Monoclonal Mouse Anti-Human CD34 Class II Klon QBEnd

Monoclonal Mouse
Anti-Human
CD34 Class II
Klon QBEnd 10
Nr kat. M7165
Przeznaczenie
Do badań diagnostycznych in vitro.
Przeciwciało Monoclonal Mouse Anti-Human CD34, Klon QBEnd-10, jest przeznaczone do badań
immunocytochemicznych. Przeciwciała przeciw CD34 mogą być wykorzystane dla oceny ilościowej oraz
oczyszczania limfohematopoetycznych komórek pnia/progenitorowych do celów transplantacji i badań (1-5).
CD34 jest uŜytecznym markerem słuŜącym do identyfikacji guzów pochodzenia naczyniowego i limfatycznego
oraz dla dokładniejszej klasyfikacji białaczek (5, 6, 8). Interpretacja kliniczna wystąpienia lub braku barwienia
musi być uzupełniona przez badania morfologiczne z wykorzystaniem odpowiednich prób kontrolnych i powinna
być przeprowadzana przez doświadczonego patologa z uwzględnieniem historii choroby pacjenta i innych
badań diagnostycznych.
Streszczenie
i informacje ogólne
CD34 jest jednołańcuchowym białkiem transbłonowym o masie w przybliŜeniu ok. 116 kDa. Ekspresję CD34
moŜna wykazać na niedojrzałych komórkach hematopoetycznych pnia/progenitorowych, komórkach śródbłonka
naczyniowego, embrionalnych fibroblastach i rzadko na komórkach glejowych w tkance nerwowej (1, 4).
NajwyŜszy poziom ekspresji jest na najwcześniejszych komórkach progenitorowych i następnie stopniowo
spada podczas dojrzewania (2, 3). CD34 jest antygenem róŜnicowania leukocytów swoistym dla etapu rozwoju
a nie dla linii rozwojowej. Najbardziej niedojrzałe moŜliwe do określenia prekursory limfocytów B
(CD19+/CD10+/TdT+) stanowią CD34+ (2-4). Niedojrzałe prekursory limfocytów T teŜ wykazują ekspresję TdT i
CD34 (4). Prawidłowe limfocyty krwi obwodowej, monocyty, granulocyty i płytki nie wykazują ekspresji CD34. W
przybliŜeniu 60% ostrych białaczek limfatycznych z limfocytów B i 40% ostrych białaczek szpikowych (AML), i
1% do 5% ostrych białaczek limfatycznych z limfocytów T wykazuje ekspresje CD34 (3). Przewlekłe białaczki
limfatyczne, chłoniaki i szpiczaki mnogie zostały określone jako jednakowo CD34 negatywne.
Monoklonalne przeciwciała przeciw CD34 moŜna ograniczyć do trzech głównych klas — klasy I, klasy II i klasy
III, róŜniących się wraŜliwością odpowiednich epitopów CD34 na degradację przez swoiste enzymy.
Przeciwciało QBEnd 10 naleŜy do klasy II przeciwciał monoklonalnych, które rozpoznają epitop CD34 oporny
na neuraminidazę i wraŜliwy na glikoproteazę oraz chymopapainę (1, 3, 7).
Odczynnik dostarczony
Mysie przeciwciało monoklonalne dostarczone w postaci płynnej jako supernatant hodowli komórkowej
dializowany wobec 0,05 mol/L Tris/HCl o pH 7,2 i zawierający 15 mmol/L NaN3.
Klon: QBEnd-10. Izotyp: IgG1, kappa.
StęŜenie mysiej IgG: Patrz informacja podana na etykiecie fiolki.
StęŜenie białek w róŜnych partiach moŜe się róŜnić bez wpływu na rozcieńczenie optymalne. W celu
zapewnienia jednolitości odczynów immunohistochemicznych wykonywanych przy uŜyciu róŜnych partii
produktu, miano kaŜdej partii jest porównywane i dostosowywane do partii referencyjnej.
Immunogen
Błony komórkowe śródbłonka naczyniowego otrzymane jako pęcherzyki z łoŜyska ludzkiego (6, 8).
Swoistość
Przeciwciało anty-CD34, QBEnd 10, zostało włączone do czwartej i piątej edycji Międzynarodowych
Warsztatów i Konferencji dotyczących Ludzkich Antygenów RóŜnicowania Leukocytów (Third and Fifth
International Workshops and Conferences on Human Leucocyte Differentiation Antigens) w Wiedniu w 1989,
Bostonie w 1993. Badania przeprowadzone przez liczne laboratoria potwierdziły reaktywność tego przeciwciała
z antygenem CD34 (2, 7) i epitopem klasy II (7).
W utrwalonych formaliną i zatopionych w parafinie skrawkach migdałka, przeciwciała znakują komórki
śródbłonka.
W cytometrii przepływowej przeciwciała znakują komórki KG-1a (prymitywne komórki linii rozwojowej białaczki
szpikowej, o których wiadomo, Ŝe są CD34+).
Środki ostroŜności
1. Do stosowania przez wyszkolony personel.
2. Produkt zawiera azydek sodu (NaN3), substancję chemiczną silnie toksyczną w czystej postaci. Azydek
sodu, zastosowany w produkcie w stęŜeniu, które nie jest sklasyfikowane jako niebezpieczne, moŜe reagować
z elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, powodując nagromadzenie silnie wybuchowych
azydków metali. Po usunięciu spłukać duŜą ilością wody, aby zapobiec nagromadzeniu się azydku metalu w
kanalizacji.
3. Podobnie jak w przypadku wszelkich materiałów pochodzących ze źródeł biologicznych naleŜy stosować
właściwe procedury postępowania.
