Nr kat. IR513

FLEX
Polyclonal Rabbit
Anti-Human IgM
Ready-to-Use
(Link)
Nr kat. IR513
Przeznaczenie
Do stosowania w diagnostyce in vitro.
Przeciwciała FLEX Polyclonal Rabbit Anti-Human IgM, Ready-to-Use, (Link) są przeznaczone do stosowania w
immunohistochemii w aparatach Autostainer Link. Przeciwciała te są przydatne w identyfikacji komórek
plazmatycznych i pokrewnych komórek limfoidalnych zawierających immonoglobuliny IgM. Są uŜytecznym
narzędziem do klasyfikacji pacjentów z powstającym nowotworem z komórek B (1-3). Dodatkowo przeciwciała mogą
być wykorzystane do róŜnicowania nowotworowych, monoklonalnych proliferacji z reaktywnego rozrostu komórek
plazmatycznych (1, 4). Interpretacja kliniczna dodatniego lub ujemnego odczynu musi być uzupełniona przez ocenę
morfologiczną, wykonanie odpowiednich prób kontrolnych i interpretowana przez doświadczonego patologa w
kontekście historii choroby pacjenta i innych badań diagnostycznych.
Streszczenie
i informacje ogólne
Ludzkie immunoglobuliny składają się głównie z dwóch identycznych łańcuchów cięŜkich (masa cząsteczkowa ok.
50 000) i dwóch identycznych łańcuchów lekkich (masa cząsteczkowa ok. 20 000). Cztery łańcuchy są związane
wiązaniami kowalencyjnymi za pomocą wiązań dwusiarczkowych. Łańcuchy lekkie są typu kappa lub lambda. Pięć
immunoglobulin, IgA, IgD, IgE, IgG i IgM, róŜni się w zaleŜności od łańcuchów cięŜkich. Immunoglobuliny IgA i IgM
występują takŜe w formach polimerycznych. Łańcuch cięŜki immunoglobuliny IgM jest łańcuchem typu mu. IgM
najczęściej występuje w formie pentameru o masie cząsteczkowej 970 kDa złoŜonym z pięciu podjednostek
immunoglobulin połączonych łańcuchem J (5).
Prawidłowa populacja komórek B jest poliklonalna i wykazuje ekspresję zakresu róŜnych cząsteczek
immunoglobulin. Większość powstających nowotworów z komórek B jest charakteryzowana przez proliferację
komórek monoklonalnych wykazujących ekspresję tylko jednego typu łańcucha lekkiego, natomiast ta sama
komórka moŜe wykazywać ekspresję więcej niŜ jednego typu łańcucha cięŜkiego. Ograniczona ekspresja
immunoglobulin przez poliferacje linii komórkowej monoklonalnych komórek B powoduje, Ŝe przeciwciała stają się
swoiste dla łańcuchów lekkich i cięŜkich immunoglobulin przydatnych do identyfikacji i oznaczania izotypowego tych
powstających nowotworów (6).
Zobacz dokument Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych firmy Dako lub następujące
części instrukcji do systemu detekcji IHC: 1) Zasada przeprowadzenia odczynu, 2) Niezbędne materiały
niedostarczone z zestawem, 3) Przechowywanie, 4) Przygotowanie preparatu, 5) Wykonanie barwienia, 6) Kontrola
jakości, 7) Rozwiązywanie problemów, 8) Interpretacja wyniku barwienia, 9) Ograniczenia metody.
Dostarczany
odczynnik
Gotowe do uŜycia królicze przeciwciała poliklonalne są dostarczane w postaci ciekłej w buforze zawierającym białko
stabilizujące i roztwór NaN3 o stęŜeniu 0,015 mol/L.
Immunogen
IgM wyizolowana z surowicy ludzkiej pacjentów z makroglobulinemią Waldenströma.
Swoistość
Przeciwciało reaguje z łańcuchami ludzkich IgM typu mu. Ślady zanieczyszczeń przeciwciałami usunięto przez
absorpcję w fazie stałej z innymi białkami ludzkiego osocza.
W immunoelektroforezie krzyŜowej przy zastosowaniu 12,5 µL przeciwciał na cm2 powierzchni Ŝelu na 2 µL osocza
ludzkiego pojawia się wyłącznie precypitat odpowiadający IgM. Barwnik: Coomassie Brilliant Blue.
W testach prowadzonych pośrednią metodą ELISA, z immunoglobulinami IgG lub IgA uŜywanymi w charakterze
antygenów powlekających, nie obserwuje się istotnej reaktywności. W testach ELISA z antygenem uwięzionym
między przeciwciałami (sandwich) nie obserwuje się istotnych reakcji z ludzkim osoczem pozbawionym IgM.
Środki ostroŜności
1. Odczynniki przeznaczone dla przeszkolonych UŜytkowników.
2. Opisywany produkt zawiera silnie toksyczny związek — azydek sodu (NaN3), w czystej postaci. StęŜenie NaN3
występujące w produkcie nie jest klasyfikowane jako niebezpieczne. Jednak w wyniku reakcji NaN3 z ołowiem lub
miedzią, wchodzącymi w skład instalacji kanalizacyjnych, mogą powstawać silnie wybuchowe azydki metali. Przy
usuwaniu resztek odczynnika uŜywać duŜych ilości wody do przepłukiwania, aby uniknąć gromadzenia się
azydków w instalacji kanalizacyjnej.
