Nr kat. IR508
Transkrypt
Nr kat. IR508
FLEX Polyclonal Rabbit Anti-Human Chorionic Gonadotropin Ready-to-Use (Link) Nr kat. IR508 Przeznaczenie Do stosowania w diagnostyce in vitro. Przeciwciała FLEX Polyclonal Rabbit Anti-Human Chorionic Gonadotropin, Ready-to-Use, (Link), są przeznaczone do stosowania w immunohistochemii w aparatach Autostainer Link. Przeciwciała te są przydatne w identyfikacji komórek zawierających hCG (1) i moŜna ich uŜyć w celu stwierdzenia obecności elementów trofoblastycznych np. w komórkach guzów zarodkowych (2). Interpretacja kliniczna wystąpienia lub braku barwienia musi być uzupełniona przez badania morfologiczne z wykorzystaniem odpowiednich prób kontrolnych i powinna być przeprowadzana przez doświadczonego patologa z uwzględnieniem historii choroby pacjenta i innych badań diagnostycznych. Streszczenie i informacje ogólne Ludzka gonadotropina kosmówkowa (hCG) to glikoproteina o masie cząsteczkowej 40 kDa złoŜona w z dwóch podjednostek α i β. Podjednostka α występuje w hCG, hormonie luteinizującym (LH), hormonie folikulotropowym (FSH) i hormonem tyreotropowym (TSH), natomiast podjednostka β występuje tylko w hCG, choć jej sekwencja aminokwasów częściowo pokrywa się z sekwencją podjednostki β hormonu LH (3, 4). hCG jest najwaŜniejszym markerem komórek trofoblastycznych ciąŜowych, występujących w komórkach syncytiotrofoblastycznych i komórkach pośrednio trofoblastycznych. Nie występuje w cytotrofoblastach. Ekspresję hCG wykazano takŜe w niektórych guzach innych niŜ trofoblastyczne np. u 14% pacjentów z nowotworami z komórek wątroby (4). W ciąŜy stęŜenie hCG w surowicy zwiększa się początkowo w sposób wykładnikowy, następnie osiąga wartość szczytową przy ok. 100 kIU/L po ok. 10-tym tygodniu po zapłodnieniu. StęŜenie zmniejsza się dziesięciokrotnie przez następnych kilka tygodni, a następnie odnotowywany jest niewielki wzrost pod koniec terminu (5). Zobacz dokument Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych firmy Dako lub następujące części instrukcji do systemu detekcji IHC: 1) Zasady procedury, 2) Niezbędne materiały niedostarczone z zestawem, 3) Przechowywanie, 4) Przygotowanie preparatu, 5) Wykonanie odczynu, 6) Kontrola jakości, 7) Rozwiązywanie problemów, 8) Interpretacja wyniku odczynu, 9) Ograniczenia metody. Dostarczany odczynnik Gotowe do uŜycia poliklonalne przeciwciało królicze dostarczane w postaci płynnej w buforze zawierającym białko stabilizujące i NaN3 o stęŜeniu 0,015 mol/L. Immunogen Wyizolowany łańcuch beta hCG. Swoistość Podobnie jak większość poliklonalnych przeciwciał przeciwko beta-hCG, anty-hCG wykazuje nieznaczną reaktywność krzyŜową (około 4%) z hormonem LH (3). Ślady obecności przeciwciał przeciwko innym białkom osocza ludzkiego usunięto przy uŜyciu absorpcji w fazie stałej. W badaniach metodą immunoelektroforezy krzyŜowej przy uŜyciu 12,5 µL roztworu Dako nr kat. A0231 na cm2 Ŝelu i 10 µL stęŜonego moczu kobiety cięŜarnej (15–16. tydzień ciąŜy) pojawia się wyłącznie osad hCG. Nie zaobserwowano osadu przy uŜyciu stęŜenia przeciwciała 12,5 µL na cm2 Ŝelu w badaniach z 10 µL prawidłowego ludzkiego osocza. Barwnik: Coomassie Brilliant Blue. Środki ostroŜności 1. Odczynniki przeznaczone dla przeszkolonych UŜytkowników. 2. Opisywany produkt zawiera silnie toksyczny związek — azydek sodu (NaN3), w czystej postaci. StęŜenie NaN3 występujące w produkcie nie jest klasyfikowane jako niebezpieczne. Jednak w wyniku reakcji NaN3 z ołowiem lub miedzią, wchodzącymi w skład instalacji kanalizacyjnych, mogą powstawać silnie wybuchowe azydki metali. Przy usuwaniu resztek odczynnika uŜywać duŜych ilości wody do przepłukiwania, aby uniknąć gromadzenia się azydków w instalacji kanalizacyjnej. 