Monoclonal Mouse

Monoclonal Mouse
Anti-Human CD10
Klon 56C6
Nr kat. M7308
Przeznaczenie
Do stosowania w diagnostyce in vitro.
Przeciwciała Monoclonal Mouse Anti-Human CD10, klon 56C6, są przeznaczone do stosowania w immunohistochemii.
Przeciwciała te są przydatne w identyfikacji chłoniaka Burkitta (1, 2), chłoniaka grudkowego (1, 3, 4) za wyjątkiem
stopnia III (5), ostrych białaczek limfoblastycznych z prekursorowych limfocytów B (1, 2) i raka nerki typu
jasnokomórkowego (6, 7). Interpretacja kliniczna wystąpienia lub braku barwienia musi być uzupełniona przez
badania morfologiczne z wykorzystaniem odpowiednich prób kontrolnych i powinna być przeprowadzana przez
doświadczonego patologa z uwzględnieniem historii choroby pacjenta i innych badań diagnostycznych.
Synonimy antygenu
Wspólny antygen ostrej białaczki limfoblastycznej (common acute lymphocytic leukemia antigen, CALLA), neutralna
endopeptytaza, neprylizyna, enkefalinaza (7-9)
Podsumowanie
i wyjaśnienie
CD10 jest białkiem o masie cząsteczkowej 90-100 kDa, należącym do rodziny metaloproteaz przezbłonowych, która
obejmuje także antygeny leukocytowe CD13 i CD26 oraz aminopeptydazę A. Gen kodujący CD10 znajduje się na
chromosomie 3. CD10 jest enzymem cynkozależnym, uważa się, że zmniejsza ono odpowiedź komórkową na
hormony peptydowe (8, 9). W komórkach limfoidalnych CD10 ulega ekspresji w niedojrzałych komórkach
prekursorowych T i B, ale ginie, kiedy komórki osiągają dojrzałość. CD10 wykazuje jednak ponownie ekspresję w
dzielących się komórkach B oraz dojrzałych neutrofilach (8-10). W nowotworach wywodzących się z tkanki chłonnej
CD10 wykazuje ekspresję w ostrej białaczce limfoblastycznej (ALL) pochodzącej z prekursorowych komórek B, ale
uwidacznia się także w części przypadków ostrej białaczki limfatycznej pochodzenia T-komórkowego (1, 2). Ponadto
antygen może także wykazywać ekspresję w rozlanym chłoniaku z dużych komórek B (DLBCL) (1, 10), a także,
choć niezbyt często, w chłoniaku z komórek płaszcza (3).
Patrz dokument Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych firmy Dako lub następujące
części instrukcji do systemu detekcji IHC: 1) Zasady procedury, 2) Niezbędne materiały niedostarczone z zestawem,
3) Przechowywanie, 4) Przygotowanie preparatu, 5) Wykonanie odczynu, 6) Kontrola jakości, 7) Rozwiązywanie
problemów, 8) Interpretacja wyniku odczynu, 9) Ograniczenia metody.
Odczynnik
dostarczony
Mysie przeciwciała monoklonalne dostarczane w postaci płynnej jako nadsącz hodowli komórkowej (zawierający
płodową surowicę bydlęcą) i 0,015 mol/L azydku sodu.
Klon: 56C6. Izotyp: IgG1.
Stężenie mysich IgG mg/L: Patrz: informacja podana na etykiecie fiolki.
Stężenie białek w różnych partiach może się różnić bez wpływu na rozcieńczenie optymalne. Ilość dla każdej partii
jest porównywana i dostosowywana do partii referencyjnej, tak, aby zapewnić spójne wybarwianie
immunohistochemiczne partia-do-partii.
Immunogen
Białko rekombinowane odpowiadające domenie zewnętrznej ludzkiej glikoproteiny CD10.
Swoistość
W testach Western blot lizatu komórek łożyska przeciwciało znakuje prążek o masie 93 kDa, co odpowiada CD10 (11).
