ce-ivd spec template

MultiMix™
Triple-Colour Reagent
Anti-Human TdT/FITC
Anti-Human CD22/RPE
Anti-Human CD3/APC
nr kat. TC668
Przeznaczenie
Do stosowania w diagnostyce in vitro.
TC668 przeznaczony jest do stosowania w cytometrii przepływowej. Odczynnik przeznaczony jest do
identyfikacji prekursorów limfocytów T i limfocytów B, wykazujących obecność terminalnej transferazy
dezoksynukleotydowej (Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT), limfocytów B zawierających CD22
i limfocytów T wykazujących obecność CD3. TdT obecna jest w jądrach komórek prekursorowych limfocytów T
i B, i w warunkach prawidłowych nie wykrywa się jej w komórkach jednojądrzastych krwi ani obwodowej tkanki
limfatycznej. CD22 obecny jest w cytoplazmie późnych limfocytów pro-B i wczesnych limfocytów pre-B oraz na
powierzchni dojrzałych limfocytów B. CD3 stanowi uniwersalny antygen limfocytów T oraz marker prawidłowych
i nowotworowych limfocytów T. TC668 umożliwia wykrycie wewnątrzkomórkowych TdT, CD22 i CD3. Badanie
ekspresji powierzchniowej CD22 i CD3 należy przeprowadzać osobno. Interpretacji wyniku — z
uwzględnieniem kontekstu klinicznego oraz wyników innych metod diagnostycznych — powinien dokonać
wykwalifikowany patolog.
Dostarczany odczynnik
TC668 składa się z następującego zestawu trzech dopasowanych przeciwciał fluorescencyjnych.
Monoclonal Mouse Anti-Human Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, Clone HT-6, sprzężone z izomerem 1
izotiocyjanianu fluoresceiny (FITC).
Monoclonal Mouse Anti-Human CD22, Clone 4KB128 sprzężone z R-fikoerytryną (RPE).
Monoclonal Mouse Anti-Human CD3, Clone UCHT1, sprzężone z allofikocyjaniną (APC).
Koniugaty w TC668 (w liczbie trzech) wyprodukowano z oczyszczonych mysich przeciwciał monoklonalnych
izotypu IgG1 kappa. TC668 dostarczany jest w postaci ciekłej w buforze zawierającym 1% albuminy surowicy
wołowej (BSA) oraz 15 mmol/L NaN3, pH 7,2. Każda fiolka zawiera 50 testów (20 µL koniugatu dla leukocytów,
w ilości do 106, z prawidłowej ludzkiej krwi obwodowej).
Swoistość
W cytometrii przepływowej przeciwciało przeciwko terminalnej transferazy dezoksynukleotydowej, HT-6,
znakuje komórki MOLT-3 i MOLT-4 (obie linie niedojrzałych limfocytów T, o których wiadomo, że wykazują
obecność TdT).
Pomiary cytometrii przepływowej TdT z zastosowaniem przeciwciała HT-6 u 55 pacjentów z ostrą białaczką
limfoblastyczną lub mielocytarną lub przełomem blastycznym w przewlekłej białaczce szpikowej, u których
wykryto TdT, dały wyniki porównywalne lub lepsze od uzyskanych przy pomocy mieszaniny przeciwciał
monoklonalnych anty-TdT (anty-HTdT-Mix) (1).
Przeciwciała Anty-CD22, 4KB128, opisano podczas warsztatów Third and Fifth International Workshops and
Conferences on Human Leucocyte Differentiation Antigens (3. i 5. międzynarodowe warsztaty i konferencja na
temat antygenów różnicujących ludzkie leukocyty) (2, 3), a ich reaktywność z CD22 została potwierdzona przez
wiele laboratoriów.
Przeciwciała Anty-CD3, UCHT1, opisano podczas warsztatów First and Third International Workshops and
Conferences on Human Leucocyte Differentiation Antigens (1. i 3. międzynarodowe warsztaty i konferencja na
temat antygenów różnicujących ludzkie leukocyty), a ich reaktywność z CD3 została potwierdzona przez wiele
laboratoriów (4). Anty-CD3, UCHT1, reaguje z łańcuchem  CD3 (5).