3. Podobnie jak w przypadku kaŜdego produktu otrzymywanego z materiału biologicznego, naleŜy stosować odpowiednie procedury postępowania. 4. NaleŜy stosować właściwe wyposaŜenie ochronne, zabezpieczające przed kontaktem odczynnika ze skórą bądź oczami. 5. Niewykorzystany odczynnik naleŜy usuwać zgodnie ze stosownymi przepisami lokalnymi i krajowymi. Przechowywanie Przechowywać w temperaturze 2–8°C. Nie stosowa ć po upływie terminu waŜności podanego na opakowaniu. JeŜeli odczynniki są przechowywane w warunkach innych niŜ podane na ulotce dołączanej do opakowania, UŜytkownik powinien je zweryfikować. Nie ma jednoznacznych oznak świadczących o niestabilności tego produktu. Z tego względu jednocześnie z badaniem próbek pochodzących od pacjentów, naleŜy wykonywać dodatnie i ujemne próby kontrolne. W wypadku nieoczekiwanego wyniku odczynu, którego nie moŜna wyjaśnić róŜnicami w procedurach laboratoryjnych, gdy podejrzewa się problem z przeciwciałem, naleŜy się skontaktować z działem wsparcia technicznego firmy Dako. Przygotowanie próbek i materiały dodatkowe wymagane, ale niedostarczane Przeciwciała mogą być wykorzystane do znakowania utrwalonych formaliną skrawków zatapianych w parafinie. Preparaty tkankowe naleŜy pociąć na skrawki o wymiarach około 4 µm. Wymagane jest poddanie cieplnemu odmaskowaniu antygenu (HIER) z uŜyciem Dako PT Link (nr kat. PT100/PT101). Szczegółowe instrukcje zawiera Instrukcja uŜytkownika aparatu PT Link. Optymalne wyniki uzyskuje się w wyniku wstępnej obróbki tkanek przy uŜyciu roztworu EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH (115706-002) Dako Denmark A/S IR508/PL/MNI/2009.12.04 s. 1/2 | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17 (50x) (nr kat. K8000/K8004). Skrawki zatapiane w parafinie: Do obróbki wstępnej utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków tkankowych, zalecana jest procedura 3 w 1 z uŜyciem odczynnika Dako PT Link. Postępować według procedury wstępnej obróbki tkanek, zamieszczonej w ulotce roztworu EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x) (nr kat. K8000/K8004). Uwaga: Po przeprowadzeniu barwienia skrawki muszą być odwodnione, oczyszczone zakryte za pomocą środka do trwałego zatapiania. Odparafinowane skrawki: Do obróbki wstępnej utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków tkankowych, zalecane jest uŜycie odczynnika Dako PT Link i przeprowadzenie procedury opisane dla skrawków parafinowych. Po zakończeniu barwienia szkiełka naleŜy zatopić w wodnym lub trwałym środku do zatapiania. W trakcie przygotowywania oraz podczas procedury znakowania immunohistochemicznego skrawki nie powinny wyschnąć. W celu uzyskania lepszego przylegania skrawków do szkiełek podstawowych, zaleca się stosowanie szkiełek FLEX IHC Microscope Slides (nr kat. K8020). Wykonanie odczynu oraz materiały wymagane, ale niedostarczane Zalecanym systemem wizualizacji jest EnVision FLEX, High pH (Link) (nr kat. K8000). W systemie Autostainer Link wstępnie zaprogramowano etapy odczynu i czasy inkubacji. Zalecana objętość uŜytego odczynika to 1 x 200 µL lub 2 x 150 µL na preparat. Szczegółowe informacje dotyczące wkładania szkiełek mikroskopowych i odczynników przedstawiono w Instrukcji uŜytkownika aparatu Autostainer Link. Jeśli protokoły nie są dostępne w uŜywanym systemie Autostainer, naleŜy skontaktować