Monitorowanie stężenia leków immunosupresyjnych techniką LC

diagnostyka laboratoryjna Journal of Laboratory Diagnostics
2012 • Volume 48 • Number 3 • 265-270
Praca oryginalna • Original Article
Monitorowanie stężenia leków immunosupresyjnych
techniką LC-MS/MS na przykładzie oznaczania ewerolimusu
we krwi pacjentów po przeszczepieniach narządowych
Monitoring immunosuppressive drug concentrations using
LC-MS/MS on a basis of whole blood everolimus determination
in organ transplant patients
Paweł K. Kunicki1, Jolanta Duda2
1
Pracownia Farmakologii Klinicznej i Terapii Zakładu Biochemii Klinicznej, Instytut Kardiologii w Warszawie, 2Pracownia Farmakokinetyki
Zakładu Analizy Chemicznej, Instytut Biotechnologii i Antybiotyków w Warszawie
Streszczenie
Przedstawiono zastosowanie metody UPLC-MS/MS i zestawu analitycznego „MassTrakTM Immunosuppressants XE RUO Kit”
(Waters) do analizy stężenia ewerolimusu (EWE) w próbkach krwi pełnej pacjentów po przeszczepieniach narządowych. Metodyka i odczynniki poddane zostały częściowej walidacji. Granica oznaczalności (LLOQ) dla EWE wynosi 1,0 ng/ml. Potwierdzono, że metoda jest liniowa w zakresie 1,0-33,8 ng/ml, jest specyficzna i spełnia wymagania dla precyzji wewnątrzseryjnej
(RSD ≤ 5,7%), precyzji międzyseryjnej (RSD ≤ 8,4%), oraz dokładności wewnątrzseryjnej (100,2 %) i międzyseryjnej (97,3 %),
stabilności i efektu przeniesienia.
Materiał kliniczny stanowiło 105 próbek krwi pacjentów leczonych EWE, które analizowano podwójnie w laboratorium w Warszawie, a następnie wysyłano do laboratorium referencyjnego wykorzystującego zwalidowaną metodę LC-MS/MS. Uzyskano
wyniki stężeń EWE w zakresie 1,00-10,85, średnio: 4,43 ng/ml dla metody ocenianej oraz: 1,40-10,50, średnio: 4,53 ng/ml
dla metody referencyjnej (NS), charakteryzujące się satysfakcjonującą korelacją (r=0,9376, p<0,0001) pomimo potencjalnego
wpływu warunków i czasu transportu na wynik. Analiza Bland-Altman wykazała bias = -0,09 ng/ml (95% CI: -0,24; +0,06)
wskazujący na nieznamienność różnicy pomiędzy metodami. W wymiarze procentowym średni bias wyniósł -4,9 %, przy czym
dla decyzyjnych wartości stężenia EWE wynosił on odpowiednio: -9,4 % dla 3 ng/ml oraz +5,7 % dla 8 ng/ml. Analiza regresji
Passing-Bablok wykazała zależność y = 1,123 x - 0,43.
Zastosowana metoda pozwala na szybkie i wiarygodne oznaczanie EWE w próbkach krwi pacjentów będąc wygodnym narzędziem dla potrzeb rutynowej terapii monitorowanej i badań farmakokinetycznych.
Summary
The paper presents an implementation of the UPLC-MS/MS method and MassTrakTM Immunosuppressants XE RUO Kit
(Waters) to measure everolimus (EWE) concentrations in whole blood samples from patients after organ transplantation.
The method & reagents used were subject to partial validation. The limit of quantification (LLOQ) for EWE is 1.0 ng/ml. The
method was found: linear in the range of 1.0-33.8 ng/ml, specific and fulfilling criteria for intra- (RSD ≤ 5.7%) and inter-assay
(RSD ≤ 8.4 %) precision, intra- (100.2 %) and inter-assay accuracy (97.3 %), stability and for carry-over test.
A total number of 105 blood samples from patients treated with EWE were analyzed in duplicate – at our Warsaw laboratory,
and subsequently, the samples were transferred in series to a reference laboratory where a validated LC-MS/MS method
was used to determine EWE. Drug concentrations measured by the implemented method ranged: 1.00-10.85, (mean: 4.43)
ng/ml, whereas measured by the reference method ranged: 1.40-10.50, (mean: 4.53) ng/ml (NS). The methods correlated
well (r=0.9376, p<0.0001) despite the potential effects of sample deterioration during transfer and storage. The Bland-Altman
analysis revealed mean bias = -0.09 ng/ml (95% CI: -0.24; +0.06) indicating an insignificant difference between the methods.
The bias yielded -4.9 %, being -9.4 % at 3 ng/ml, and +5.7 % at 8 ng/ml for decisive EWE concentrations, respectively. The
Passing-Bablok regression was obtained: y = 1.123 x - 0.43.
The presented method is suitable for rapid and reliable EWE determination in patients’ samples serving as a valuable tool for
routine therapeutic drug monitoring and pharmacokinetic studies.
265
Monitorowanie stężenia leków immunosupresyjnych techniką LC-MS/MS na przykładzie oznaczania ewerolimusu ...
Słowa kluczowe:ewerolimus, takrolimus, cyklosporyna, syrolimus, LC-MS/MS, terapia monitorowana
Key words:everolimus, tacrolimus, cyclosporine, sirolimus, LC-MS/MS, therapeutic drug monitoring
266