BD Trypticase Soy Agar II with 5% Sheep Blood

GOTOWE PODŁOŻA
HODOWLANE NA
PŁYTKACH – INSTRUKCJE
STOSOWANIA
PA-254053.07
wer.: April 2013
BD Trypticase Soy Agar II with 5% Sheep Blood
PRZEZNACZENIE
BD Trypticase Soy Agar II with 5% Sheep Blood jest bogatym w czynniki odżywcze
podłożem ogólnego zastosowania do izolacji i hodowli drobnoustrojów o niskich i wysokich
wymaganiach odżywczych z próbek klinicznych, a także do wykrywania reakcji
hemolitycznych.
ZASADY I OBJAŚNIENIE PROCEDURY
Metoda mikrobiologiczna.
Dzięki odpowiedniej kombinacji czynników odżywczych podłoże Trypticase Soy Agar (TSA)
zyskało dużą popularność, zarówno w postaci bez dodatków, jak i jako baza dla podłoży
zawierających krew.1 BD Trypticase Soy Agar II jest jego ulepszoną wersją, w której strefy
hemolizy są wyraźniejsze niż na podłożu Trypticase Soy Agar (TSA), dzięki dodatkowi 5%
krwi owczej. Obserwuje się na nim bardzo dobry wzrost i hemolizę typu beta paciorkowców
hemolizujących i innych drobnoustrojów.2-4 Nadaje się także do wykonywania badania CAMP
(tworzenie strefy pełnej, synergicznej hemolizy w miejscu przecięcia prostopadłych posiewów
Staphylococcus aureus i paciorkowców z grupy B) w ramach wstępnej identyfikacji
Streptococcus agalactiae, a także do stosowania z krążkami nasączonymi bacytracyną w
niskim stężeniu (0,04 jednostki) (krążki BD Taxo A) w ramach wstępnej identyfikacji
paciorkowców z grupy A (S. pyogenes).2,3,5,6
Podłoże BD Trypticase Soy Agar II with 5% Sheep Blood nie jest odpowiednie do pierwszej
izolacji bakterii beztlenowych o wysokich wymaganiach odżywczych.
Kombinacja kazeiny i peptonów sojowych w bazie Trypticase Soy Agar (TSA II) poprawia
walory odżywcze podłoża, dostarczając azotu organicznego, zwłaszcza w postaci
aminokwasów i peptydów o długich łańcuchach. Chlorek sodu utrzymuje równowagę
osmotyczną. Specjalne czynniki wzrostu poprawiają reakcje hemolityczne. Krew owcza
pozbawiona włóknika jest najczęściej stosowanym rodzajem krwi do wzbogacania podłoży
agarowych.1
ODCZYNNIKI
BD Trypticase Soy Agar II with 5% Sheep Blood
Skład* w przeliczeniu na jeden litr wody oczyszczonej
Trzustkowy hydrolizat kazeiny
14,5 g
Hydrolizat papainowy mączki
5,0
sojowej
Chlorek sodu
5,0
Czynniki wzrostu
1,5
Agar
14,0
Krew owcza pozbawiona
5%
włóknika
pH 7,3 ± 0,2
*Skorygowany i (lub) uzupełniony zgodnie z wymaganiami mającymi na celu spełnienie
kryteriów wydajności.
ŚRODKI OSTROŻNOŚCI
. Wyłącznie do zastosowań profesjonalnych.
Nie należy używać płytek, jeżeli są na nich widoczne oznaki skażenia mikrobiologicznego,
odbarwienia, wyschnięcia, pęknięcia lub inne zjawiska wskazujące na pogorszenie jakości.
PA-254053.07
-1-
Procedury aseptycznej techniki pracy z produktem, zagrożenia biologiczne oraz usuwanie
zużytego produktu opisano w dokumencie OGÓLNE INSTRUKCJE DOTYCZĄCE
STOSOWANIA.
PRZECHOWYWANIE I DOPUSZCZALNY OKRES PRZECHOWYWANIA
Po otrzymaniu, płytki należy przechowywać w ciemnym miejscu w temperaturze od 2 do 8° C, w
ich oryginalnym opakowaniu izolującym do chwili użycia. Unikać zamrażania i przegrzewania.
