BACTEC Diluting Fluid

% BACTEC Diluting Fluid
8
PP117JAA
2010/07
PRZEZNACZENIE
Polski
BACTEC Diluting FLuid) stosuje siê w procedurach, w których hodowle
Ciecz do rozcieñczania BACTEC (B
drobnoustrojów rozcieñcza siê do celów inokulacji. Jej g³ównym zastosowaniem s¹ standardowe testy wra¿liwoœci
na leki BACTEC pr¹tka gruŸlicy – M. tuberculosis1,3-7. W tej procedurze inokulum rozcieñcza siê w stosunku 1:100
przed dodaniem do fiolki kontrolnej. Ciecz do rozcieñczania mo¿na tak¿e stosowaæ do rozcieñczania hodowli w
innych procedurach, takich jak test NAP, lub dowolnym innym teœcie, w którym konieczne jest rozcieñczenie
zawiesiny hodowli2.
STRESZCZENIE I OBJAŒNIENIE
Stosowanie cieczy do rozcieñczania jest czêœci¹ badania podatnoœci na leki w testach BACTEC M. tuberculosis. Ciecz do
rozcieñczania zawiera detergent, polisorbat 80 (Tween 80) i woln¹ od kwasów t³uszczowych albuminê. Substancje te
u³atwiaj¹ rozproszenie pr¹tków w zawiesinie. Albumina jest wolna od kwasów t³uszczowych, nie wspó³zawodniczy
wiêc z wyznakowanym 14C kwasem t³uszczowym, znajduj¹cym siê w po¿ywce. Stê¿enie polisorbatu 80 jest minimalne,
tak ¿e nie zaburza on testu wra¿liwoœci na leki, umo¿liwiaj¹c jednak rozproszenie pr¹tków i uzyskanie jednolitej,
homogennej zawiesiny.
ZASADY PROCEDURY
Test wra¿liwoœci na leki BACTEC opiera siê na zmodyfikowanej metodzie proporcji. Za proporcjê krytyczn¹ dla
opornoœci uwa¿a siê 1%, co oznacza, ¿e je¿eli 1% lub wiêcej populacji pr¹tków wykazuje opornoœæ, hodowlê uznaje
siê za oporn¹. Przy ustalaniu 1% proporcji opornoœci w po¿ywce 12B do hodowli pr¹tków, inokulum bakteryjne
przeznaczone do fiolki kontrolnej rozcieñcza siê w stosunku 1:100 przed dodaniem do fiolki z po¿ywk¹. Ciecz do
rozcieñczania BACTEC dostarcza siê po to, aby u³atwiæ rozcieñczenie zawiesiny hodowli w stosunku 1:100. Wolna od
kwasów t³uszczowych albumina i polisorbat 80, obecne w cieczy do rozcieñczania, u³atwiaj¹ rozproszenie zawiesiny
i uzyskanie bardziej jednolitej zawiesiny pr¹tków.
ODCZYNNIKI
Fiolki z ciecz¹ do rozcieñczania BACTEC zawieraj¹ przed przeprowadzeniem badania nastêpuj¹ce aktywne sk³adniki:
CIECZ DO ROZCIEÑCZANIA BACTEC, PO 9,9 ML
IloϾ dodawana na litr wody destylowanej
Polisorbat 80 ............................................................................................ 0,2 mL
Wolna od kwasów t³uszczowych albumina surowicy bydlêcej .............. 2,0 g
Ostrze¿enia i œrodki ostro¿noœci:
Ciecz do rozcieñczania BACTEC przeznaczona jest do u¿ytku diagnostycznego in vitro.
Produkt zawiera suchy kauczuk naturalny.
W próbkach mog¹ byæ obecne drobnoustroje patogenne, takie jak wirusy zapalenia w¹troby i wirus HIV. Przy
kontakcie z ka¿dym materia³em zanieczyszczonym krwi¹ lub innymi p³ynami ustrojowymi nale¿y przestrzegaæ
„Uniwersalnych œrodków ostro¿noœci”8-11 i zaleceñ obowi¹zuj¹cych w danej instytucji.