się z działem wsparcia technicznego firmy Dako. Wszystkie procedury inkubacji naleŜy równieŜ przeprowadzać w temperaturze pokojowej. Optymalne warunki mogą się zmieniać w zaleŜności od rodzaju materiału oraz sposobów jego przygotowania i powinny być określone indywidualnie w kaŜdym laboratorium. JeŜeli patolog oceniający preparat Ŝyczy sobie wybarwienia innym natęŜeniu, czasy inkubacji oraz uŜycie szablonów wizualizacji EnVision FLEX/EnVision FLEX+ mogą zostać zmienione. W celu uzyskania informacji dotyczącej zmiany programowania protokołu, naleŜy skontaktować się z działem obsługi/obsługą techniczną firmy Dako. NaleŜy upewnić się, Ŝe działanie zmodyfikowanego protokołu jest prawidłowe — w tym celu naleŜy ocenić, czy odczyn jest taki jak opisany w części „Charakterystyka wydajnościowa”. Zalecane jest barwienie kontrastowe hematoksyliną za pomocą EnVision FLEX Hematoxylin (nr kat. K8008). Zaleca się stosowanie niewodnego, trwałego środka do zatapiania. Równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów naleŜy wykonywać dodatnie i ujemne próby kontrolne z uŜyciem identycznego protokołu. Dodatnia kontrola tkankowa powinna obejmować łoŜysko, natomiast we wszystkich dodatnich preparatach komórki/struktury powinny wskazywać odczyn reakcji taki jak opisany dla tej tkanki w części „Charakterystyka wydajnościowa”. Zalecana kontrola ujemna to FLEX Negative Control, Rabbit (Link) (nr kat. IR600). Interpretacja odczynu Przeciwciała dają odczyn cytoplazmatyczny. Charakterystyka wydajnościowa Tkanki prawidłowe: W komórkach łoŜyska w pierwszym trymestrze przeciwciała dają odczyn z licznymi ziarnistościami cytoplazmy komórek syncytiotrofoblastycznych, takŜe w trakcie egzocytozy (1). Tkanki nieprawidłowe: Przebadano 189 próbek pobranych z wyciętych jąder z guzami zarodkowymi (95 czystych nasieniaków i 94 nowotwory inne niŜ nasieniaki). W 8% próbek nasieniaków i w 30% próbek nowotworów innych niŜ nasieniaki stwierdzono obecność hCG w syncytiotrofoblastach i komórkach o charakterze zbliŜonym do syncytiotrofoblastów nabłoniaka kosmówkowego złośliwego. W kilku przypadkach rak in situ w kanalikach nasiennych sąsiadujących z guzami dawał odczyn dodatni ze względu na hCG (2). Piśmiennictwo 1. Morrish DW, Marusyk H, Siy O. Demonstration of specific secretory granules for human chorionic gonadotropin in placenta. J Histochem Cytochem 1987;35:93–101. 2 Jacobsen GK, Jacobsen M. Alpha-fetoprotein (AFP) and human chorionic gonadotropin (HCG) in testicular germ cell tumors. A prospective immunohistochemical study. Acta Path Microbiol Immunol Scand Sect A 1983;91: 165–76. 3. Mehta HC, MacDonald DJ. A sensitive enzyme immunoassay specific for human chorionic gonadotrophin. Clin Chim Acta 1982;121:245–50. 4. Leong AS-Y, Cooper K, Leong FJW-M. Manual of diagnostic antibodies for immunohistology; London: Oxford University Press; 1999. p. 25–6. 5. The National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS). Choriogonadotropin testing: Nomenclature, reference preparations, assay performance, and clinical application; Approved guideline. NCCLS document I/LA10-A (1–56238–314–0) NCCLS, 940 West Valley Road, Suite 1400, Wayne, Pennsylvania 19087–1898 USA; 1996. Objaśnienie symboli Numer katalogowy Temperatura przechowywania ZuŜyć przed Wyrób medyczny do diagnostyki in vitro Zawartość wystarcza na <n> testów Producent Sprawdzić w instrukcji stosowania Numer serii (115706-002) Dako Denmark A/S IR508/PL/MNI/2009.12.04 s. 2/2 | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17