Posiewu na płytki można dokonywać aż do daty ważności (patrz etykieta na opakowaniu) i
inkubować w zalecanych czasach inkubacji.
Płytek z otwartych stosów zawierających po 10 płytek można używać przez okres jednego
tygodnia, przechowując w czystym miejscu w temperaturze od 2 do 8° C.
KONTROLA JAKOŚCI PRZEZ UŻYTKOWNIKA
Na płytki posiewa się próbki reprezentatywne niżej wymienionych szczepów (szczegółowe
informacje – zobacz dokument OGÓLNE INSTRUKCJE DOTYCZĄCE STOSOWANIA). Płytki
z posianymi szczepami inkubuje się w temperaturze 35 ± 2°C w atmosferze tlenu
wzbogaconego dwutlenkiem węgla. Płytki należy badać po 18 do 24 godz., oceniając stopień
wzrostu, wielkość kolonii i reakcje hemolizy.
Szczepy bakteryjne
Wzrost
Escherichia coli ATCC 25922
Wzrost dobry lub bardzo dobry, możliwa hemoliza
typu beta
Enterococcus faecalis ATCC 29212
Wzrost dobry lub bardzo dobry
Shigella flexneri ATCC 12022
Wzrost dobry lub bardzo dobry
Staphylococcus aureus ATCC 25923
Wzrost dobry lub bardzo dobry, hemoliza typu beta
Streptococcus agalactiae ATCC 12386
Wzrost dobry lub bardzo dobry, (słaba) hemoliza
typu beta
Streptococcus pneumoniae ATCC 6305
Wzrost dobry lub bardzo dobry, kolonie
zielonoszare; hemoliza typu alfa
Streptococcus pyogenes ATCC 19615
Wzrost dobry lub bardzo dobry, hemoliza typu beta
Bez posiewu
Czerwone (kolor krwi)
PROCEDURA
Dostarczane materiały
BD Trypticase Soy Agar II with 5% Sheep Blood (płytki Stacker o śr. 90 mm). Sprawdzane
pod kątem obecności mikroorganizmów.
Materiały niedostarczane
Pomocnicze pożywki hodowlane, odczynniki i wyposażenie laboratoryjne zgodnie z
wymaganiami.
Typy próbek
Jest to uniwersalne podłoże izolacyjne dla bakterii tlenowych, które można używać do
wszystkich rodzajów próbek klinicznych (patrz także CHARAKTERYSTYKA
WYDAJNOŚCIOWA I OGRANICZENIA PROCEDURY).
Procedura testowa
Wykonać posiew próbki możliwie jak najszybciej po dostarczeniu materiału do laboratorium.
Płytka do posiewu służy przede wszystkim do izolowania czystych kultur z próbek
zawierających florę mieszaną.
Ewentualnie, jeżeli materiał jest hodowany bezpośrednio z wymazówki, można przetoczyć
wymazówkę po niewielkiej powierzchni na krawędzi płytki, a następnie wykonać posiew poprzez
rozprowadzenie materiału po podłożu. W celu skuteczniejszego wykrycia wszystkich patogenów
występujących w próbce należy wykonać posiew także na odpowiednie podłoża selektywne.1,4
Płytki należy inkubować w atmosferze tlenowej zawierającej około 3–10% CO2, gdyż wiele
patogenów przy pierwszej izolacji wymaga dwutlenku węgla. Płytki inkubuje się w temperaturze
35–37°C przez 18–24 godz., a w razie potrzeby dłużej.