Przed u¿yciem ka¿da fiolka powinna byæ zbadana pod k¹tem œladów zniszczenia, zanieczyszczenia lub przecieku,
takich jak œciemnienie, uwypuklenie lub zapadniêcie siê przegrody. NIE U¯YWAÆ fiolek z cechami zanieczyszczenia.
W fiolce z zanieczyszczeniami mo¿e dojœæ do zwiêkszenia ciœnienia. Zanieczyszczenie fiolki mo¿e nie byæ ³atwo
widoczne. Fiolek z oznakami zmêtnienia, zanieczyszczenia czy zmiany barwy (na ciemniejsz¹) nie nale¿y u¿ywaæ.
Fiolki z cechami uszkodzenia nale¿y wyrzuciæ przed inokulacj¹. W rzadkich przypadkach szyjka fiolki mo¿e byæ
pêkniêta i mo¿e od³amaæ siê podczas zdejmowania pokrywki albo w czasie obs³ugi. Tak¿e w rzadkich przypadkach
fiolka mo¿e nie byæ zamkniêta wystarczaj¹co szczelnie. W obu takich przypadkach zawartoœæ fiolki mo¿e wyciekaæ
lub rozlaæ siê, zw³aszcza przy odwróceniu fiolki do góry dnem. Jeœli fiolka by³a inokulowana, materia³, który wyciek³
lub uleg³ rozlaniu nale¿y traktowaæ z ostro¿noœci¹ ze wzglêdu na to, ¿e mo¿e on zawieraæ patogenne
drobnoustroje (czynniki). Przed utylizacj¹ nale¿y wysterylizowaæ wszystkie inokulowane fiolki w autoklawie.
Nale¿y zawsze przestrzegaæ technik aseptycznych i ustalonych œrodków ostro¿noœci w odniesieniu do zagro¿enia
mikrobiologicznego. Procedury nale¿y prowadziæ w odpowiedniej kabinie bezpieczeñstwa biologicznego
w pomieszczeniu o odpowiednim systemie wentylacyjnym, zgodnie z zaleceniami CDC12. Przy kontakcie z próbkami
i hodowlami, zawieraj¹cymi potencjalne patogeny, nale¿y u¿ywaæ odpowiedniej odzie¿y ochronnej, maski
i rêkawiczek. Stosowaæ siê do zaleceñ CDC i OSHA12.
Aby zminimalizowaæ potencjalny wyciek podczas inokulacji, nale¿y u¿yæ koñcówek z za³o¿onymi na sta³e ig³ami lub
Lok.
zakoñczeñ Luer-L
INSTRUKCJA PRZECHOWYWANIA
Fiolki z ciecz¹ do rozcieñczania BACTEC nale¿y przechowywaæ w temperaturze 2 – 25°C w suchym miejscu, bez
nara¿enia na bezpoœrednie dzia³anie œwiat³a s³onecznego.
POBIERANIE PRÓBKI
Zob. instrukcje do testów wra¿liwoœci (ulotka do opakowania zestawu leków S.I.R.E. – PP-118JAA).
