Monoclonal Mouse Anti-Human Survivin Clone 12C4 Nr kat

Monoclonal Mouse
Anti-Human
Survivin
Clone 12C4
Nr kat. M3624
Przeznaczenie
Do stosowania w diagnostyce in vitro.
Przeciwciała przeznaczone do zastosowań laboratoryjnych, w celu identyfikacji jakościowej komórek wykazujących ekspresję surwiwiny w
tkankach prawidłowych i nowotworowych, przy użyciu mikroskopii świetlnej i metod immunohistochemicznych (IHC). Wyniki panelu
przeciwciał są pomocne w diagnostyce różnicowej. Interpretacja wyniku musi być przeprowadzona przez wykwalifikowanego patologa z
uwzględnieniem kontekstu klinicznego, oraz wyników innych metod diagnostycznych.
Synonim:
Inhibitor apoptozy 4 (API4), Bakowirusowe białko 5 powtarzające IAP (Baculoviral IAP Repeat-Containing Protein 5, BIRC5)
Streszczenie i informacje ogólne
Surwiwina jest elementem grupy genów inhibitowów apoptozy (IAP), przeciwdziałających apoptozie przez inhibicję aktywności
inicjatorowych i efektorowych kaspaz. Surwiwina wiąże się z mikrotubulami wrzeciona mitotycznego i przeciwstawia się apoptozie zależnej
od mitochondriów. Wykazano, że oprócz regulacji śmierci komórki surwiwina pełni istotną rolę w podziałach, a ekrpresja regulowana jest na
poziomie transkrypcji na sposób zależny od cyklu.1,2 Alternatywne odmiany składania genu dają wiele trankryptów, w tym surwiwinę-2B i
surwiwinę- Ex3, różniące się aktywnością antyapoptotyczną i lokalizacją subkomórkową.3-5 Wedle doniesień, w zdrowej dojrzałej tkance
ekspresja surwiwiny ograniczona jest do kilku typów komórek, w tym tymocytów, komórek macieżystych kości CD34+ i nabłonka jelita
grubego.2 Nadmierną ekspresję surwiwiny zaobserwowano w różnych typach nowotworów, a jej ekspresję wiąże się ze złym rokowaniem.1,2
Zobacz dokument „Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych” firmy Dako lub następujące części instrukcji do
systemu detekcji IHC: 1) Zasady procedury, 2) Niezbędne materiały niedostarczone z zestawem, 3) Przechowywanie, 4) Przygotowanie
preparatu, 5) Wykonanie odczynu, 6) Kontrola jakości, 7) Rozwiązywanie problemów, 8) Interpretacja wyniku odczynu, 9) Ograniczenia
metody.
Dostarczany odczynnik
Nr kat. M3624
Przeciwciała przeciwko surwiwinie dostarczane są w postaci płynnej jako nadsącz hodowli tkankowej (zawierający płodową surowicę
bydlęcą), dializowany wobec roztworu Tris-HCl o stężeniu 0,05 mol/L , pH 7,2 i azydku sodu o stężeniu 0,015 mol/L. Zawiera białko
stabilizujące.
Klon: 12C4
Izotyp: IgG2a, kappa
Stężenie mysich lgG [mg/L]: patrz etykieta na fiolce.
Preparat M3624 może być stosowany w rozcieńczeniu 1:100 podczas IHC przy użyciu systemu detekcji CSA II. Podane informacje mają
charakter wyłącznie orientacyjny. Optymalne stężenie przeciwciał może się zmieniać w zależności od rodzaju materiału i sposobu jego
przygotowania. Optymalne stężenie powinno być określone indywidualnie w każdym laboratorium.
Immunogen
Pełnej długości rekombinant białkowy ulegający ekspresji w E. coli
Swoistość
W analizie techniką Western blot z fragmentami rekombinowanego białka surwiwiny, klon 12C4 wykazał swoistość dla epitopu obecnego w
pierwszych 34 N-terminalnych aminokwasach białka surwiwiny.6
Materiały wymagane, ale niedostarczane
Zobacz „Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych” i/lub instrukcje do systemu detekcji. Zalecany rozcieńczalnik
do stosowania przy odczynach IHC:
Antibody Diluent with Background Reducing Components (nr kat. S3022).