PA-254053.07
-2-
Test CAMP: Wyizolowane szczepy, które odpowiadają Streptococcus agalactiae, można
zbadać za pomocą testu CAMP w ramach wstępnej identyfikacji. Materiał do zaszczepienia
można pobrać z płytki z agarem z krwią. Należy wykonać pojedynczy posiew pasmowy
szczepu Staphylococcus aureus ATCC 33862 przez środek płytki. W przypadku stosowania
ezy nie należy jej trzymać równolegle do powierzchni agaru, gdyż wówczas pasmo posiewu
będzie zbyt szerokie, przez co wynik nie będzie zadowalający. Testowe szczepy paciorkowców
zaszczepia się, wykonując pojedynczy posiew pasmowy prostopadle do linii S. aureus,
możliwie jak najbliżej do tej linii (2–3 mm), lecz jej nie dotykając. Na jednej płytce można
testować kilka wyizolowanych szczepów. Prostopadłe pasma posiewu paciorkowców powinny
znajdować się w odległości 5–8 mm od siebie. Zaleca się, aby wraz ze szczepami
pochodzącymi od pacjenta wykonać także posiew szczepu S. agalactiae ATCC 12386 w celu
sprawdzenia, czy wynik testu będzie miarodajny, a także szczepu S. pyogenes ATCC 19615
jako kontroli negatywnej. Procedurę tę należy przećwiczyć na znanych hodowlach przed jej
zastosowaniem do identyfikacji nieznanych szczepów.
Uwaga: Badania testu CAMP wykazały, że najbardziej miarodajną reakcję uzyskuje się na
gotowych podłożach o odległym terminie przydatności do użycia.
W teście CAMP płytki inkubuje się w atmosferze tlenowej, w temperaturze 35 ± 2°C, przez 18–
24 godz. Nie należy prowadzić inkubacji w warunkach beztlenowych ani w inkubatorze
zawierającym CO2, gdyż może to prowadzić do uzyskania fałszywie dodatnich wyników dla
paciorkowców z grupy A.2,3,5,6
Wyniki
Po inkubacji na większości płytek pojawią się obszary zlewnego wzrostu. W miejscach posiewu
pasmowego drobnoustroje występują w zmniejszonej ilości, ponieważ procedura posiewu
pasmowego w rzeczywistości stanowi technikę „rozcieńczeniową”. Wskutek tego w kilku
miejscach powinny znajdować się wyizolowane kolonie drobnoustrojów zawartych w próbce.
Wzrost wszystkich drobnoustrojów można dalej oceniać półilościowo na podstawie wzrostu w
każdym posianym pasmowo obszarze. Dalsze różnicowanie wyizolowanych drobnoustrojów
wymaga wykonania testów biochemicznych i serologicznych. W celu uzyskania informacji
odnośnie wyglądu kolonii i dalszych testów różnicujących izolowane organizmy należy
zapoznać się z odpowiednim piśmiennictwem.2,3,7,8
Test CAMP: Na dodatnią reakcję CAMP wskazują obszary nasilonej hemolizy w kształcie
strzałek lub trójkątów, powstające wokół końców linii posiewu paciorkowców położonych blisko
strefy wzrostu S. aureus. Wzrost paciorkowców musi być obecny w szerokiej strefie częściowej
hemolizy, która otacza strefę wzrostu S. aureus. Izolowane szczepy powodujące opisaną
powyżej hemolizę w kształcie strzałek można wstępnie zidentyfikować jako Streptococcus
agalactiae, lecz przynależność do paciorkowców grupy B wg Lancefield należy potwierdzić
dodatkowymi testami immunologicznymi lub serologicznymi. Reakcja ujemna ma postać
nieznacznie nasilonej hemolizy w kształcie pocisku bądź braku nasilonej hemolizy.
CHARAKTERYSTYKA WYNIKÓW I OGRANICZENIA DOTYCZĄCE PROCEDURY
BD Trypticase Soy Agar II with 5% Sheep Blood jest standardowym podłożem do izolacji i
hodowli wielu drobnoustrojów tlenowych, takich jak Enterobacteriaceae, Pseudomonas i inne
niefermentujące pałeczki Gram-ujemne, paciorkowce, gronkowce, maczugowce, rodzaj
Candida i wiele innych.1,4
Podłoże nie zawiera czynnika V (NAD, dinukleotydu nikotynoamidoadeninowego), gdyż we krwi
owczej znajduje się NADaza, która rozkłada NAD. Z tego względu na podłożu tym nie
obserwuje się wzrostu Haemophilus influenzae, który wymaga zarówno czynnika X, jak i V.
Neisseria gonorrhoeae także nie rośnie dobrze na opisywanym podłożu. Do hodowli tych
gatunków zamiast opisywanego podłoża należy użyć BD Chocolate Agar (GC II Agar with
IsoVitaleX).