PROCEDURA
Dostarczane materia³y:
Ciecz do rozcieñczania BACTEC
Materia³y wymagane, ale niedostarczane:
Po¿ywka 12B BACTEC
Aparat 460TB BACTEC
Strzykawka tuberkulinowa z ig³¹ zamocowan¹ na sta³e
Roztwór œrodka odka¿aj¹cego
70% alkohol izopropylowy
Z fiolki z ciecz¹ do rozcieñczania BACTEC zdj¹æ zakrêtkê. Przy ka¿dym wprowadzaniu fiolki nale¿y odka¿aæ gumow¹
przegrodê fiolki. Wierzcho³ek ka¿dej fiolki oczyœciæ œrodkiem odka¿aj¹cym i nastêpnie 70% alkoholem. Zawiesinê
hodowli, która ma byæ rozcieñczana, wprowadzaæ do fiolki za pomoc¹ strzykawki z ig³¹ za³o¿on¹ na sta³e lub
Lok. Po dodaniu do fiolki 0,1 mL uzyskuje siê rozcieñczenie w stosunku 1:100. Dok³adnie
z zakoñczeniem Luer-L
zmieszaæ przez obrócenie do góry dnem co najmniej 10 razy. Je¿eli potrzebne jest rozcieñczenie inne ni¿ 1:100,
pobraæ czêœæ zawartoœci fiolki i wykonaæ odpowiednie rozcieñczenie. Dalsze szczegó³y procedury badania wra¿liwoœci
na lek mo¿na znaleŸæ w ulotce do opakowania zestawu z lekami S.I.R.E. (PP-118JAA) lub w podrêczniku dotycz¹cym
procedury i produktu 460TB BACTEC (MA-0029).
KONTROLA JAKOŒCI
NIE U¯YWAÆ fiolek do hodowli po up³ywie ich daty wa¿noœci.
NIE U¯YWAÆ fiolek hodowlanych, które wykazuj¹ pêkniêcia lub defekty; utylizowaæ fiolkê w odpowiedni sposób.
U¿ytkownik powinien oceniæ fiolki z ciecz¹ do rozcieñczania pod k¹tem oznak pogorszenia jakoœci. Kontrolê jakoœci
procedur bakteryjnych opisano w ulotce do opakowania zestawu leków S.I.R.E. (PP-118JAA) lub w podrêczniku
dotycz¹cym procedury i produktu 460TB BACTEC (MA-0029).
Z ka¿dym zestawem cieczy do rozcieñczania dostarczane s¹ certyfikaty kontroli jakoœci. W certyfikatach kontroli
jakoœci podano drobnoustroje u¿ywane do testów danego typu produktu.
W ramach codziennej kontroli nale¿y badaæ na aparacie systemu 460TB BACTEC fiolki do badania wydajnoœci
BACTEC Performance Test Kit). Uzyskanie niskiego odczytu, je¿eli fiolki do badania wydajnoœci przetestowano
(B
prawid³owo, wskazuje na mo¿liwoœæ awarii aparatu (zob. ulotkê do opakowania PTK BACTEC PP-046JAA).
OGRANICZENIA PROCEDURY
Dok³adne sporz¹dzenie preparatu o rozcieñczeniu 1:100 jest mo¿liwe tylko pod warunkiem dok³adnego
rozproszenia rozcieñczanej zawiesiny. Obecnoœæ du¿ych grudek, zw³aszcza w przypadku M. tuberculosis, mo¿e
powodowaæ nieprawid³owe rozcieñczenie i wp³ywaæ w ten sposób na wyniki badania wra¿liwoœci na lek.
Zanieczyszczenie
Nale¿y zachowaæ ostro¿noœæ, aby zapobiec zanieczyszczeniu przy inokulacji do fiolki BACTEC. Zanieczyszczona próbka
da odczyt dodatni, co jednak nie oznacza wyniku istotnego klinicznie. Takie ustalenie musi byæ wykonane przez
u¿ytkownika na podstawie takich czynników, jak: typ wykrytych drobnoustrojów, wystêpowanie tego samego
drobnoustroju w wielu hodowlach, historia choroby pacjenta, odpowiednie kontrole aparatury itp. Zanieczyszczenie
mo¿e byæ tak¿e skutkiem nieprawid³owej konserwacji igie³ i przewodów BACTEC, niedostatecznego oczyszczania
przegrody lub nieprawid³owego dzia³ania jednostki grzewczej igie³ BACTEC (zob. instrukcjê obs³ugi i konserwacji).
