Dako Autostainer/Autostainer Plus

FLEX
Polyclonal Rabbit
Anti-Human
Gastrin
Ready-to-Use
(Dako Autostainer/Autostainer Plus)
Nr kat. IS519
Przeznaczenie
Do badań diagnostycznych in vitro.
Odczynnik FLEX Polyclonal Rabbit Anti-Human Gastrin, Ready-to-Use (Dako Autostainer/Autostainer Plus) jest
przeznaczony do stosowania w immunohistochemii w aparatach Dako Autostainer/Autostainer Plus. Przeciwciało to
znakuje gastrynę i jest przydatne do identyfikacji nowotworów neuoendokrynnych wydzielających gastrynę (1, 2).
Interpretacja kliniczna wystąpienia lub braku barwienia musi być uzupełniona przez badania morfologiczne z
wykorzystaniem odpowiednich prób kontrolnych i powinna być przeprowadzana przez doświadczonego patologa z
uwzględnieniem historii choroby pacjenta i innych badań diagnostycznych.
Podsumowanie
i wyjaśnienie
Gastryna to hormon peptydowy pełniący waŜną rolę w regulacji wydzielania kwasu Ŝołądkowego oraz proliferacji
komórek błony śluzowej (3). Progastryna syntetyzowana jest w komórkach G w śluzówce odźwiernika,
pozaŜołądkowych komórkach G oraz w komórkach wydzielniczych w trzustki i przysadki. W komórkach G progastryna
stęŜana jest w pęcherzykach wydzielniczych, gdzie następuje odcięcie N- i C-końców a następnie amidowanie do
gastryny (4). Dwie główne formy gastryny to gastryna-34 i gastryna 17 (3, 4). Wydzielona gastryna działa przez
związanie z G-sprzęŜonym receptorem CKK2 i stymuluje wydzielenie histaminy z komórek enterochromafilnych.
Wydzielona histamina działa jako stymulant parakrynny na komórki ścienne uwalniające kwas Ŝołądkowy do światła
Ŝołądka (5).
Gastrinomy to guzy neuroendokrynne wydzielające gastrynę (6) związane z zespołem Zollingera-Ellisona (ZES) lub
autosomalnym, dominującym dziedzicznym zespołem gruczolakowatości wewnątrzwydzielniczej typu 1 (MEN1),
zespół Wernera). Sporadyczne gastrinomy zasadniczo występują pojedynczo, najczęściej w trzustce, ale mogą się
takŜe znajdować w dwunastnicy. Gastrinomy związane z MEN1 najczęściej mają charakter wielokrotny i występują w
dwunastnicy (1, 7).
Patrz dokument Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych firmy Dako lub następujące
części instrukcji do systemu detekcji IHC: 1) Zasady procedury, 2) Niezbędne materiały niedostarczone z zestawem,
3) Przechowywanie, 4) Przygotowanie preparatu, 5) Wykonanie odczynu, 6) Kontrola jakości, 7) Rozwiązywanie
problemów, 8) Interpretacja wyniku odczynu, 9) Ograniczenia metody.
Odczynnik
dostarczony
Gotowe do uŜycia poliklonalne przeciwciało królicze dostarczane w postaci płynnej w buforze zawierającym białko
stabilizujące i azydek sodu o stęŜeniu 0,015 mol/L.
Immunogen
Syntetyczna ludzka gastryna-17 w formie niesiarczanowej, związana z albuminą surowicy wołowej.
Swoistość
Przeciwciało reaguje z ludzką gastryną 17 w formie siarczanowej i niesiarczanowej oraz z gastryną 34 i reaguje
krzyŜowo z około 20% oktapeptydu cholecystokininy (CCK-8). Ślady zanieczyszczeń przeciwciałami usunięto przez
absorpcję w fazie stałej z innymi białkami osocza wołowego.
Swoistość tych przeciwciał określono następująco:
Immunoelektroforeza krzyŜowa: Nie stwierdzono występowania osadu w przypadku uŜycia 12,5 µL stęŜonego
przeciwciała na cm2 powierzchni Ŝelu wobec 2 µL ludzkiego osocza lub 2 µL osocza bydlęcego. Barwnik: Coomassie
Brilliant Blue.
