Line immunoassay do wykrywania przeciwciał IgG

Line immunoassay do wykrywania przeciwciał IgG lub IgM przeciwko
Borrelia burgdorferi w próbkach surowicy ludzkiej
 Czuły i specyficzny
 Odczynniki gotowe do użycia
 Krótkie czasy inkubacji
 Odczyt wizualny lub automatyczny
WSKAZANIA-----------------------------------------Wykonanie badania surowicy pacjenta testem Borrelia
Line Immunoassay jest wskazane:
- do potwierdzenia wyników uzyskanych przesiewowym
testem ELISA
- do wykrywania stadiów choroby charakteryzujących
się niską aktywnością w teście ELISA
- do wykrywania serokonwersji
- do kontroli swoistości wyników uzyskanych testem
ELISA w przypadku powtarzającej się reaktywności
przeciwciał IgM
- do wykrywania przetrwałych IgM
- inkubacja 10 min
- 3-krotne płukanie z użyciem 1,5 ml wody destylowanej
- osuszenie paska przed odczytem
ODCZYT I INTERPRETACJA------------------Pojedyncze pasma można przyporządkować do
poszczególnych antygenów Borreli przy użyciu szablonu
lub oprogramowania SERALINE Scan.
Kryteria oceny
Ujemny
ZASADA DZIAŁANIA TESTU-------------------Test SERALINE Anty-Borrelia zawiera wysoko
oczyszczone rekombinanty białek Borrelia, które są
naniesione na paski nitrocelulozowe w określonych
odstępach. Podczas pierwszej inkubacji specyficzne
przeciwciała wchodzą w reakcję z odpowiednimi
antygenami, znajdującymi się na pasku. Powstałe
kompleksy immunologiczne są wykrywane w
koniugacie, powstałym w następnym etapie testu.
Dodanie roztworu substratu pozwala uwidocznić
elementy membrany związane z kompleksami
immunologicznymi poprzez wytworzenie w tych
miejscach niebieskich precypitatów.
Jedna linia function control, dwie conjugate control (IgG
i IgM) oraz cut-off control wspomagają poprawny
odczyt wyników.
Wątpliwy
Dodatni
IgG
IgM
1 linia z wyjątkiem
VlsE > Cut Off
VlsE lub 1 linia +
p41 ≥ Cut Off
2 linie z wyjątkiem
p41 ≥ Cut Off
Brak linii oprócz p41 >
Cut Off
1 linia z wyjątkiem OspC
lub p41 lub p18 ≥ Cut Off
OspC lub p18 lub
2 inne linie ≥ Cut Off
CHARAKTERYSTYKA I WZÓR PASKA-----
PROCEDURA--------------------------------------------- inkubacja paska nitrocelulozowego z 1,5 ml buforu
płucząco-inkubacyjnego (WIB) /5min
- dodanie 15 μl próbki do każdego z pasków
- inkubacja 45 min
- 3-krotne płukanie z użyciem 1,5 ml WIB /5 min
- dodanie 1,5 ml koniugatu (IgG lub IgM)
- inkubacja 45 min
- 3-krotne płukanie z użyciem 1,5 ml WIB /5 min
- dodanie 1,5 ml substratu
*Antygeny do testu dobrane zgodnie z zaleceniami
German Society of Hygiene and Microbiology (DGHM)
oraz zgodne z Deutsche Borreliose Gesellschaft e. V.
CZUŁOŚĆ--------------------------------------------------
SWOISTOŚĆ----------------------------------------------
Wykrywanie IgG i IgM
Po przebadaniu 400 zdrowych dawców krwi wykazano
następującą swoistość:
Konkurencyjny LIA
Seraline®
AntiBorrelia
n=78
dodatni
ujemny
dodatni
51
10
ujemny
1
16
W sumie 67 z dostarczonych próbek dało wyniki zgodne
dla obu zastosowanych metod, co oznacza ogólną
zgodność na poziomie 85,9% i porównywalną czułość na
poziomie 98,1% dla SERALINE Anty-Borelia IgG/IgM w
stosunku do konkurencyjnego testu LIA.
Próbki z niezgodnymi wynikami (n=11) zostały powtórnie
przebadane testem SERABLOT Anty-Borelia IgG/IgM. W
8 na 11 przypadków wyniki uzyskane testem SERALINE
zostały potwierdzone przez immunoblot.