Środki ostrożności
1. Odczynniki są przeznaczone dla przeszkolonych Użytkowników.
2. Opisywany produkt zawiera silnie toksyczny związek — azydek sodu (NaN3), w czystej postaci. Stężenie
NaN3 występujące w produkcie nie jest klasyfikowane jako niebezpieczne. Jednak w wyniku reakcji NaN3
z ołowiem lub miedzią, wchodzącymi w skład instalacji kanalizacyjnych, mogą powstawać silnie wybuchowe
azydki metali. Przy usuwaniu resztek odczynnika używać dużych ilości wody do przepłukiwania, aby uniknąć
gromadzenia się azydków w instalacji kanalizacyjnej.
3. Podobnie jak w przypadku każdego produktu otrzymywanego z materiału biologicznego, należy stosować
odpowiednie procedury postępowania.
Przechowywanie
Przechowywać w ciemności, w temperaturze 2–8°C. Nie stosować po upływie terminu ważności podanego na
opakowaniu. Jeżeli odczynniki są przechowywane w warunkach innych niż podane na wkładce informacyjnej do
opakowania, Użytkownik powinien je zweryfikować. Nie ma jednoznacznych oznak świadczących
o niestabilności tego produktu. Dlatego równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów
należy wykonywać dodatnie i ujemne próby kontrolne. W wypadku nieoczekiwanego wyniku odczynu, którego
nie można wyjaśnić różnicami w procedurach laboratoryjnych, gdy podejrzewa się problem z przeciwciałem,
należy się skontaktować z działem wsparcia technicznego firmy Dako.
Wykonanie odczynu
1.
(110686-003)
Przenieść 50 µL (nie więcej niż 106 komórek) krwi pełnej z dodatkiem środka przeciwzakrzepowego
(EDTA), szpiku kostnego lub komórek jednojądrzastych do probówki polistyrenowej o wymiarach
12 x 75 mm.
TC668/PL/OKJ/23.08.04 s. 1/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17
2.
Dodać 100 µL Dako IntraStain, Reagent A (Fixation), nr kat. K2311. Ostrożnie wymieszać mieszadłem
wibracyjnym, tak aby komórki utworzyły zawiesinę.
3.
Inkubować 15 minut w temperaturze pokojowej.
4.
Dodać 2 mL PBS (nr kat. S3024) i wymieszać mieszadłem wibracyjnym.
5.
Odwirować przez 5 minut przy 300 x g, następnie odciągnąć supernatant, pozostawiając około 50 µL
cieczy.
6.
Starannie wymieszać mieszadłem wibracyjnym, tak aby komórki utworzyły zawiesinę, a następnie dodać
100 µL Dako IntraStain, Reagent B (Permeabilisation), nr kat. K2311.
7.
Dodać 20 µL TC668 i ostrożnie wymieszać mieszadłem wibracyjnym, tak aby komórki znajdowały się
w zawiesinie. Podana objętość 20 µL jest szacunkowa, laboratorium powinno indywidualnie dobrać
optymalną objętość.
8.
Do kontroli ujemnej dla TC668 zaleca się zastosowanie sprzężonych z FITC, RPE i APC odczynników
Dako, nr kat. X0978, tego samego izotypu, co TC668. Dodać do próbki 20 µL X0978
i ostrożnie wymieszać mieszadłem wibracyjnym. Podana objętość 20 µL jest szacunkowa, laboratorium
powinno indywidualnie dobrać optymalną objętość.
9.
Inkubować przez 15 minut w temperaturze pokojowej, w ciemnym pomieszczeniu.
10.
Powtórzyć kroki 4 i 5.
11.
Zawiesić osad w odpowiednim płynie do cytometrii przepływowej, np. 0,3 mL PBS (nr kat. S3024).
12.
Poddać analizie w cytometrze przepływowym. Jeśli próbki nie będą analizowane natychmiast, można je
przechowywać do 8 godzin w temperaturze 2–8 °C i bez dostępu światła.