Z powodu charakteru materia³u biologicznego zawartego w pod³o¿ach i naturalnej ró¿norodnoœci drobnoustrojów
u¿ytkownik powinien zdawaæ sobie sprawê z potencjalnej ró¿norodnoœci wyników przy wzroœcie niektórych
drobnoustrojów.
OCZEKIWANE WYNIKI I SWOISTA CHARAKTERYSTYKA WYDAJNOŒCIOWA
Szczegó³y mo¿na znaleŸæ w ulotce do opakowania zestawu leków S.I.R.E. (PP-118JAA).
Po zmieszaniu zawiesiny hodowli takiej jak hodowla M. tuberculosis z ciecz¹ do rozcieñczania i po dok³adnym
wymieszaniu jednolitej zawiesiny hodowli uzyskuje siê po¿¹dane rozcieñczenie. Obecnoœæ polisorbatu 80 nie
wp³ywa istotnie na wzorzec wra¿liwoœci ze wzglêdu na jego ma³e stê¿enie.
PIŒMIENNICTWO
1. Hawkins, J.E. Non-weekend schedule for BACTEC susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis. J. Clin.
Microbiol. 23:934-937, 1986.
2. Laszlo, A. and S.H. Siddiqi. Evaluation of a rapid radiometric differentiation test for the Mycobacterium
tuberculosis complex by selective inhibition with r-nitro-a-acetylamino-b-hydroxy-propiophenone. J. Clin.
Microbiol. 19:694-695, 1984.
3. Libonati, J.P. et al. Identification and direct drug susceptibility testing of mycobacteria by the radiometric
method. Abstract C300, A.S.M. Annual Meeting, St. Louis, MO, 1984.
4. Roberts, G.D. et al. Evaluation of BACTEC radiometric method for recovery of mycobacteria and drug
susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis from acid-fast smear-positive specimens. J. Clin. Microbiol.
18:689-696, 1983.
5. Siddiqi, S.H. et al. Evaluation of a rapid radiometric method for drug susceptibility testing of Mycobacterium
tuberculosis. J. Clin. Microbiol. 1981, 13: 908-912.
6. Siddiqi, S.H. et al. Interlaboratory drug susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis by radiometric and
two conventional methods. J. Clin. Microbiol. 1985, 22: 919-923.
2
7. Snider, Jr., D.E. et al. Rapid drug susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis. Am. Rev. Respir. Dis.
123:402-406, 1981.
8. National Committee for Clinical Laboratory Standards. 2001. Approved Guideline M29-A2. Protection of
laboratory workers from occupationally acquired infections, 2nd ed., NCCLS, Wayne, PA.
9. Garner, J.S. 1996. Hospital Infection Control Practices Advisory Committee, U.S. Department of Health and
Human Services, Centers for Disease Control and Prevention. Guideline for isolation precautions in hospitals.
Infect. Control Hospital Epidemiol. 17:53-80.
10. U.S. Department of Health and Human Services. 1999. Biosafety in microbiological and biomedical laboratories,
HHS Publication (CDC) 4th ed. U.S. Government Printing Office, Washington, D.C.
11. Directive 2000/54/EC of the European Parliament and of the Council of 18 September 2000 on the protection of
workers from risks related to exposure to biological agents at work (seventh individual directive within the
meaning of Article 16(1) of Directive 89/391/EEC). Official Journal L262, 17/10/2000, p. 0021-0045.
12. Kent, P.T. et al. Public health mycobacteriology, a guide for the level III laboratory. Centers for Disease Control,
Division of Laboratory Training and Consultation. Atlanta, GA, 1985.
3
4
%
O
$
Becton, Dickinson and Company
7 Loveton Circle
Sparks, MD 21152 USA
800-638-8663
www.bd.com/ds
Benex Limited
Rineanna House
Shannon Free Zone
Shannon, County Clare, Ireland
BD, BD Logo, BACTEC and Luer-Lok are trademarks of Becton, Dickinson and Company. © 2010 BD.