Zalecana ujemna kontrola odczynów IHC:
Mouse IgG2a (nr kat. X0943)
Środki ostrożności
1. Odczynniki są przeznaczone dla przeszkolonych Użytkowników.
2. Opisywany produkt zawiera silnie toksyczny związek — azydek sodu (NaN3), w czystej postaci. Stężenie NaN3 występujące w
produkcie nie jest klasyfikowane jako niebezpieczne. Jednak w wyniku reakcji NaN3 z ołowiem lub miedzią, wchodzącymi w skład
instalacji kanalizacyjnych, mogą powstawać silnie wybuchowe azydki metali. Przy usuwaniu resztek odczynnika używać dużych ilości
wody do przepłukiwania, aby uniknąć gromadzenia się azydków w instalacji kanalizacyjnej.
3. Podobnie jak w przypadku każdego produktu otrzymywanego z materiału biologicznego, należy stosować odpowiednie procedury
postępowania.
4. Należy stosować właściwe wyposażenie ochronne, zabezpieczające przed kontaktem odczynnika ze skórą bądź oczami.
5. Niewykorzystane odczynniki należy usuwać zgodnie ze stosownymi przepisami lokalnymi i ogólnokrajowymi.
(114189-002)
306321PL_001 s. 1/3
Przechowywanie
Przechowywać w temperaturze 2–8°C. Nie należy używać odczynników po upływie terminu ważności podanego na fiolce. Jeżeli odczynniki
są przechowywane w warunkach innych niż podane na ulotce dołączanej do opakowania, Użytkownik powinien je zweryfikować. Nie ma
jednoznacznych oznak świadczących o niestabilności tego produktu. Dlatego równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od
pacjentów należy wykonywać dodatnie i ujemne próby kontrolne. W wypadku nieoczekiwanego wyniku odczynu, którego nie można wyjaśnić
różnicami w procedurach laboratoryjnych, gdy podejrzewa się problem z przeciwciałem, należy się skontaktować z działem wsparcia
technicznego firmy Dako.
Przygotowanie próbek
Skrawki parafinowe
Przeciwciała przeciwko surwiwinie można stosować do skrawków utrwalanych w formalinie i zatapianych w parafinie. Nie zaleca się
trawienia tkanki enzymami proteolitycznymi.
Po odparafinowaniu, przed wykonaniem odczynu IHC skrawki powinny być poddane obróbce cieplnej (odmaskowaniu antygenu). Cieplne
odmaskowanie antygenu (Heat-induced epitope retrieval — HIER) polega na umieszczeniu skrawków w ogrzanym uprzednio roztworze
buforu i utrzymaniu temperatury w łaźni wodnej (95–99 °C). Do HIER można zastosować alternatywne źródła ciepła po zweryfikowaniu ich
zgodności z procedurą. Zaleca się stosowanie protokołu ogrzewania HIER przez 40 minut w temperaturze 95–99 °C. Po zakończeniu
ogrzewania należy odstawić pojemnik z buforem zawierającym preparaty do ostygnięcia w temperaturze pokojowej przez 20 minut. Po
zakończeniu HIER dokładnie przepłukać roztworem buforu lub wodą dejonizowaną. W celu uzyskania lepszego przylegania skrawków do
szkiełek podstawowych zaleca się stosowanie szkiełek Silanized Slides (nr kat. S3003). Zaleca się stosowanie preparatu Target Retrieval
Solution (roztworu do odzyskiwania antygenu) (nr kodu S1700) lub 10xConcentrate (10x koncentrat) (nr kodu S1699).
Skrawki mrożakowe i rozmazy cytologiczne
Przeciwciała przeciwko surwiwinie nie mogą być stosowane do odczynów na utrwalonych w acetonie skrawkach mrożakowych lub
utrwalonych rozmazach cytologicznych.
Wykonanie odczynu
Postępować według procedury, stosownie do wybranego systemu detekcji.
Interpretacja odczynu
Przeciwciała anty-surwiwinie dają reakcję jądrową i/lub cytoplazmatyczną.
