Monoclonal Mouse Anti-Human CD66abce, Clone Kat4c

Monoclonal Mouse Anti-Human CD66abce, Clone Kat4c
Nr katalogowy F 7112
Nr katalogowy C 7113
Przeznaczenie
znakowany FITC
znakowany RPE-Cy5
Do diagnostyki in vitro.
F 7112 i C 7113 są przeznaczone do użycia w cytometrii przepływowej. Anti-CD66abce jest uważane za
podstawowe do wstępnej diagnostyki przypadków ostrej białaczki szpikowej u dorosłych (AML) I przewlekłej
białaczki mielomonocytarnej (CML), a także do wykrywania minimalnych zmian miejscowych w ostrej białaczce
limfatycznej (ALL), wraz z panelem innych przeciwciał (1-3). Interpretacji wyników może dokonywać
wykwalifikowany patolog w oparciu o wywiad kliniczny i inne testy diagnostyczne.
Synonimy antygenu
NCA-160, biliary glycoprotein (BGP), CD67, CGM6, NCA-95, NCA, NCA-50/90, and CEA (4).
Wprowadzenie
Przeciwciała przeciwko CD66 rozpoznają rodzinę białek znaną jako antygen karcinoembrionalny (CEA), a
można je scharakteryzować dokładniej prze reakcję z jednym lub kilkoma antygenami z tej rodziny,
oznaczanymi mała literą po symbolu CD66: np. CD66a (BGP), CD66b (CGM6, CD67), CD66c (NCA), CD66d
(CGM1), CD66e (CEA), CD66f (swoista dla ciąży glikoproteina (PSG)) (4, 5). Rodzina ludzkich białek CEA
składa się z 22 blisko spokrewnionych genów należących do nadrodziny immunoglobulin, ulokowanych na
chromosomie 19. Ta rodzina genów dzieli się na dwie główne podgrupy, przy czym dziewięć należy do grupy
CEA i 13 do grupy PSG (6). Masa cząsteczkowa poszczególnych typów CD66 mieści się w granicach od 35
kDa do 200 kDa: CD66a (140-180 kDa), CD66b (95-100 kDa), CD66c (90 kDa), CD66d (35 kDa), CD66e (180200 kDa) i CD66f (w surowicy 54-72 kDa) (4).
We krwi obwodowej CD66a, CD66b, CD66c i CD66d ulegają ekspresji tylko na granulocytach. CD66a, CD66c i
CD66e są też obecne na komórkach nabłonka (4).
Anti-CD66a, CD66abce, CD66ace, CD66acd, CD66acde i CD66c wiążą się z limfoidalnymi liniami
komórkowymi wywodzącymi się z limfocytów T i B, młodzieńczych ALL, CML i AML (3, 7). Wykazano, że antiCD66abce w połączeniu z innymi przeciwciałami jest przydatne do wstępnej oceny przypadków AML u
dorosłych i przewlekłych chorób mieloproliferacyjnych, a także do wykrywania minimalnych zmian miejscowych
w ostrej białaczce limfatycznej ALL (1-3).
Funkcje poszczególnych typów CD66 są niejasne, ale wiadomo, że są one zdolne do homo- i heteroadhezji I
do aktywowania neutrofili (4, 6).
Odczynnik dostarczony
Znakowane przeciwciała anti-CD66abce, F 7112 i C 7113, zostały wyprodukowane z oczyszczonych mysich
przeciwciał monoklonalnych. Koniugaty są dostarczane w formie płynnej w buforze zawierającym 1% albuminy
z surowicy wołu (BSA) i 15 mmol/L NaN3, o pH 7,2. Każda fiolka zawiera ilość przeciwciała na 100 oznaczeń
(10 L przeciwciała na maksymalnie 106 leukocytów z normalnej ludzkiej krwi obwodowej).
Izotyp: IgG1, kappa. Stężenie koniugatu mg/L: zobacz etykietka na fiolce.
