Monoclonal Mouse Anti-Human Survivin Clone 12C4 Nr kat
Transkrypt
Monoclonal Mouse Anti-Human Survivin Clone 12C4 Nr kat
Monoclonal Mouse Anti-Human Survivin Clone 12C4 Nr kat. M3624 Przeznaczenie Do stosowania w diagnostyce in vitro. Przeciwciała przeznaczone do zastosowań laboratoryjnych, w celu identyfikacji jakościowej komórek wykazujących ekspresję surwiwiny w tkankach prawidłowych i nowotworowych, przy użyciu mikroskopii świetlnej i metod immunohistochemicznych (IHC). Wyniki panelu przeciwciał są pomocne w diagnostyce różnicowej. Interpretacja wyniku musi być przeprowadzona przez wykwalifikowanego patologa z uwzględnieniem kontekstu klinicznego, oraz wyników innych metod diagnostycznych. Synonim: Inhibitor apoptozy 4 (API4), Bakowirusowe białko 5 powtarzające IAP (Baculoviral IAP Repeat-Containing Protein 5, BIRC5) Streszczenie i informacje ogólne Surwiwina jest elementem grupy genów inhibitowów apoptozy (IAP), przeciwdziałających apoptozie przez inhibicję aktywności inicjatorowych i efektorowych kaspaz. Surwiwina wiąże się z mikrotubulami wrzeciona mitotycznego i przeciwstawia się apoptozie zależnej od mitochondriów. Wykazano, że oprócz regulacji śmierci komórki surwiwina pełni istotną rolę w podziałach, a ekrpresja regulowana jest na poziomie transkrypcji na sposób zależny od cyklu.1,2 Alternatywne odmiany składania genu dają wiele trankryptów, w tym surwiwinę-2B i surwiwinę- Ex3, różniące się aktywnością antyapoptotyczną i lokalizacją subkomórkową.3-5 Wedle doniesień, w zdrowej dojrzałej tkance ekspresja surwiwiny ograniczona jest do kilku typów komórek, w tym tymocytów, komórek macieżystych kości CD34+ i nabłonka jelita grubego.2 Nadmierną ekspresję surwiwiny zaobserwowano w różnych typach nowotworów, a jej ekspresję wiąże się ze złym rokowaniem.1,2 Zobacz dokument „Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych” firmy Dako lub następujące części instrukcji do systemu detekcji IHC: 1) Zasady procedury, 2) Niezbędne materiały niedostarczone z zestawem, 3) Przechowywanie, 4) Przygotowanie preparatu, 5) Wykonanie odczynu, 6) Kontrola jakości, 7) Rozwiązywanie problemów, 8) Interpretacja wyniku odczynu, 9) Ograniczenia metody. Dostarczany odczynnik Nr kat. M3624 Przeciwciała przeciwko surwiwinie dostarczane są w postaci płynnej jako nadsącz hodowli tkankowej (zawierający płodową surowicę bydlęcą), dializowany wobec roztworu Tris-HCl o stężeniu 0,05 mol/L , pH 7,2 i azydku sodu o stężeniu 0,015 mol/L. Zawiera białko stabilizujące. Klon: 12C4 Izotyp: IgG2a, kappa Stężenie mysich lgG [mg/L]: patrz etykieta na fiolce. Preparat M3624 może być stosowany w rozcieńczeniu 1:100 podczas IHC przy użyciu systemu detekcji CSA II. Podane informacje mają charakter wyłącznie orientacyjny. Optymalne stężenie przeciwciał może się zmieniać w zależności od rodzaju materiału i sposobu jego przygotowania. Optymalne stężenie powinno być określone indywidualnie w każdym laboratorium. Immunogen Pełnej długości rekombinant białkowy ulegający ekspresji w E. coli Swoistość W analizie techniką Western blot z fragmentami rekombinowanego białka surwiwiny, klon 12C4 wykazał swoistość dla epitopu obecnego w pierwszych 34 N-terminalnych aminokwasach białka surwiwiny.6 Materiały wymagane, ale niedostarczane Zobacz „Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych” i/lub instrukcje do systemu detekcji. Zalecany rozcieńczalnik do stosowania przy odczynach IHC: Antibody Diluent with Background Reducing Components (nr kat. S3022). Zalecana ujemna kontrola odczynów IHC: Mouse IgG2a (nr kat. X0943) Środki ostrożności 1. Odczynniki są przeznaczone dla przeszkolonych Użytkowników. 