Charakterystyka wydajnościowa
Prawidłowe tkanki 7
Rodzaj tkanki (liczba
testowanych przypadków)
Szpik kostny (3)
Szyjka macicy (3)
Jelito grube (2)
Przełyk (2)
Trzustka (3)
Gruczoł krokowy (3)
Skóra (3)
Jelito cienkie (3)
Śledziona (3)
Żołądek (3)
Jądra (3)
Grasica (3)
Migdałki (3)
Macica (3)
Nadnercza (3)
Gruczoły sutkowe (3)
Mózg, móżdżek (3)
Mózg, mózgowie (3)
Serce (3)
Nerki (3)
Wątroba (3)
Płuca (3)
Komórki międzybłonka (3)
Nerwy (2)
Jajniki (3)
Przytarczyce (3)
Przysadka mózgowa (3)
Ślinianki (3)
Mięśnie szkieletowe (3)
Tarczyca (2)
(114189-002)
Składniki komórkowe dające odczyn dodatni
2/3 Komórki krwiotwórcze (<5%), jądrowo; 1/3 histocyty (<5%), cytoplazmatycznie
3/3 Komórki podstawowe nabłonka (<5%), jądrowo
2/2 Głęboki nabłonek gruczołowy (<5%), jądrowo; 1/2 limfocyty (<5%), jądrowo
1/2 Komórki podstawowe nabłonka (<5%), jądrowo
1/3 Komórki zrazików (20%), ziarnisto cytoplazmatycznie
2/3 Komórki nabłonka gruczołowego (<5%), jądrowo i/lub cytoplazmatycznie
2/3 Keratynocyty (5–10%), jądrowo
1/3 Keratynocyty (<5%), jądrowo
3/3 Głęboki nabłonek (<5%), jądrowo; 2/3 limfocyty (<5%), jądrowo
3/3 Limfocyty (<5%), jądrowo
2/3 Nabłonek gruczołowy (<5%), jądrowo; 1/3 limfocyty (<5%), jądrowo
3/3 Spermatogonia (60–70%), jądrowo (ziarnisto)
3/3 Limfocyty (<5%), jądrowo
3/3 Komórki podstawowe nabłonka (<5%), jądrowo; limfocyty (<5%), jądrowo
2/3 Komórki nabłonka gruczołowego (<5%), jądrowo; embrionalne komórki zrębu (<5%), jądrowo; komórki
mięśniówki macicy (<5%), jądrowo
0/3
0/3
0/3
0/3
0/3
0/3
0/3
0/3
0/3
0/2
0/3
0/3
0/3
0/3
0/3
0/2
306321PL_001 s. 2/3
Tkanki nieprawidłowe2
Nadmierną ekspresję surwiwiny zaobserwowano w szerokiej gamie nowotworów, między innymi w rakach płuc, sutka, okrężnicy, żołądka,
przełyku, trzustki, wątroby, macicy, jajników, chłoniakach ziarniczych, chłoniakach nieziarniczych, białaczkach, nerwiakach niedojrzałych,
guzach chromochłonnych, mięsakach tkanek miękkich, glejakach i czerniakach. 2
Piśmiennictwo
1. Li F. Survivin study: what is the next wave? J Cell Physiol 2003; 197(1):8–29
2. Altieri DC. Validating survivin as a cancer therapeutic target. Nat Rev Cancer 2003; 3(1):46–54
3. Mahotka C, Wenzel M, Springer E, Gabbert HE, Gerharz CD. Survivin-deltaEx3 and survivin-2B: two novel splice variants of the
apoptosis inhibitor survivin with different antiapoptotic properties. Cancer Res 1999; 59(24):6097–6102
4. Badran A, Yoshida A, Ishikawa K, Goi T, Yamaguchi A, Ueda T, Inzuka M. Identification of a novel splice variant of the human antiapoptosis gene survivin. Biochem Biophys Res Commun 2004; 314(3):902–907
5. Fortugno P, Wall NR, Giodini A, O'Connor DS, Plescia J, Padgett KM, Tognin S, Marchisio PC, Altieri DC. Survivin exists in
immunochemically distinct subcellular pools and is involved in spindle microtubule function. J Cell Sci 2002; 115(Pt 3):575–585
6. Specificity Report On File
7. IHC003 Report On File
(114189-002)
306321PL_001 s. 3/3