Przeciwciało,
nr katalogowy
Swoistość
Fluorochrom
Kontrola
negatywna,
nr katalogowy
F 7112
FITC (Fluorescein Isothiocyanate Isomer 1)
X 0927
C 7113
RPE-Cy5 (R-Phycoerythrin-Cyanine 5)
X 0955
Anti-CD66abce, Kat4c, reaguje z transfektantami a, b, c i e sześciu podgrup grupy CEA wewnątrz nadrodziny
immunoglobulin I jest w związku z tym klasyfikowane jako CD66abce (5). Anti-CD66abce, Kat4c znakuje
dojrzałe komórki mielopoetycznei dojrzewające komórki mielopoetyczne w normalnym szpiku kostnym (1, 7).
Cytometryczna analiza próbek szpiku kostnego z użyciem Anti-CD66abce, Kat4c, anti-CD13 i anti-CD14
pozwala na podział komórek mielopoetycznych na trzy podgrupy: komórki CD13+CD14-CD66abce- (niedojrzałe
komórki mielopoetyczne), komórki CD13+CD14-CD66abce+ (dojrzewające komórki mielopoetyczne) Wells
komórki CD13-CD14-CD66abce+ (dojrzałe komórki mielopoetyczne) (1). Może to być przydatne przy ocenie
chorych ze złośliwym procesem mieloproliferacyjnym (1).
Cytometryczna analiza próbek szpiku kostnego wykazała, że Anti-CD66abce, Kat4c znakuje AML (2/29
przypadków) i ALL (8/12 przypadków) (3). Anti-CD66abce, Kat4c znakuje 19/108 przypadków AML i 9/20
przypadków przewlekłych zespołów mieloproliferacyjnych wykazujących ekspresję CD66abce i ko-ekspresję
CD14 (2).
Środki ostrożności
1. Do stosowania przez osoby przygotowane zawodowo.
2. Produkt zawiera azydek sodowy (NaN3), odczynnik chemiczny silnie toksyczny w czystej postaci. W stężeniu
obecnym w produkcie, chociaż nie klasyfikowanym jako niebezpieczne, azydek sodowy może reagować z
elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, tworząc silnie wybuchowe pochodne lub azydki tych metali.
Przy usuwaniu odpadów przepłukać spływ dużą ilością wody, aby uniknąć tworzenia się azydków.
3. Jak w przypadku każdego materiału biologicznego należy stosować odpowiednie procedury.
(108366-002)
F 7112/C 7113/PL/SSA/01.03.03 str. 1/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17
Przechowywanie
Przechowywać w temp. 2-8oC. Nie używać po upływie daty ważności wskazanej na opakowaniu. Jeśli produkt był
przechowywany w warunkach innych niż wskazane, użytkownik musi sprawdzić jakość produktu. Ponieważ nie
ma wyraźnych oznak wskazujących na zmianę trwałości produktu, zawsze należy badać dodatnią i ujemną
kontrolę równolegle z próbką badaną. Jeżeli pojawia się nieswoiste barwienie bez zmiany procedur
laboratoryjnych i można podejrzewać, że dzieje się to z winy przeciwciała, należy skontaktować się z serwisem
technicznym firmy Dako.
Procedura barwienia
1.
Pobrać krew żylną do probówki z antykoagulantem.
2.
Wyizolować komórki jednojądrzaste przez wirowanie na gradiencie gęstości lub zlizować erytrocyty po
punkcie 6.
3.
Dwukrotnie przepłukać komórki jednojądrzaste RPMI 1640 lub PBS, o pH 7,2-7,4.
4.
Zmieszać 100 L zawiesiny komórek z 10 L Anti-CD66 znakowanego odpowiednim fluorochromem.
5.
Użyć niereagującego przeciwciała o tym samym izotypie i znakowanego samym fluorochromem jako kontroli
ujemnej (patrz tabela).
6.
Inkubować w ciemnościach w temp. 4 C przez 30 minut.