Środki ostroŜności
1. Do stosowania przez wyszkolony personel.
2. Produkt zawiera azydek sodu (NaN3), substancję chemiczną silnie toksyczną w czystej postaci. Azydek sodu,
zastosowany w produkcie w stęŜeniu, które nie jest sklasyfikowane jako niebezpieczne, moŜe reagować z
elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, powodując nagromadzenie silnie wybuchowych azydków
metali. Po usunięciu spłukać duŜą ilością wody, aby zapobiec nagromadzeniu się azydku metalu w kanalizacji.
3. Podobnie jak w przypadku wszelkich materiałów pochodzących ze źródeł‚ biologicznych, naleŜy stosować
właściwe procedury postępowania.
4. W celu uniknięcia kontaktu z oczami i skórą naleŜy nosić odpowiednie osobiste wyposaŜenie ochronne.
5. Niewykorzystany roztwór utylizować zgodnie z lokalnymi, wojewódzkimi i krajowymi rozporządzeniami.
Przechowywanie
(118724-002)
Dako Denmark A/S
Przechowywać w temperaturze 2–8°C. Nie stosowa ć po upływie terminu waŜności podanego na fiolce. Jeśli
odczynniki są przechowywane w warunkach innych niŜ podane powyŜej, uŜytkownik musi zweryfikować takie
warunki. Nie ma oczywistych oznak wskazujących na niestabilność produktu. Dlatego jednocześnie z badaniem
próbek pochodzących od pacjenta naleŜy wykonywać kontrole dodatnie i ujemne. W wypadku nieoczekiwanego
wyniku odczynu, którego nie moŜna wyjaśnić róŜnicami w procedurach laboratoryjnych, gdy podejrzewa się problem
z przeciwciałem, naleŜy się skontaktować z działem wsparcia technicznego firmy Dako.
IS519/PL/MNI/2009.12.04 str. 1/2
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Faks +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Przygotowanie
próbek
oraz materiały
wymagane, ale
niedostarczane
Przeciwciała mogą być wykorzystane do znakowania utrwalonych formaliną skrawków zatapianych w parafinie.
Preparaty tkankowe naleŜy pociąć na skrawki o wymiarach około 4 µm.
Wymagane jest poddanie cieplnemu odmaskowaniu antygenu (HIER) z uŜyciem Dako PT Link (nr kat.
PT100/PT101). Szczegółowe instrukcje zawiera Instrukcja uŜytkownika aparatu PT Link. Optymalne wyniki uzyskuje
się w wyniku wstępnej obróbki tkanek przy uŜyciu roztworu EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH
(50x) (nr kat. K8000/K8004).
Skrawki zatapiane w parafinie: Do obróbki wstępnej utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków
tkankowych, zalecana jest procedura 3 w 1 z uŜyciem odczynnika Dako PT Link. Postępować według procedury
wstępnej obróbki tkanek, zamieszczonej w ulotce roztworu EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x)
(nr kat. K8000/K8004). Uwaga: Po przeprowadzeniu barwienia skrawki muszą być odwodnione, oczyszczone
zakryte za pomocą środka do trwałego zatapiania.
Odparafinowane skrawki: Do obróbki wstępnej utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków
tkankowych, zalecane jest uŜycie odczynnika Dako PT Link i przeprowadzenie procedury opisane dla skrawków
parafinowych. Po zakończeniu barwienia szkiełka naleŜy zatopić w wodnym lub trwałym środku do zatapiania.
W trakcie przygotowywania oraz podczas procedury znakowania immunohistochemicznego skrawki nie powinny
wyschnąć. W celu uzyskania lepszego przylegania skrawków do szkiełek podstawowych, zaleca się stosowanie
szkiełek FLEX IHC Microscope Slides (nr kat. K8020).
Procedura barwienia
oraz materiały
wymagane, ale
niedostarczane
Zalecanym systemem wizualizacji jest EnVision FLEX, High pH, (Dako Autostainer/Autostainer Plus) (nr kat.
K8010). Kolejne kroki barwienia oraz czasy inkubacji zaprogramowano wstępnie w oprogramowaniu aparatów Dako
Autostainer/Autostainer Plus, przy uŜyciu następujących protokołów:
Protokół wzorcowy: FLEXRTU2 (200 µL dozowanych odczynników) lub FLEXRTU3 (300 µL dozowanych
odczynników)
Autoprogram: Gastrin (bez barwienia kontrastowego) lub GastrinH (z barwieniem kontrastowym)
Dla etapu „Auxiliary” naleŜy ustawić opcję „rinse buffer ” w programach barwienia ≤10 szkiełek. W przypadku
programów barwienia >10 szkiełek etap Auxiliary naleŜy ustawić na „none”. Zapewnia to porównywalne czasy
płukania.