Środki ostrożności
1. Odczynniki przeznaczone dla przeszkolonych Użytkowników.
2. Produkt zawiera silnie toksyczny związek — azydek sodu (NaN3), w czystej postaci. Stężenie NaN3 występujące
w produkcie nie jest klasyfikowane jako niebezpieczne. Jednak w wyniku reakcji NaN3 z ołowiem lub miedzią,
wchodzącymi w skład instalacji kanalizacyjnych, mogą powstawać silnie wybuchowe azydki metali. Po usunięciu
spłukać dużą ilością wody, aby zapobiec nagromadzeniu się azydku metalu w kanalizacji.
3. Podobnie jak w przypadku wszelkich materiałów pochodzących ze źródeł biologicznych, należy stosować
właściwe procedury postępowania.
4. Należy stosować właściwe wyposażenie ochronne, zabezpieczające przed kontaktem odczynnika ze skórą bądź
oczami.
5. Niewykorzystany roztwór utylizować zgodnie z lokalnymi, wojewódzkimi i krajowymi rozporządzeniami.
Przechowywanie
(118531-001)
Przechowywać w temperaturze 2–8 °C. Nie stosować po upływie terminu ważności podanego na fiolce. Jeżeli
odczynniki są przechowywane w warunkach innych niż podane na ulotce dołączanej do opakowania, Użytkownik
powinien je zweryfikować. Nie ma oczywistych oznak wskazujących na niestabilność produktu. Dlatego jednocześnie
z badaniem próbek pochodzących od pacjenta należy wykonywać kontrole dodatnie i ujemne. W wypadku
nieoczekiwanego wyniku odczynu, którego nie można wyjaśnić różnicami w procedurach laboratoryjnych, gdy
podejrzewa się problem z przeciwciałem, należy się skontaktować z działem wsparcia technicznego firmy Dako.
M7308/PL/JOG/21.04.08 str. 1/3
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Faks +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Przygotowanie
próbek
oraz materiały
wymagane, ale
niedostarczane
Skrawki parafinowe:
Przeciwciała mogą być stosowane do znakowania skrawków utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie.
Wymagane jest poddanie odparafinowanych* skrawków tkankowych cieplnemu odmaskowaniu antygenu (HIER).
Optymalne wyniki uzyskuje się w wyniku wstępnej obróbki tkanek w procesie HIER przy użyciu roztworu Dako
EnVision™ FLEX Target Retrieval Solution, High pH (nr kat. K8000/K8004/K8010/K8014).
Do obróbki wstępnej utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków tkankowych, które zostały
odparafinowane, zalecany jest odczynnik Dako PT Link (nr kat. PT100/PT101). Szczegółowe instrukcje zawiera
Instrukcja Użytkownika aparatu PT Link (PT Link User Guide). Dla aparatów PT Link należy stosować następujące
parametry: temperatura wstępnego ogrzewania: 65°C; temperatura i czas odmaskowania antygenu: 97 °C przez 20
(±1) minut, ochłodzić do 65 °C. Usunąć statywy na szkiełka aparatu Autostainer wraz ze szkiełkami ze zbiornika
aparatu PT Link i natychmiast zanurzyć szkiełka w słoju/zbiorniku (np. PT Link Rinse Station, nr kat. PT109)
wypełnionym rozcieńczonym (10x) buforem EnVision™ FLEX Wash Buffer (nr kat. K8000/K8010) o temperaturze
pokojowej. Zostawić szkiełka w roztworze płuczącym Wash Buffer na 1–5 minut.
*Skrawki zatapiane w parafinie: W celu odmiennego przygotowania próbek odparafinowanie, ponowne uwodnienie i
odmaskowanie można wykonać w aparacie PT Link z zastosowaniem zmienionej procedury. Informacje można
znaleźć w Instrukcji użytkownika aparatu PT Link. Po zakończeniu wykonywania odczynu skrawki tkankowe należy
poddać odwodnieniu, oczyszczeniu i nakryć za pomocą środka do trwałego zatapiania.
W trakcie przygotowywania oraz podczas procedury znakowania immunohistochemicznego skrawki nie powinny
wyschnąć. W celu uzyskania lepszego przylegania skrawków do szkiełek podstawowych zaleca się stosowanie
szkiełek Dako Silanized Slides (nr kat. S3003).