Optymalne warunki mogą się zmieniać w zależności od rodzaju materiału i sposobu jego przygotowania
i powinny być określone indywidualnie w każdym laboratorium. Zaleca się dołączenie do każdego pomiaru
odpowiednich dodatnich i ujemnych próbek kontrolnych w celu weryfikacji odczynnika i przygotowania próbek.
Należy pamiętać, że koniugaty fluorochromowe są światłoczułe, w związku z czym w trakcie wykonywania
odczynu i do wykonania analizy próbki powinny być chronione przed światłem.
W przypadku niektórych chorób można oczekiwać nieprawidłowej ilości komórek, w których zachodzi ekspresja
antygenów docelowych, lub nieprawidłowego poziomu ekspresji antygenów. Może to wywołać zmianę wzorca
odczynu. Do przeprowadzenia właściwej analizy konieczna jest znajomość prawidłowego wzorca ekspresji
antygenów oraz ich związków z ekspresją innych istotnych antygenów.
Odczynniki wielobarwne umożliwiają bardziej wszechstronną analizę komórek nowotworowych białaczki
i chłoniaków niż badanie jednobarwne. W analizach wielobarwnych szczególne znaczenie ma odpowiedni
dobór kompensacji koloru. Dzięki minimalnemu nakładaniu się pasm emisyjnych fluorochromów FITC, RPE i
APC, ich połączenie umożliwia wyjątkowo łatwą analizę.
Piśmiennictwo
1.
Paietta E, Meenan B, Heavey C, Thomas D. Detection of Terminal Transferase in Acute Myeloid
Leukemia by Flow Cytometry. Cytometry 1994;16:256-61.
2.
Kehrl JH. B6 CD22 Workshop Panal report. In: Schlossman SF, Boumsell L, Gilks W, Harlan JM,
Kishimoto T, Morimoto C, et al., editors. Leucocyte typing V. White cell differentiation antigens.
Proceedings of the 5th International Workshop and Conference; 1993 Nov 3-7; Boston, USA. Oxford,
New York, Tokyo: Oxford University Press. Volume 1. 1995. p. 523-5.
3.
Moldenhauer G, Schwartz R, Dörken B, Hämmerling GJ. B2.2 Biochemical characterization and epitope
analysis of B-lymphocyte-specific surface antigens defined by clustering Workshop monoclonal
antibodies. In: McMichael AJ, Beverley PCL, Cobbold S, Crumpton MJ, Gilks W, Gotch FM, et al.,
editors. Leucocyte typing III. White cell differentiation antigens. Proceedings of the 3rd International
Workshop and Conference; 1986 Sep 21-26; Oxford, England. Oxford, New York, Tokyo: Oxford
University Press; 1987. p. 378-82.
4.
McMichael AJ, Gotch FM. T-cell antigens: new and previously defined clusters. In: McMichael AJ,
Beverley PCL, Cobbold S, Crumpton MJ, Gilks W, Gotch FM, et al., editors. Leucocyte typing III. White
cell differentiation antigens. Proceedings of the 3rd International Workshop and Conference; 1986 Sept
21-26; Oxford, England. Oxford, New York, Tokyo: Oxford University Press; 1987. p. 31-62.
5.
Tunnacliffe A, Olsson C, Traunecker A, Krissansen GW, Karjalainen K, de la Hera A. T3.2. The majority
of CD3 epitopes are conferred by the epsilon chain. In: Knapp W, Dörken B, Gilks WR, Rieber EP,
Schmidt RE, Stein H, et al., editors. Leucocyte typing IV. White cell differentiation antigens. Proceedings
of the 4th International Workshop and Conference; 1989 Feb 21-25; Vienna, Austria. Oxford, New York,
Tokyo: Oxford University Press; 1989. p. 295-6.
Objaśnienie symboli
(110686-003)
Numer katalogowy
Temperatura przechowywania
Zużyć przed
Wyrób medyczny do
diagnostyki in vitro
Chronić przed słońcem (patrz
sekcja nt. przechowywania)
Producent
Sprawdzić w instrukcji
stosowania
Numer serii
TC668/PL/OKJ/23.08.04 s. 2/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17