Wszystkie procedury inkubacji naleŜy równieŜ przeprowadzać w temperaturze pokojowej. Szczegółowe informacje
zawiera instrukcja obsługi odpowiedniego aparatu. Jeśli protokoły nie są dostępne w uŜywanym aparacie Dako
Autostainer, naleŜy skontaktować się z działem wsparcia technicznego firmy Dako.
Optymalne warunki mogą się zmieniać w zaleŜności od rodzaju materiału i sposobów jego przygotowania i powinny
być określone indywidualnie w kaŜdym laboratorium. Aby moŜliwe było wykonanie oceny przez patologów z róŜnym
nasileniem odczynu preparatów, naleŜy skontaktować się z działem obsługi/obsługą techniczną firmy Dako w celu
uzyskania informacji dotyczącej zmiany programowania protokołu. NaleŜy upewnić się, Ŝe działanie
zmodyfikowanego protokołu jest prawidłowe – w tym celu naleŜy ocenić, czy odczyn jest taki jak opisany w części
„Charakterystyka wydajnościowa”.
Zalecane jest barwienie kontrastowe hematoksyliną przy uŜyciu EnVision FLEX Hematoxylin, (Dako
Autostainer/Autostainer Plus) (nr kat. K8018). Zaleca się stosowanie niewodnego, trwałego środka do zatapiania.
Równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów naleŜy wykonywać dodatnie i ujemne próby
kontrolne z uŜyciem identycznego protokołu. Dodatnia kontrola tkankowa powinna obejmować jamę odźwiernikową
Ŝołądka, natomiast we wszystkich dodatnich preparatach komórki/struktury powinny wskazywać odczyn reakcji taki
jak opisany dla tej tkanki w części „Charakterystyka wydajnościowa. Zalecana kontrola ujemna to FLEX Negative
Control, Rabbit, (Dako Autostainer/Autostainer Plus) (nr kat. IS600).
Interpretacja
wybarwienia
Komórki znakowane przez przeciwciało wykazują odczyn cytoplazmatyczny.
Charakterystyka
wydajnościowa
Tkanki normalne: W Ŝołądku komórki G jamy odźwiernikowej wykazują odczyn umiarkowany do silnego.
Przeciwciało nie znakuje komórek nabłonka.
Tkanki patologiczne: Przeciwciało znakowało 12/12 gastrinom dwunastnicy, 5/5 gastrinom trzustki, 8/8 gastrinom w
okołotrzustkowych i okołodwunastniczych węzłach chłonnych oraz wątroby bez znanego guza pierwotnego (1).
W innym badaniu przeciwciało oznakowało 3/11 trzustkowych nowotworów wewnątrzwydzielniczych (2).
Piśmiennictwo
1. Perkins PL, McLeod MK, Jin L, Fukuuchi A, Cho KJ, Thompson NW, et al. Analysis of gastrinomas by
immunohistochemistry and in situ hybridization histochemistry. Diag Mol Path 1992;1:155-4.
2. Wang G, Yao J, Worah S, White J, Luna R, Wu TT et al. Comparison of genetic alterations in neuroendocrine
tumors: frequent loss og chromosome 18 in ileal carcinoid tumors. Modern Path 2005;18: 1079-87.
3. Thomas RP, Hellmich MR, Townsend CM and Evers BM. Role of gastrointestinal hormones in the proliferation of
normal and neoplastic tissues. Endocrine Rev 2003;24:571-99.
4. Dickinson CJ. Relationship of gastrin processing to colon cancer. Gastroenterology 1995;109:1384-8
5. Dimaline R, Varro A. Attack and defence in the gastric epithelium-a delicate balance. Exp Physiol 2007;92:591-601.
6. de Herder W. Biochemistry of neuroendocrine tumors. Best Pract Res Clin Endocrinol Metab 2007;21:33-41.
7. Pritchard DM. Pathogenesis of gastrinomas associated with multiple endocrine neoplasia type 1. Gut 2007:56 606-7.
Objaśnienie symboli
Numer katalogowy
Temperatura przechowywania
ZuŜyć przed
Wyrób medyczny do
diagnostyki in vitro
Zawartość wystarcza na <n>
testów
Producent
Sprawdzić w instrukcji
stosowania
Numer serii
(118724-002)
Dako Denmark A/S
IS519/PL/MNI/2009.12.04 str. 2/2
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Faks +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17