(Dako Autostainer/Autostainer Plus) Nr kat. IS606

FLEX
Monoclonal Mouse
Anti-Human
Desmin
Klon D33
Ready-to-Use
(Dako Autostainer/Autostainer Plus)
Nr kat. IS606
Przeznaczenie
Do stosowania w diagnostyce in vitro.
Przeciwciało FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human Desmin, klon D33, Ready-to-Use, (Dako Autostainer/Autostainer
Plus), jest przeznaczone do stosowania w immunocytochemii w aparatach Dako Autostainer/Autostainer Plus.
Przeciwciało znakuje komórki mięśni gładkich i prąŜkowanych oraz komórki międzybłonka oraz jest przydatne
w identyfikacji mięsaków prąŜkowanokomórkowych (1, 2), mięśniaków gładkokomórkowych, (3, 4) i międzybłoniaków
(5). Interpretacja kliniczna dodatniego lub ujemnego odczynu musi być uzupełniona przez ocenę morfologiczną,
wykonanie odpowiednich prób kontrolnych i interpretowana przez doświadczonego patologa w kontekście historii
choroby pacjenta i innych badań diagnostycznych.
Streszczenie
i informacje ogólne
Desmina naleŜy do klasy III filamentów pośrednich, będąc częścią cytoszkieletu, jest charakterystycznym filamentem
pośrednim wszystkich trzech typów komórek mięśniowych (szkieletowych, serca i mięśni gładkich). Desmina jest
białkiem o masie cząsteczkowej 53-kDa kodowanym przez 9 eksonów genu zlokalizowanego przy 2q35.
Desmina tworzy sieć cytoszkieletu wzdłuŜ włókna mięśniowego, otaczając plazmę i błonę komórkową.
Jest zlokalizowana głównie w obszarach subplasmolemicznych i prąŜku Z (6).
Zobacz dokument Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych firmy Dako lub następujące
części instrukcji do systemu detekcji IHC: 1) Zasady procedury, 2) Materiały wymagane, ale niedostarczone
z zestawem, 3) Przechowywanie, 4) Przygotowanie preparatu, 5) Wykonanie odczynu, 6) Kontrola jakości,
7) Rozwiązywanie problemów, 8) Interpretacja wyniku odczynu, 9) Ograniczenia metody.
Dostarczany
odczynnik
Gotowe do uŜycia mysie przeciwciała monoklonalne są dostarczane w postaci ciekłej w buforze zawierającym białko
stabilizujące i roztwór azydku sodu o stęŜeniu 0,015 mol/L.
Klon: D33. Izotyp: IgG1, kappa.
Immunogen
Oczyszczona desmina ludzkich mięśni.
Swoistość
W testach Western Blot preparatów cytoszkieletu komórek MCF-7 komórki SCC-4 i RT-112s, epidermy skóry,
hodowli pierwotnej komórek raków z nerek, mięśniaka gładkiego, serca płodu i surowego ekstraktu z ludzkiej istoty
białej mózgu przeciwciało znakuje tylko prąŜek o masie cząsteczkowej ~53 kDa w preparatach mięśniaka gładkiego
i serca płodu, co wskazuje reaktywność z desminą i potwierdza brak reaktywności z innymi typami badanych
filamentów pośrednich (7).
W badaniach immunohistochemicznych na tkankach utrwalanych w formalinie i zatapianych w parafinie przeciwciało
wykazuje reaktywność krzyŜową z białkowym odpowiednikiem desminy u myszy i szczurów.
Środki ostroŜności
1. Odczynniki przeznaczone dla przeszkolonych UŜytkowników.
2. Opisywany produkt zawiera silnie toksyczny związek — azydek sodu (NaN3), w czystej postaci. StęŜenie NaN3
występujące w produkcie nie jest klasyfikowane jako niebezpieczne. Jednak w wyniku reakcji NaN3 z ołowiem lub
miedzią, wchodzącymi w skład instalacji kanalizacyjnych, mogą powstawać silnie wybuchowe azydki metali.
Przy usuwaniu resztek odczynnika uŜywać duŜych ilości wody do przepłukiwania, aby uniknąć gromadzenia
się azydków w instalacji kanalizacyjnej.
3. Podobnie jak w przypadku kaŜdego produktu otrzymywanego z materiału biologicznego, naleŜy stosować
odpowiednie procedury postępowania.
4. NaleŜy stosować właściwe wyposaŜenie ochronne, zabezpieczające przed kontaktem odczynnika ze skórą bądź
oczami.
5. Niewykorzystany odczynnik naleŜy usuwać zgodnie ze stosownymi przepisami lokalnymi i krajowymi.
Przechowywanie
Przechowywać w temperaturze 2–8 °C. Nie stosowa ć po upływie terminu waŜności podanego na opakowaniu.
JeŜeli odczynniki są przechowywane w warunkach innych niŜ podane na ulotce dołączanej do opakowania,
UŜytkownik powinien je zweryfikować. Nie ma jednoznacznych oznak świadczących o niestabilności tego produktu.