3. Podobnie jak w przypadku kaŜdego produktu otrzymywanego z materiału biologicznego, naleŜy stosować
odpowiednie procedury postępowania.
4. NaleŜy stosować właściwe wyposaŜenie ochronne, zabezpieczające przed kontaktem odczynnika ze skórą bądź
oczami.
5. Niewykorzystany odczynnik naleŜy usuwać zgodnie ze stosownymi przepisami lokalnymi i krajowymi.
Przechowywanie
(115888-002)
Dako Denmark A/S
Przechowywać w temperaturze 2–8°C. Nie stosowa ć po upływie terminu waŜności podanego na opakowaniu. JeŜeli
odczynniki są przechowywane w warunkach innych niŜ podane na ulotce dołączanej do opakowania, uŜytkownik
powinien je zweryfikować. Nie ma jednoznacznych oznak świadczących o niestabilności produktu. Z tego względu
jednocześnie z badaniem próbek pochodzących od pacjentów, naleŜy wykonywać dodatnie i ujemne próby
kontrolne. W wypadku nieoczekiwanego wyniku odczynu, którego nie moŜna wyjaśnić róŜnicami w procedurach
laboratoryjnych, gdy podejrzewa się problem z przeciwciałem, naleŜy się skontaktować z działem wsparcia
technicznego firmy Dako.
IR513/PL/MNI/2009.12.04 s. 1/3
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Przygotowanie
próbek oraz materiały
wymagane, ale
niedostarczane
Przeciwciała mogą być wykorzystane do znakowania utrwalonych formaliną skrawków zatapianych w parafinie.
Preparaty tkankowe naleŜy pociąć na skrawki o wymiarach około 4 µm.
Wymagane jest poddanie cieplnemu odmaskowaniu antygenu (HIER) z uŜyciem Dako PT Link (nr kat.
PT100/PT101). Szczegółowe instrukcje zawiera Instrukcja uŜytkownika aparatu PT Link. Optymalne wyniki uzyskuje
się w wyniku wstępnej obróbki tkanek przy uŜyciu roztworu EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH
(50x) (nr kat. K8000/K8004).
Skrawki zatapiane w parafinie: Do obróbki wstępnej utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków
tkankowych, zalecana jest procedura 3 w 1 z uŜyciem odczynnika Dako PT Link. Postępować według procedury
wstępnej obróbki tkanek, zamieszczonej w ulotce roztworu EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x)
(nr kat. K8000/K8004). Uwaga: Po przeprowadzeniu barwienia skrawki muszą być odwodnione, oczyszczone
zakryte za pomocą środka do trwałego zatapiania.
Odparafinowane skrawki: Do obróbki wstępnej utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków
tkankowych, zalecane jest uŜycie odczynnika Dako PT Link i przeprowadzenie procedury opisane dla skrawków
parafinowych. Po zakończeniu barwienia szkiełka naleŜy zatopić w wodnym lub trwałym środku do zatapiania.
W trakcie przygotowywania oraz podczas procedury znakowania immunohistochemicznego skrawki nie powinny
wyschnąć. W celu uzyskania lepszego przylegania skrawków do szkiełek podstawowych, zaleca się stosowanie
szkiełek FLEX IHC Microscope Slides (nr kat. K8020).
Wykonanie odczynu
oraz materiały
wymagane, ale
niedostarczane
Zalecanym systemem wizualizacji jest EnVision FLEX, High pH (Link) (nr kat. K8000). W systemie Autostainer Link
wstępnie zaprogramowano etapy odczynu i czasy inkubacji. Zalecana objętość uŜytego odczynika to 1 x 200 µL lub
2 x 150 µL na preparat. Szczegółowe informacje dotyczące wkładania szkiełek mikroskopowych i odczynników
przedstawiono w Instrukcji uŜytkownika aparatu Autostainer Link. Jeśli protokoły nie są dostępne w uŜywanym
systemie Autostainer, naleŜy skontaktować się z działem wsparcia technicznego firmy Dako. Wszystkie procedury
inkubacji naleŜy równieŜ przeprowadzać w temperaturze pokojowej.
Optymalne warunki mogą się zmieniać w zaleŜności od rodzaju materiału oraz sposobu jego przygotowania i
powinny być określone indywidualnie w kaŜdym laboratorium. JeŜeli patolog oceniający preparat Ŝyczy sobie
wybarwienia innym natęŜeniu, czasy inkubacji oraz uŜycie szablonów wizualizacji EnVision FLEX/EnVision
FLEX+ mogą zostać zmienione. W celu uzyskania informacji dotyczącej zmiany programowania protokołu, naleŜy
skontaktować się z działem obsługi/obsługą techniczną firmy Dako. NaleŜy upewnić się, Ŝe działanie
zmodyfikowanego protokołu jest prawidłowe — w tym celu naleŜy ocenić, czy odczyn jest taki jak opisany w części
„Charakterystyka wydajnościowa”.