2. Opisywany produkt zawiera silnie toksyczny związek — azydek sodu (NaN3), w czystej postaci. Stężenie NaN3 występujące w produkcie nie jest klasyfikowane jako niebezpieczne. Jednak w wyniku reakcji NaN3 z ołowiem lub miedzią, wchodzącymi w skład instalacji kanalizacyjnych, mogą powstawać silnie wybuchowe azydki metali. Przy usuwaniu resztek odczynnika używać dużych ilości wody do przepłukiwania, aby uniknąć gromadzenia się azydków w instalacji kanalizacyjnej. 3. Podobnie jak w przypadku każdego produktu otrzymywanego z materiału biologicznego, należy stosować odpowiednie procedury postępowania. 4. Należy stosować właściwe wyposażenie ochronne, zabezpieczające przed kontaktem odczynnika ze skórą bądź oczami. 5. Niewykorzystane odczynniki należy usuwać zgodnie ze stosownymi przepisami lokalnymi i ogólnokrajowymi. (114189-002) 306321PL_001 s. 1/3 Przechowywanie Przechowywać w temperaturze 2–8°C. Nie należy używać odczynników po upływie terminu ważności podanego na fiolce. Jeżeli odczynniki są przechowywane w warunkach innych niż podane na ulotce dołączanej do opakowania, Użytkownik powinien je zweryfikować. Nie ma jednoznacznych oznak świadczących o niestabilności tego produktu. Dlatego równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów należy wykonywać dodatnie i ujemne próby kontrolne. W wypadku nieoczekiwanego wyniku odczynu, którego nie można wyjaśnić różnicami w procedurach laboratoryjnych, gdy podejrzewa się problem z przeciwciałem, należy się skontaktować z działem wsparcia technicznego firmy Dako. Przygotowanie próbek Skrawki parafinowe Przeciwciała przeciwko surwiwinie można stosować do skrawków utrwalanych w formalinie i zatapianych w parafinie. Nie zaleca się trawienia tkanki enzymami proteolitycznymi. Po odparafinowaniu, przed wykonaniem odczynu IHC skrawki powinny być poddane obróbce cieplnej (odmaskowaniu antygenu). Cieplne odmaskowanie antygenu (Heat-induced epitope retrieval — HIER) polega na umieszczeniu skrawków w ogrzanym uprzednio roztworze buforu i utrzymaniu temperatury w łaźni wodnej (95–99 °C). Do HIER można zastosować alternatywne źródła ciepła po zweryfikowaniu ich zgodności z procedurą. Zaleca się stosowanie protokołu ogrzewania HIER przez 40 minut w temperaturze 95–99 °C. Po zakończeniu ogrzewania należy odstawić pojemnik z buforem zawierającym preparaty do ostygnięcia w temperaturze pokojowej przez 20 minut. Po zakończeniu HIER dokładnie przepłukać roztworem buforu lub wodą dejonizowaną. W celu uzyskania lepszego przylegania skrawków do szkiełek podstawowych zaleca się stosowanie szkiełek Silanized Slides (nr kat. S3003). Zaleca się stosowanie preparatu Target Retrieval Solution (roztworu do odzyskiwania antygenu) (nr kodu S1700) lub 10xConcentrate (10x koncentrat) (nr kodu S1699). Skrawki mrożakowe i rozmazy cytologiczne Przeciwciała przeciwko