Z tego względu jednocześnie z badaniem próbek pochodzących od pacjentów, naleŜy wykonywać dodatnie i ujemne
próby kontrolne. W wypadku nieoczekiwanego wyniku odczynu, którego nie moŜna wyjaśnić róŜnicami
w procedurach laboratoryjnych, gdy podejrzewa się problem z przeciwciałem, naleŜy się skontaktować z działem
wsparcia technicznego firmy Dako.
Przygotowanie
próbek
oraz materiały
wymagane, ale
niedostarczane
Przeciwciała mogą być wykorzystane do znakowania utrwalonych formaliną skrawków zatapianych w parafinie.
Preparaty tkankowe naleŜy pociąć na skrawki o wymiarach około 4 µm.
Wymagane jest poddanie cieplnemu odmaskowaniu antygenu (HIER) z uŜyciem Dako PT Link (nr kat.
PT100/PT101). Szczegółowe instrukcje zawiera Instrukcja uŜytkownika aparatu PT Link. Optymalne wyniki uzyskuje
się w wyniku wstępnej obróbki tkanek przy uŜyciu roztworu EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH
(50x) (nr kat. K8000/K8004).
Skrawki zatapiane w parafinie: Do obróbki wstępnej utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków
tkankowych, zalecana jest procedura 3 w 1 z uŜyciem odczynnika Dako PT Link. Postępować według procedury
(116772-002)
Dako Denmark A/S
IS606/PL/MNI/2009.12.04 s. 1/3
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
wstępnej obróbki tkanek, zamieszczonej w ulotce roztworu EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x)
(nr kat. K8000/K8004). Uwaga: Po przeprowadzeniu barwienia skrawki muszą być odwodnione, oczyszczone
zakryte za pomocą środka do trwałego zatapiania.
Odparafinowane skrawki: Do obróbki wstępnej utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków
tkankowych, zalecane jest uŜycie odczynnika Dako PT Link i przeprowadzenie procedury opisane dla skrawków
parafinowych. Po zakończeniu barwienia szkiełka naleŜy zatopić w wodnym lub trwałym środku do zatapiania.
W trakcie przygotowywania oraz podczas procedury znakowania immunohistochemicznego skrawki nie powinny
wyschnąć. W celu uzyskania lepszego przylegania skrawków do szkiełek podstawowych, zaleca się stosowanie
szkiełek FLEX IHC Microscope Slides (nr kat. K8020).
Wykonanie odczynu
oraz materiały
wymagane, ale
niedostarczane
Zalecanym systemem wizualizacji jest EnVision FLEX, High pH, (Dako Autostainer/Autostainer Plus) (nr kat.
K8010). W aparacie Dako Autostainer/Autostainer Plus, które są aktywne podczas korzystania z następujących
protokołów:
Protokół wzorcowy: FLEXRTU2 (dawka odczynnika 200 µL) lub FLEXRTU3 (dawka odczynnika 300 µL)
Autoprogram: Desmin (bez barwienia kontrastowego) lub DesminH (z barwieniem kontrastowym)
W przypadku programów barwienia ≤10 szkiełek etap Auxiliary naleŜy ustawić na „rinse buffer”. W przypadku
programów barwienia >10 szkiełek etap Auxiliary naleŜy ustawić na „none”. Zapewnia to porównywalne czasy
płukania.
Wszystkie procedury inkubacji naleŜy równieŜ przeprowadzać w temperaturze pokojowej. Szczegółowe informacje
zawiera instrukcja obsługi odpowiedniego aparatu. Jeśli protokoły nie są dostępne w uŜywanym aparacie Dako
Autostainer, naleŜy skontaktować się z działem wsparcia technicznego firmy Dako.
Optymalne warunki mogą się zmieniać w zaleŜności od rodzaju materiału oraz sposobu jego przygotowania
i powinny być określone indywidualnie w kaŜdym laboratorium. Aby moŜliwe było wykonanie oceny przez patologów
z róŜnym nasileniem odczynu preparatów, naleŜy skontaktować się z działem obsługi/obsługą techniczną firmy Dako
w celu uzyskania informacji dotyczącej zmiany programowania protokołu. NaleŜy upewnić się, Ŝe działanie
zmodyfikowanego protokołu jest prawidłowe — w tym celu naleŜy ocenić, czy odczyn jest taki jak opisany w części
„Charakterystyka wydajnościowa”.
Zalecane jest barwienie kontrastowe hematoksyliną przy uŜyciu EnVision FLEX Hematoxylin, (Dako
Autostainer/Autostainer Plus) (nr kat. K8018). Zaleca się stosowanie bezwodnego, trwałego środka do zatapiania.
Równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów naleŜy wykonywać dodatnie i ujemne próby
kontrolne z uŜyciem identycznego protokołu. Dodatnia kontrola tkankowa powinna obejmować okręŜnicę,
natomiast we wszystkich dodatnich preparatach komórki/struktury powinny wskazywać odczyn reakcji taki jak
opisany dla tej tkanki w części „Charakterystyka wydajnościowa”. Zalecana kontrola ujemna to FLEX Negative
Control, Mouse, (Dako Autostainer/Autostainer Plus) (nr kat. IS750).
Interpretacja odczynu
Komórki znakowane przez przeciwciała wykazują odczyn cytoplazmatyczny. Barwienie moŜe wykazać odczyn
włókienkowy (7).
Charakterystyka
wydajnościowa
Tkanki prawidłowe: Przeciwciało znakuje komórki mięśni gładkich naczyń i przełyku (3). W 8/10 przypadków tkanek
utrwalonych przeciwciało znakuje komórki międzybłonka (5). Tkanka prawidłowa szpiku kostnego, nerek, sutka,
gruczołu krokowego, mózgu (istota szara), jelita czczego, gruczołu tarczycy, płuca, okręŜnicy, Ŝołądka, moczowodu
i migdałków wykazuje brak odczynu z wyjątkiem komórek pochodzenia mięśniowego (1). Komórki mięśni gładkich
błony mięśniowej w okręŜnicy wykazują odczyn umiarkowany do silnego, natomiast komórki mięśni gładkich
w małych naczyniach w blaszce właściwej wykazują nasilenie odczynu słabe do umiarkowanego.
Tkanki nieprawidłowe: Przeciwciało znakuje 4/4 przypadki mięsaka prąŜkowanokomórkowego (1). W ludzkim
przełyku przeciwciało znakuje 35/35 przypadków mięśniaka gładkokomórkowego, 1/3 przypadki mięśniakomięsaków
gładkokomórkowych i 3/17 guzów komórek podścieliska (3). Ponadto przeciwciało znakuje 33/33 przypadki
mięśniaków gładkokomórkowych macicy o intensywnym podziale komórkowym (4). Oznakowane zostały takŜe 8/16
przypadków złośliwego, rozsianego międzybłoniaka opłucnej (5). W ludzkich polipach pochwy i wewnątrzszyjkowych
przeciwciało znakowało komórki zrębu w tle i nietypowe komórki zrębu w zakresie warstwy podnabłonkowej (8).
Brak odczynu odnotowano w 10 przypadkach kaŜdego nerwiaka niedojrzałego, chłoniaka, guza Wilmsa, pierwotnych
guzów neuroektodermalnych i retinoblastomy (2), a takŜe 4 przypadkach raka drobnokomórkowego płuc,
3 przypadkach mięsaka Ewinga (1) i 6 przypadkach guzów zrębowych endometrium (4).
Piśmiennictwo
1.
Chang TK, Li CY, Smithson WA. Immunocytochemical study of small round cell tumors in routinely processed
specimens. Arch Pathol Lab Med 1989;113:1343-8.
2.
Pollock L, Rampling D, Greenwald SE, Malone M. Desmin expression in rhabdomyosarcoma: influence of the
desmin clone and immunohistochemical method. J Clin Pathol 1995;48:535-8.
3.
Miettinen M, Sarlomo-Rikala M, Sobin LH, Lasota J. Esophageal stromal tumors. A clinicopathologic,
immunohistochemical, and molecular genetic study of 17 cases and comparison with esophageal leiomyomas
and leiomyosarcomas. Am J Surg Pathol 2000;24:211-22.
4.
Oliva E, Young RH, Clement PB, Bhan AK, Scully RE. Cellular benign mesenchymal tumors of the uterus.
A comparative morphologic and immunohistochemical analysis of 33 highly cellular leiomyomas and six
endometrial stromal nodules, two frequently confused tumors. Am J Surg Pathol 1995;19:757-68.
5.
Hurlimann J. Desmin and neural marker expression in mesothelial cells and mesotheliomas. Hum Pathol
1994;25:753-7.
(116772-002)
Dako Denmark A/S
6.
Goebel HH, Warlo IAP. Progress in desmin-related myopathies (review). J Child Neurol 2000;15:565-72.
7.
Van Muijen GNP, Ruiter DJ, Warnaar SO. Coexpression of intermediate filament polypeptides in human fetal
and adult tissues. Lab Invest 1987;57:359-69.
8.
Pitt MA, Roberts ISD, Agbamu DA, Eyden BP. The nature of atypical multinucleated stromal cells: a study of 37
cases from different sites. Histopathol 1993;23:137-45.
IS606/PL/MNI/2009.12.04 s. 2/3
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Objaśnienie symboli
Numer katalogowy
Temperatura przechowywania
ZuŜyć przed
Wyrób medyczny do
diagnostyki in vitro
Zawartość wystarcza na <n>
testów
Producent
Sprawdzić w instrukcji
stosowania
Numer serii
(116772-002)
Dako Denmark A/S
IS606/PL/MNI/2009.12.04 s. 3/3
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17