Skrawki mrożone i rozmazy komórkowe:
Nie zaleca się stosowania przeciwciał do odczynów na utrwalonych w acetonie skrawkach mrożonych lub
utrwalonych rozmazach cytologicznych.
Procedura barwienia
oraz materiały
wymagane, ale
niedostarczane
Rozcieńczanie: Przeciwciała Monoclonal Mouse Anti-Human CD10, nr kat. M7308, mogą być używane w zakresie
rozcieńczeń od 1:40 do 1:80 na poddanych wstępnej obróbce utrwalanych w formalinie skrawkach zatopionych w
parafinie, przy 30-minutowej inkubacji w temperaturze pokojowej. Zaleca się rozcieńczenie przeciwciała
odczynnikiem EnVision™ FLEX Antibody Diluent (nr kat. K8006/K8016). Są to jednak wyłącznie wytyczne.
Optymalne warunki mogą się zmieniać w zależności od rodzaju materiału i sposobu jego przygotowania i powinny
być określone indywidualnie w każdym laboratorium. Zalecana kontrola ujemna to odczynnik Dako Negative Control,
Mouse IgG1 (nr kat. X0931) rozcieńczony do tego samego stężenia IgG, co przeciwciało pierwotne. O ile nie
potwierdzono stabilności rozcieńczonych przeciwciał i kontroli ujemnej w rzeczywistej procedurze wykonania
odczynu, zaleca się rozcieńczenie tych odczynników bezpośrednio przed użyciem. Równolegle z odczynami na
materiale pochodzącym od pacjentów należy wykonywać dodatnie i ujemne próby kontrolne.
Równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów należy wykonywać dodatnie i ujemne kontrole
tkankowe z użyciem identycznego protokołu. Dodatnia kontrola tkankowa powinna obejmować ośrodki rozmnażania
prawidłowych migdałków, natomiast we wszystkich dodatnich preparatach komórki/struktury powinny wskazywać
odczyn reakcji taki jak opisany dla tej tkanki w części „Charakterystyka wydajnościowa”.
Wizualizacja: Zaleca się użycie EnVision FLEX, High pH, (nr kat. K8000/K8010), przy 30-minutowej inkubacji w
temperaturze pokojowej. Postępować zgodnie z procedurą dostarczoną z wybranymi systemami do wizualizacji.
Automatyzacja: Przeciwciała dobrze nadają się do wykonywania odczynów immunohistochemicznych w systemach
zautomatyzowanych takich, jak Dako Autostainer, Autostainer Plus oraz Autostainer Link.
Interpretacja
wybarwienia
Komórki znakowane przez przeciwciała wykazują odczyn błonowy.
Charakterystyka
działania
Tkanki prawidłowe: W wątrobie kanaliki żółciowe wykazują odczyn z zakresu od umiarkowanego do silnego. W
migdałkach komórki B z ośrodków rozmnażania wykazują odczyn z zakresu od słabego do umiarkowanego.
Przeciwciało znakuje komórki macierzyste szpiku kostnego, część niedojrzałych komórek B w szpiku kostnym oraz
neutrofili (8, 9, 11). Przeciwciało znakuje także komórki kłębuszków i kanalików nerkowych, ośrodki rozmnażania w
blaszce właściwej okrężnicy, rąbki szczoteczkowe enterocytów w jelicie cienkim, rąbek szczoteczkowy nabłonka
pęcherzyka żółciowego, komórki zrębu śródmiąższu płuca, komórki nerwowe Schwanna, komórki zrębu
śródpęczkowe mięśmi prążkowanych, fibroblasty, trofoblasty i cytotrofoblasty syncytialne łożyska, nabłonek gruczołu
prostaty i płyn nasienny, komórki zrębu śluzówki i komórki mioepitelialne sutka (6, 7, 9, 11).