Zalecane jest barwienie kontrastowe hematoksyliną za pomocą EnVision FLEX Hematoxylin (Link) (nr kat. K8008).
Zaleca się stosowanie bezwodnego, trwałego środka do zatapiania.
Równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów naleŜy wykonywać dodatnie i ujemne próby
kontrolne z uŜyciem identycznego protokołu. Dodatnia kontrola tkankowa powinna obejmować migdałki, natomiast
we wszystkich dodatnich preparatach komórki/struktury powinny wskazywać odczyn reakcji taki jak opisany dla tej
tkanki w części „Charakterystyka wydajnościowa”. Zalecana kontrola ujemna to FLEX Negative Control, Rabbit
(Link) (nr kat. IR600).
Interpretacja odczynu
Odczyn komórkowy ma charakter cytoplazmatyczny i/lub błonowy.
Charakterystyka
wydajnościowa
Tkanki prawidłowe: Przeciwciała przeciwko IgM wykrywają IgM w komórkach plazmatycznych węzłów chłonnych i
migdałków. Większość komórek w grudkach pierwotnych tkanki chłonnej z limfocytami B daje odczyn dodatni
(komórki dendrytyczne retikulum), natomiast w grudkach wtórnych barwiona jest powierzchnia IgM limfocytów w
strefie płaszcza. Przeciwciała przeciwko IgM dają takŜe odczyn z komórkami przewodu pokarmowego
wytwarzającymi IgM, przy czym odsetek takich komórek zmniejsza się od 17% w błonie śluzowej proksymalnej
części jelita cienkiego do 6% w jelicie grubym. Komórki takie występują zwykle w strefie o promieniu 200 µm wokół
podstawy kosmków (7). Choć wiadomo o występowaniu powierzchniowych IgM oraz kompleksów
immunologicznych, są one zwykle niewykrywalne metodami immunmohistochemicznymi. W migdałkach wirtualnie
wszystkie komórki B strefy płaszcza powinny wykazywać odczyn błonowy umiarkowany do silnego, natomiast
immunoblasty i komórki plazmatyczne w ośrodkach rozmnaŜania wykazują silny odczyn cytoplazmatyczny. MoŜe
pojawić się niewielki odczyn tła w surowicy, tkance łącznej i komórkach nabłonka.
Tkanki nieprawidłowe: W dwóch badaniach przebadano 33 (2) i 29 (3) tkanek utrwalonych w formalinie powstających
nowotworów z komórek plazmatycznych róŜnych typów. Odczyn dodatni z przeciwciałami wykazał dobrą korelację z
monoklonalnymi immunoglobulinami w surowicy lub moczu. Wystąpiło wyraźne rozróŜnienie między reaktywnym
rozrostem komórek i powstawaniem nowotworu z monoklonalnych komórek B, gdy uŜywane było przeciwciało wraz
z panelem innych przeciwciał do immunoglobulin (1), a zwłaszcza z przeciwciałami do łańcuchów lekkich (4).
(115888-002)
Dako Denmark A/S
IR513/PL/MNI/2009.12.04 s. 2/3
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Piśmiennictwo
1. Taylor CR, Burns J. The demonstration of plasma cells and other immunoglobulin-containing cells in formalinfixed, paraffin-embedded tissues using peroxidase-labelled antibody. J Clin Pathol 1974;27:14-20.
2. Taylor CR, Mason DY. The immunohistological detection of intracellular immunoglobulin in formalin-paraffin
sections from multiple myeloma and related conditions using the immunoperoxidase technique. Clin exp
Immunol 1974;18:417-29.
3. Taylor CR, Russell R, Chandor S. An immunohistologic study of multiple myeloma and related conditions, using
an immunoperoxidase method. Am J Clin Pathol 1978;70:612-22.
4. Beschorner R, Horny H-P, Petrusch UR, Kaiserling E. Frequent expression of haemopoietic and nonhaemopoietic antigens by reactive plasma cells: an immunohistochemical study using formalin-fixed, paraffinembedded tissue. Histol Histopathol 1999;14:805-12.
5. Klein J, Hořejši V. Immunology. 2nd ed. Abingdon (UK): Blackwell Science Ltd; 1999. p. 226-7, 238-46.
6. Leong ASY, Cooper K, Leong FJWA. Manual of diagnostic antibodies for immunohistology. London: Oxford
University Press; 1999. p. 217-9.
7. Curran RC, Gregory J. Demonstration of immunoglobulin in cryostat and paraffin sections of human tonsil by
immunofluorescence and immunoperoxidase techniques: Effects of processing on immuno-histochemical
performance of tissues and on the use of proteolytic enzymes to unmask antigens in sections. J Clin Pathol
1978; 31:974.
Objaśnienie symboli
Numer katalogowy
Temperatura przechowywania
ZuŜyć przed
Wyrób medyczny do
diagnostyki in vitro
Zawartość wystarcza na <n>
testów
Producent
Sprawdzić w instrukcji
stosowania
Numer serii
(115888-002)
Dako Denmark A/S
IR513/PL/MNI/2009.12.04 s. 3/3
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17