7.
Dwukrotnie przepłukać PBS zawierającym 2% BSA. Zawiesić komórki w płynie odpowiednim do pomiarów
cytometrycznych,np. 0,3 mL roztworu zawierającego 1% paraformaldehyd jako utrwalacz w 0,01 mol/L PBS,
o pH 7,4.
8.
Zanalizować w cytometrze przepływowym.
Zaleca się użyć odpowiedniej kontroli dodatniej i ujemnej przy każdym pomiarze dla sprawdzenia odczynnika i
przygotowania próbki. Proszę zwrócić uwagę, że odczynniki znakowane fluorochromami są wrażliwe na światło i
próbki powinny być przed nim chronione podczas barwienia aż do czasu analizy.
Szczególne ograniczenia
dotyczące produktu
Obserwowano, że koniugaty znakowane RPE-Cy5 mogą się wiązać do monocytów, co powoduje powstanie tła
świecenia (8).
Literatura
1.
Bonde J, Meyer K, Broe MK, Hokland M, Turley H, Hokland P. Improved flow cytometric identification of
myelopoiesis by the simultaneous labeling with CD13, CD14 and CD66 monoclonal antibodies. Br J
Haematol 1996;92:269-79.
2.
Hansen I, Meyer K, Hokland P. Flow cytometric identification of myeloid disorders by asynchronous
expression of the CD14 and CD66 antigens. Eur J Haematol 1998;61:339-46.
3.
Carrasco M, Munoz L, Bellido M, Bernat S, Rubiol E, Ubeda J, et al. CD66 expression in acute
leukaemia. Ann Hematol 2000;79:299-303.
4.
Turni L, Shaw S, Watson B, Mason D. CD guide. In: Mason D, André P, Bensussan A, Buckley C, Civin
C, Clark E, De Haas M, et al, editors. Leucocyte typing VII. White cell differentiation antigens.
Proceedings of the 7th International Workshop and Conference; 2000 Jun 19-23; Harrogate, United
Kingdom. New York: Oxford University Press Inc.; 2002 .p. 816-21.
5.
Skubitz KM, Micklem K, van der Schoot E. M14. CD66 and CD67 cluster workshop report. In:
Schlossman SF, Boumsell L, Gilks W, Harlan JM, Kishimoto T, Morimoto C, et al., editors. Leucocyte
typing V. White cell differentiation antigens. Proceedings of the 5th International Workshop and
Conference; 1993 Nov 3-7; Boston, USA. Oxford, New York, Tokyo: Oxford University Press; 1995.
Volume One .p. 889-99.
6.
Thompson JA, Grunert F, Zimmermann W. Carcinoembryonic antigen gene family: molecular biology and
clinical perspectives. J Clin Lab Anal 1991;5:344-66.
7.
Hanenberg H, Quentin I, Baumann M, Grunert F, Burdach S. M14.8. Expression of CEA gene family
members on haemopoietic cells. In: Schlossman SF, Boumsell L, Gilks W, Harlan JM, Kishimoto T,
Morimoto C, et al., editors. Leucocyte typing V. White cell differentiation antigens. Proceedings of the 5 th
International Workshop and Conference; 1993 Nov 3-7; Boston, USA. Oxford, New York, Tokyo: Oxford
University Press; 1995. Volume One. p. 919-21.
8.
van Vugt MJ, van den Herik-Oudijk IE, van de Winkel JGJ. Binding of PE-CY5 conjugates to the human
high-affinity receptor for IgG (CD64). Blood 1996;88:2358-61.
Objaśnienia symboli
(108366-002)
Numer katalogowy
Temperatura przechowywania
Zużyć przed
Wyrób medyczny do
diagnostyki in vitro
Chronić przed światłem
(sprawdź w rozdz.
przechowywanie)
Producent
Sprawdź w instrukcji
stosowania
Numer serii
F 7112/C 7113/PL/SSA/01.03.03 str. 2/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17