Dla SERALINE Anty-Borelia IgG -> 88,2%
Dla SERALINE Anty-Borelia IgM -> 94,5%
Dystrybutor:
Sp. z o. o.
ul. Budowlanych 68
80-298 Gdańsk
POLSKA
tel. (48 58) 556 52 46
(48 58) 556 52 31
fax (48 58) 341 12 49
RÓŻNE STADIA BORELIOZY Z LYME W TESTACH Seraline Anty-Borelia IgG/IgM-----------------------
Serazym® Anty-Borrelia-IgG
Serazym® Anty-Borrelia-IgM
Zestawy ELISA do wykrywania przeciwciał IgG lub IgM
przeciwko Borrelia burgdorferi




Czuły test przesiewowy
Odczynniki gotowe do użycia
Krótkie czasy inkubacji
Wynik ilościowy (IgG) lub jakościowy (IgM)
WSKAZANIA------------------------------------------Wykonanie badania testem ELISA Serazym® AntyBorrelia jest wskazane przy podejrzeniu każdej z postaci
boreliozy z Lyme (I etap diagnostyki wg zaleceń
Polskiego Towarzystwa Epidemiologów i Lekarzy
Chorób Zakaźnych), do różnicowania z innymi
chorobami dającymi objawy neurologiczne lub jako test
skriningowy dla grup podwyższonego ryzyka np.
leśników.
- dodać roztwór hamujący reakcję i odczytać
absorbancję w ciągu 30 min. przy 450nm / ≥ 620 nm.
ODCZYT I INTERPRETACJA--------------------Serazym® Anty-Borelia IgG – test ilościowy
Krzywa wzorcowa jest tworzona na postawie
absorbancji 4 kalibratorów. Wyniki odczytujemy z
krzywej.
Serazym® Anti-Borrelia-IgG
ZASADA DZIAŁANIA TESTU---------------------
Negatywny
< 50 U/ml
Zestawy Serazym® Anty-Borrelia służą do oceny
przeciwciał boreliozy w ludzkim osoczu, surowicy i
płynach ustrojowych. Testy bazują na lizatach całych
komórek (mieszanka natywnych antygenów B. afzelii i
B. garinii) wzbogaconych rekombinowanym białkiem
VIsE, co gwarantuje maksymalną czułość oznaczeń.
Przeciwciała obecne w roztworze kalibratorów, kontroli
i próbek reagują specyficznie z immobilizowanymi na
mikropłytce antygenami. Po inkubacji niezwiązane
składniki są usuwane poprzez płukanie studzienek
buforem. Związane przeciwciała reagują specyficznie z
anti-human-Ig-F(ab)2 sprzężonym z peroksydazą
chrzanową (HRP) podczas kolejnej inkubacji. Składniki,
które nie uległy związaniu ponownie usuwa się poprzez
płukanie. W trakcie następnej inkubacji HRP
przekształca dodany roztwór bezbarwnego substratu
TMB w niebieski produkt. Reakcja enzymatyczna jest
przerywana kwasem siarkowym, który zmienia
zabarwienie roztworu z niebieskiego na żółte.
Absorbancja odczytana dla fali o długości 450/620 nm
jest wprost proporcjonalna do stężenia swoiście
związanych przeciwciał.
Pozytywny
> 61 U/ml
Wątpliwy
50 - 61 U/ml
PROCEDURA----------------------------------------------- po naniesieniu na płytkę kalibratorów, kontroli oraz
rozcieńczonych prób 30 min inkubacji w temp. 37°C
- 3-krotne płukanie studzienek roztworem płuczącym
- po dodaniu koniugatu inkubacja: 30 min w temp. 37°C
- 3-krotne płukanie studzienek roztworem płuczącym
- po dodaniu substratu inkubacja: 15 min w temp. 37°C
bez dostępu światła
* Dla próbek wątpliwych oznaczenie należy powtórzyć
oraz zlecić wykonanie ponownego oznaczenia z nowej
próbki po 1-2 tygodniach.
Serazym® Anty-Borelia IgM – test jakościowy
Cut off jest wyliczany jako absorbancja kontroli
negatywnej +0,4.
Serazym® Anti-Borrelia IgM
Negatywne
< 0.9 x cut off
Pozytywne
> cut off
CZUŁOŚĆ-I SWOISTOŚĆ--------------------------Po przebadaniu populacji 1000 zdrowych osób oraz 70
pacjentów ze zdiagnozowaną boreliozą uzyskano
następujące wyniki:
czułość
swoistość
Serazym® Anty-Borelia IgG
95%
98%
Serazym® Anty-Borelia IgM
91%
96%
Dystrybutor:
Sp. z o. o.
ul. Budowlanych 68
80-298 Gdańsk
POLSKA
tel. (48 58) 556 52 46
(48 58) 556 52 31
fax (48 58) 341 12 49