surwiwinie nie mogą być stosowane do odczynów na utrwalonych w acetonie skrawkach mrożakowych lub utrwalonych rozmazach cytologicznych. Wykonanie odczynu Postępować według procedury, stosownie do wybranego systemu detekcji. Interpretacja odczynu Przeciwciała anty-surwiwinie dają reakcję jądrową i/lub cytoplazmatyczną. Charakterystyka wydajnościowa Prawidłowe tkanki 7 Rodzaj tkanki (liczba testowanych przypadków) Szpik kostny (3) Szyjka macicy (3) Jelito grube (2) Przełyk (2) Trzustka (3) Gruczoł krokowy (3) Skóra (3) Jelito cienkie (3) Śledziona (3) Żołądek (3) Jądra (3) Grasica (3) Migdałki (3) Macica (3) Nadnercza (3) Gruczoły sutkowe (3) Mózg, móżdżek (3) Mózg, mózgowie (3) Serce (3) Nerki (3) Wątroba (3) Płuca (3) Komórki międzybłonka (3) Nerwy (2) Jajniki (3) Przytarczyce (3) Przysadka mózgowa (3) Ślinianki (3) Mięśnie szkieletowe (3) Tarczyca (2) (114189-002) Składniki komórkowe dające odczyn dodatni 2/3 Komórki krwiotwórcze (<5%), jądrowo; 1/3 histocyty (<5%), cytoplazmatycznie 3/3 Komórki podstawowe nabłonka (<5%), jądrowo 2/2 Głęboki nabłonek gruczołowy (<5%), jądrowo; 1/2 limfocyty (<5%), jądrowo 1/2 Komórki podstawowe nabłonka (<5%), jądrowo 1/3 Komórki zrazików (20%), ziarnisto cytoplazmatycznie 2/3 Komórki nabłonka gruczołowego (<5%), jądrowo i/lub cytoplazmatycznie 2/3 Keratynocyty (5–10%), jądrowo 1/3 Keratynocyty (<5%), jądrowo 3/3 Głęboki nabłonek (<5%), jądrowo; 2/3 limfocyty (<5%), jądrowo 3/3 Limfocyty (<5%), jądrowo 2/3 Nabłonek gruczołowy (<5%), jądrowo; 1/3 limfocyty (<5%), jądrowo 3/3 Spermatogonia (60–70%), jądrowo (ziarnisto) 3/3 Limfocyty (<5%), jądrowo 3/3 Komórki podstawowe nabłonka (<5%), jądrowo; limfocyty (<5%), jądrowo 2/3 Komórki nabłonka gruczołowego (<5%), jądrowo; embrionalne komórki zrębu (<5%), jądrowo; komórki mięśniówki macicy (<5%), jądrowo 0/3 0/3 0/3 0/3 0/3 0/3 0/3 0/3 0/3 0/2 0/3 0/3 0/3 0/3 0/3 0/2 306321PL_001 s. 2/3 Tkanki nieprawidłowe2 Nadmierną ekspresję surwiwiny zaobserwowano w szerokiej gamie nowotworów, między innymi w rakach płuc, sutka, okrężnicy, żołądka, przełyku, trzustki, wątroby, macicy, jajników, chłoniakach ziarniczych, chłoniakach nieziarniczych, białaczkach, nerwiakach niedojrzałych, guzach chromochłonnych, mięsakach tkanek miękkich, glejakach i czerniakach. 2 Piśmiennictwo 1. Li F. Survivin study: what is the next wave? J Cell Physiol 2003; 197(1):8–29 2. Altieri DC. Validating survivin as a cancer therapeutic target. Nat Rev Cancer 2003; 3(1):46–54 3. Mahotka C, Wenzel M, Springer E, Gabbert HE, Gerharz CD. Survivin-deltaEx3 and survivin-2B: two novel splice variants of the apoptosis inhibitor survivin with different antiapoptotic properties. Cancer Res 1999; 59(24):6097–6102 4. Badran A, Yoshida A, Ishikawa K, Goi T, Yamaguchi A, Ueda T, Inzuka M. Identification of a novel splice variant of the human antiapoptosis gene survivin. Biochem Biophys Res Commun 2004; 314(3):902–907 5. Fortugno P, Wall NR, Giodini A, O'Connor DS, Plescia J, Padgett KM, Tognin S, Marchisio PC, Altieri DC. Survivin exists in immunochemically distinct subcellular pools and is involved in spindle microtubule function. J Cell Sci 2002; 115(Pt 3):575–585 6. Specificity Report On File 7. IHC003 Report On File (114189-002) 306321PL_001 s. 3/3