Ćwiczenie 10 b Analiza chemiczna i chromatograficzna makrolidów

Ćwiczenie 10 b
Analiza chemiczna i chromatograficzna makrolidów
A. Analiza chemiczna makrolidów
Badane substancje: erytromycyna, klarytromycyna, azytromycyna, roksitromycyna,
spiramycyna.
Wykonanie:
5 mg substancji rozpuścić w 2 ml acetonu, dodać 2 ml stężonego kwasu solnego. Powstaje
zabarwienie …………………………………………… zmieniające się w
…………………………………………… Dodać 2 ml chloroformu, wstrząsnąć. Warstwa
chloroformowa zabarwia się na ………...………………………………
B. Chromatografia cienkowarstwowa makrolidów
Materiały:
Faza nieruchoma: płytki pokryte żelem krzemionkowym.
Faza ruchoma: octan etylu-metanol-amoniak (17:2:1).
Odczynnik arseno-molibdenowy – wywoływacz do chromatografii:
12,5 g molibdenianu amonu rozpuścić w 100 ml wody (roztwór A).
10,5 ml 96% H2SO4 dodać do 80 ml wody i uzupełnić do 100 ml (roztwór B).
2,3 g arsenianu dwusodowego siedmiowodnego rozpuścić w 20 ml wody (roztwór C).
Zmieszać roztwory A, B i C, uzupełnić wodą do 250 ml. Pozostawić na 48 h w temp.
pokojowej.
Wykonanie:
1. Nanieść po 10 μl roztworów metanolowych (1 mg/ml).
2. Rozwinięty chromatogram wysuszyć w temperaturze pokojowej, ogrzewać 10 min. w
temp. 110°C, a następnie wywołać odpowiednim wywoływaczem i ponownie
ogrzewać (można użyć palnika).
3. Jako wywoływacza można użyć odczynnika arseno-molibdenowego lub mieszaniny
aldehyd anyżowy – kwas siarkowy – etanol (1:1:9).
Wyniki:
Tabela. Wartości Rf badanych makrolidów
Roztwory metanolowe antybiotyków
Wartości Rf
erytromycyna
klarytromycyna
azytromycyna
roksitromycyna
spiramycyna
badana próbka
W badanej próbce znajduje się
……………………………………………………………….……
1