie w kaŜdym laboratorium. JeŜeli patolog oceniający preparat Ŝyczy sobie
wybarwienia innym natęŜeniu, czasy inkubacji oraz uŜycie szablonów wizualizacji EnVision FLEX/EnVision
FLEX+ mogą zostać zmienione. W celu uzyskania informacji dotyczącej zmiany programowania protokołu, naleŜy
skontaktować się z działem obsługi/obsługą techniczną firmy Dako. NaleŜy upewnić się, Ŝe działanie
zmodyfikowanego protokołu jest prawidłowe — w tym celu naleŜy ocenić, czy odczyn jest taki jak opisany w części
„Charakterystyka wydajnościowa”.
Zalecane jest barwienie kontrastowe hematoksyliną za pomocą  FLEX Hematoxylin (Link) (nr kat. K8008). Zaleca
się stosowanie bezwodnego, trwałego środka do zatapiania.
Równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów naleŜy wykonywać dodatnie i ujemne próby
kontrolne z uŜyciem identycznego protokołu. Dodatnia kontrola tkankowa powinna obejmować migdałki, natomiast
we wszystkich dodatnich preparatach komórki/struktury powinny wskazywać odczyn reakcji taki jak opisany dla tej
tkanki w części „Charakterystyka wydajnościowa”. Zalecana kontrola ujemna to FLEX Negative Control, Rabbit
(Link) (nr kat. IR600).
Interpretacja odczynu
Przeciwciała anty-kappa mogą wykazywać ziarnisty odczyn cytoplazmatyczny, odczyn błonowy i/lub okołojądrowy
(1, 2).
Charakterystyka
wydajnościowa
Tkanki prawidłowe: Wykazano reaktywność przeciwciał anty-kappa z utrwalanymi w formalinie preparatami
prawidłowych migdałków i odczynowych węzłów chłonnych, w których stwierdzano obecność łańcuchów lekkich
kappa w cytoplazmie komórek plazmatycznych, komórek blastycznych centralnych części grudek chłonnych i małych
limfocytów strefy płaszcza (1). W komórkach dających dodatni odczyn dominuje reakcja cytoplazmatyczna,
natomiast w centroblastach i immunoblastach-B na zewnątrz grudek chłonnych stwierdza się silny ‘kropkowaty’
odczyn na zewnątrz od strefy okołojądrowej. W komórkach dendrytycznych grudek chłonnych występuje odczyn
powierzchniowy (1). Komórki Langerhansa, o podobnej morfologii do dendrytycznych komórek siateczki, nie
wykazują ekspresji łańcuchów kappa ani lambda. Do tkanek wykazujących ujemny odczyn z kappa zalicza się
mięśnie, nabłonek i tkankę nerwową. W migdałkach ok. 50-60% komórek B strefy płaszcza wykazuje odczyn
błonowy słaby do umiarkowanego, natomiast immunoblasty i komórki plazmatyczne w ośrodkach rozmnaŜania
powinny takŜe wykazywać umiarkowany lub silny odczyn cytoplazmatyczny. Odczyn limfocytów z komórek B
powinien być ujemny lub słaby w ośrodkach rozmnaŜania. MoŜe pojawić się niewielki odczyn tła w surowicy, tkance
łącznej i komórkach nabłonka.
Tkanki nieprawidłowe: W reaktywnych węzłach chłonnych został wykazany charakterystyczny wzór odczynu z
przeciwciałami przeciwko łańcuchom lekkim kappa Dako i trudny do odróŜnienia wzór z przeciwciałami przeciwko
łańcuchom lekkim lambda wyraźnie wykazującym poliklonalność komórek B w zaburzeniach (6). W szpiczakach
mnogich, zmienionych chorobowo komórki plazmatyczne były monotypowe oraz wykazywały odczyn dodatni w
przypadku łańcuchów kappa lub lambda (5). W 113 przypadkach chłoniaków z utrwalonych w formalinie komórek B i
komórek nieziarniczych, w tym kilku niewielkich preparatach biopsyjnych rdzenia z niezwykle ograniczoną tkanką,
zaobserwowano ekspresję łańcuchów lekkich monotypowych w 91 (81%) z tych przypadków ze 100% swoistością
przy uŜyciu przeciwciał przeciwko łańcuchom lekkim kappa lub lambda Dako (7). W 23 przypadkach zaburzeń
odkładania się łańcuchów lekkich (LCDD) przeciwciało znakowało preparaty nerek monotypowo w 17 przypadkach,
natomiast 5 przypadków wykazało odczyn dodani wyłącznie z łańcuchami lambda (3).
(115806-002)
Dako Denmark A/S
IR506/PL/MNI/2009.12.04 s. 2/3
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Piśmiennictwo
1.
Withold W, Reinauer H. An immunoblotting procedure following agarose gel electrophoresis for detection of
Bence Jones proteinuria compared with immunofixation and quantitative light chain determination. Eur J Clin
Chem Clin Biochem 1995;33:135-8.
2.
Peterson LC, Brown BA, Crosson JT, Mladenovic J. Application of the immunoperoxidase technic to bone
marrow trephine biopsies in the classification of patients with monoclonal gammopathies. Am J Clin Pathol
1986;85:688-93.
3.
Strøm EH, Fogazzi GB, Banfi G, Pozzi C, Mihatsch MJ. Light chain deposition disease of the kidney.
Morphological aspects in 24 patients. Virchows Arch 1994;425:271-80.
4.
Jessup E. Antigen retrieval techniques for the demonstration of immunoglobulin light chains in formalin-fixed,
paraffin-wax embedded sections. UK NEQAS immunocytochemistry news. Winter 1994/95; Issue 4:12-6.
5.
Taylor CR, Burns J. The demonstration of plasma cells and other immunoglobulin-containing cells in formalinfixed, paraffin-embedded tissues using peroxidase-labelled antibody. J Clin Path 1974;27:14-20.
6.
Harris NL, Poppema S, Data RE. Demonstration of immunoglobulin in malignant lymphomas. Use of an
immunoperoxidase technic on frozen sections. Am J Clin Pathol 1982;78:14-21.
7.
Marshall-Taylor CE, Cartun RW, Mandich D, DiGuiseppe JA. Immunohistochemical detection of immunoglobulin
light chain expression in B-cell non-Hodgkin lymphomas using formalin-fixed, paraffin-embedded tissues and a
heat-induced epitope retrieval technique. Appl Immunohistochem Mol Morphol 2002;10:258-62.
8.
Klein J, Hořejši V. Immunology. 2nd ed. Abingdon (UK): Blackwell Science Ltd; 1999. p. 226-7.
9.
Leong ASY, Cooper K, Leong FJWA. Manual of diagnostic antibodies for immunohistology. London: Oxford
University Press; 1999. p. 218.
Objaśnienie symboli
Numer katalogowy
Temperatura przechowywania
ZuŜyć przed
Wyrób medyczny do
diagnostyki in vitro
Zawartość wystarcza na <n>
testów
Producent
Sprawdzić w instrukcji
stosowania
Numer serii
(115806-002)
Dako Denmark A/S
IR506/PL/MNI/2009.12.04 s. 3/3
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17