Tkanki patologiczne: Przeciwciało oznakowało 3/3 i 2/3 chłoniaki Burkitta, a także 4/5 i 30/33 przypadki ostrej
białaczki limfoblastycznej pochodzącej z prekursorowych komórek B (B-ALL) (1, 2). Przeciwciało oznakowało 22/28,
12/15, 9/10 i 10/11 przypadków chłoniaka typu grudkowego (1, 3, 4, 11) oraz 12/15 przypadków chłoniaka
grudkowego stopnia I, nie zaobserwowano zaś wcale ekspresji lub tylko słabą ekspresję w 5/6 przypadków
chłoniaka grudkowego stopnia III (5). Ponadto przeciwciało oznakowało 41/46 raków z komórek nerkowych (6) i raki
przerzutowe jasnokomórkowe nerek (7). Przeciwciało oznakowało także 2/5 białaczek limfoblastycznych z
prekursorów limfocytów T (T-ALL) (6), a także 11/11 przypadków rozlanego chłoniaka z dużych komórek B (10).
(118531-001)
M7308/PL/JOG/21.04.08 str. 2/3
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Faks +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Piśmiennictwo
1.
Kaufmann O, Flath B, Späth-Schwalbe, Possinger K and Dietel M. Immunohistochemical detection of CD10
with monoclonal antibody 56C6 on paraffin sections. Am J Clin Pathol 1999; 11:117-22.
2.
Chu PG, Chang KL, Weiss LM and Arber DA. Immunohistochemical detection of CD10 in paraffin sections of
hematopoietic neoplasms. App Imm & Mol Morphol. 2000;8:257-62.
3.
Chen CC, Raikow RB, Sonmez-Alpan E and Swerdlow S. Classification of small B-cell lymphoid neoplasms
using a paraffin section immunohistochemical panel. App Imm & Mol Morphol 2000;8:1-11.
4.
Lorsbach RB, Shay-Seymore D, Moore J, Banks PM, Hasserjian RP, Sandlund JT and Behm FG.
Clinicopathologic analysis of follicular lymphoma occurring in children. Blood 2002;99:1959-64.
5.
Eshoa C, Perkins S, Kampalath B, Shidham, Juckett M, and Chang C-C. Deceased CD10 expression in grade
III and in interfollicular infiltrates of follicular lymphomas. Am J Clin Pathol 2001; 115:862-7.
6.
Chu P and Arber DA. Paraffin section detection of CD10 in 505 nonhematopoietic neoplasms. Frequent
expression in renal cell carcinoma and endometrial stromal sarcoma. Am J Clin Patholl 2000;113:374-82.
7.
Ordi J, Romagosa C, Tavassoli FA, Nogales F, Palacin A, Condom E, et al. CD10 expression in epithelial tissue
and tumors of the gynecologic tract. A useful marker in the diagnosis of mesonephric, trophoblastic, and clear
cell tumors. Am J Surg Pathol 2003; 27:178-86.
8.
Béné MC, Faure GC and the GEIL (Group D’Etude Immunologique des Luecémies). CD10 in acute leukemias.
Haematologica 1997;82:205-10.
9.
Leong AS-Y, Cooper K and Leong FJW-M. CD10. Manual of diagnostic antibodies for immunohistology.
London: Greenwich medical media; 2003. p. 77-78.
10. Le Gouill S, Talmant P, Touzeau C, Moreau A, Garand R, Juge-Morineau N, et al. The clinical presentation and
prognosis of diffuse large B-cell lymphoma with t(14:18) and 8q24/c-MYC rearrangement. The hematology
journal 2007;92:1335-42.
11. McIntosh GG, Lodge AJ, Watson P, Hall AG, Wood K, Anderson JJ et al. NCL-CD10-270: A new monoclonal
antibody recognizing CD10 in paraffin-embedded tissue. Am J Pathol 1999; 154:77-82.
Objaśnienie symboli
(118531-001)
Numer katalogowy
Temperatura przechowywania
Wyrób medyczny do
diagnostyki in vitro
Numer serii
Sprawdzić w instrukcji
stosowania
Zużyć przed
Producent
M7308/PL/JOG/21.04.08 str. 3/3
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Faks +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17