Opisywane podłoże nie nadaje się także do izolacji i hodowli Mycobacterium, Legionella,
Bordetella i innych organizmów o wysoce specyficznych wymaganiach odżywczych.
Liczba gatunków bakterii występujących jako czynniki zakaźne jest bardzo duża. Dlatego przed
rutynowym stosowaniem pożywki do hodowli rzadko izolowanych lub nowo opisanych
PA-254053.07
-3-
drobnoustrojów należy sprawdzić jej przydatność poprzez wyhodowanie czystych kultur danego
organizmu.
Wprawdzie pewne testy diagnostyczne można wykonywać bezpośrednio na opisywanym
podłożu, jednak w celu przeprowadzenia pełnej identyfikacji konieczne jest wykonanie badania
biochemicznego oraz, jeśli jest to wskazane, badania immunologicznego z użyciem czystych
hodowli. W celu uzyskania dalszych informacji należy zapoznać się z odpowiednim
piśmiennictwem.4-7
Szczegółowe informacje na temat stosowania na opisywanym podłożu krążków BD Taxo
przedstawiono w odpowiednich Instrukcjach użycia.
Podłoże BD Trypticase Soy Agar II with 5% Sheep Blood nie nadaje się do pierwszej izolacji
bakterii beztlenowych o wysokich wymaganiach odżywczych.
PIŚMIENNICTWO
1. Vera, H.D., and D.A. Power. 1980. Culture media, p. 969. In: E.H. Lennette, A. Balows, W.J.
Hausler, Jr., and J.P. Truant (ed.), Manual of clinical microbiology, 3rd ed. American Society for
Microbiology, Washington, D.C.
2. Facklam, R.R., and J.A. Washington II. 1991. Streptococci and related catalase-negative grampositive cocci, p. 238-257. In: A. Balows, W.J. Hausler, Jr., K.L. Herrmann, H.D. Isenberg, and H.J.
Shadomy (ed.), Manual of clinical microbiology, 5th ed. American Society for Microbiology,
Washington, D.C.
3. Ruoff, K.L., R.A. Whiley, and D. Beighton.2003. Streptococcus. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H.
Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8thed. American
Society for Microbiology, Washington, D.C.
4. Thomson, R.B., and J.M. Miller. 2003. Specimen collection, transport, and processing: bacteriology.
In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of
clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C.
5. Bernheimer, A.W., R. Linder, and L.S. Avigad. 1979. Nature and mechanism of action of the CAMP
protein of group B streptococci. Infect. Immun. 23:838-844.
6. Darling, C.L. 1975. Standardization and evaluation of CAMP reaction for prompt, presumptive
identification of Streptococcus agalactiae (Lancefield group B) in clinical material. J. Clin. Microbiol.
1:171-174.
7. Isenberg, H. D. (ed.). 1992. Interpretation of aerobic bacterial growth on primary culture media,
Clinical microbiology procedures handbook, vol.1, p. 1.6.1-1.6.7. American Society for Microbiology,
Washington, D.C.
8. Baron, E. J, L. R. Peterson, and S. M. Finegold. 1994. Bailey & Scott’s diagnostic microbiology, 9th
ed., p. 415. Mosby-Year Book, Inc. St. Louis, MO.
PAKOWANIE / DOSTĘPNOŚĆ
BD Trypticase Soy Agar II with 5% Sheep Blood
Nr katalogowy 254053
Gotowe podłoża na płytkach hodowlanych, 20
płytek
Nr katalogowy 254087
Gotowe podłoża na płytkach hodowlanych, 120
płytek
DODATKOWE INFORMACJE
W celu uzyskania dodatkowych informacji należy się skontaktować z lokalnym przedstawicielem
firmy BD.
Becton Dickinson GmbH
Tullastrasse 8 – 12
D-69126 Heidelberg/Germany
Phone: +49-62 21-30 50
Fax: +49-62 21-30 52 16
[email protected]
http://www.bd.com
http://www.bd.com/europe/regulatory/
ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection
BD, BD Logo and all other trademarks are the property of Becton, Dickinson and Company. © 2013 BD
PA-254053.07
-4-