4. NaleŜy stosować właściwe wyposaŜenie ochronne, zabezpieczające przed kontaktem odczynnika ze skórą
bądź oczami.
5. Niewykorzystany odczynnik naleŜy usuwać zgodnie ze stosownymi przepisami lokalnymi i krajowymi
Przechowywanie
(108558-003)
Przechowywać w temp. 2-8°C. Nie uŜywać po dacie waŜności podanej na etykiecie fiolki. Jeśli odczynniki są
przechowywane w warunkach innych niŜ podane powyŜej, uŜytkownik musi zweryfikować takie warunki. Nie ma
oczywistych oznak wskazujących na utratę stabilności produktu. Dlatego jednocześnie z badaniem próbek
pacjenta naleŜy wykonywać kontrole dodatnie i ujemne. Jeśli wystąpi nieoczekiwany wzór barwienia, którego
M7165/PL/ROP/2008.10.03 s 1/3
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
nie moŜna wyjaśnić róŜnicami w procedurach laboratoryjnych i istnieje podejrzenie, Ŝe przyczyną moŜe być
problem z przeciwciałem, naleŜy niezwłocznie skontaktować się z Działem Pomocy Technicznej naszej firmy.
Przygotowanie próbek
Skrawki parafinowe: Przeciwciało moŜna stosować do znakowania skrawków tkanek utrwalonych w formalinie,
zatopionych w parafinie. Wymagane jest wstępne przygotowanie tkanek za pomocą proteinazy K, trypsyny lub
wzbudzanego temperaturą odzyskiwania epitopu. Optymalne wyniki wzbudzanego temperaturą odzyskiwania
epitopu uzyskuje się stosując Dako Target Retrieval Solution, o wysokim pH, nr kat. S3308, lub 10 mmol/L
buforu Tris, 1 mmol/L EDTA, o pH 9,0. Gorsze wyniki daje stosowanie Dako Target Retrieval Solution, nr kat.
S 1700, lub 10 mmol/L buforu cytrynianowego o pH 6,0. Nie wolno dopuścić do wyschnięcia skrawków tkanki
podczas przygotowania lub następującej po nim procedury barwienia immunocytochemicznego.
Skrawki zamroŜone i przygotowanie komórek: Przeciwciało moŜna stosować do znakowania zamroŜonych
skrawków utrwalonych w acetonie i do rozmazów komórkowych.
Procedura barwienia
Rozcieńczanie: Przeciwciało Monoclonal Mouse Anti-Human CD34 klasy II, nr kat. M7165, moŜna stosować w
rozcieńczeniu w stosunku 1:25-1:50 podczas stosowania na skrawkach ludzkich migdałków utrwalonych w
formalinie i zatopionych w parafinie, stosując wzbudzane temperaturą odzyskiwanie epitopu w roztworze buforu
Tris 10 mmol/L oraz 1 mmol/L EDTA o pH 9,0 przez 20 minut oraz inkubację w temperaturze pokojowej z
pierwszym przeciwciałem przez 30 minut. Optymalne warunki mogą się zmieniać w zaleŜności od próbki i
metody przygotowania i powinny być określone przez kaŜde z poszczególnych laboratoriów. Zalecaną kontrolą
ujemną jest produkt Dako Mouse IgG1, nr kat. X0931, rozcieńczony do takiego samego stęŜenia mysiej IgG jak
pierwsze przeciwciało. Jeśli stabilność rozcieńczonego przeciwciała i kontroli ujemnej nie została ustalona
podczas rzeczywistej procedury barwienia, zaleca się, aby rozcieńczać te odczynniki bezpośrednio przed uŜyciem
lub rozcieńczyć w rozcieńczalniku Dako Antibody Diluent, nr kat. S0809. Kontrolę dodatnią i ujemną naleŜy
wykonać jednocześnie z testem próbki pacjenta.
Uwidocznienie: Zaleca się stosowanie zestawu Dako LSAB™+/HRP, nr kat. K0679 oraz zestawów Dako
EnVision™+/HRP, nr kat. K4004 oraz K4006. Zestaw Dako APAAP, nr kat. K0670, stanowi dobrą alternatywę
dla zamroŜonych skrawków i przygotowywania komórek, jeśli pod uwagę brane jest barwienie peroksydazy
endogennej. NaleŜy postępować zgodnie z procedurą załączoną do wybranego zestawu uwidaczniania.
Automatyzacja: Przeciwciało jest odpowiednie do barwienia immunocytochemicznego przy wykorzystaniu
platform automatycznych takich, jak Dako Autostainer.
Charakterystyka działania
Komórki znakowane przeciwciałem wykazują barwienie ograniczone do powierzchni błony komórkowej.
Tkanki zdrowe: Przeciwciało znakuje naczynia włosowate większości tkanek oraz tętnicę i w mniejszym
zakresie Ŝyły pępkowe. Przeciwciało nie znakuje śródbłonka większości duŜych naczyń i śródbłonka zatok
łoŜyskowych (8).
Tkanka patologiczna: Łącznie wybarwiono przy pomocy przeciwciała anty-CD34, klon QBEnd-10 (6) 112 guzów
pochodzenia naczyniowego, 54 raki róŜnego rodzaju oraz 45 guzów wrzecionowato-komórkowych nie
wywodzących się z naczyń. Wszystkie (22/22) łagodne guzy pochodzenia naczyniowego wykazywały
immunoreaktywność podczas gdy tylko 5 z 8 naczyniaków chłonnych wykazywało słabą ogniskową reakcję z
QBEnd-10 (6). Komórki guza w mięsaku naczyniowym tworzące obszary naczynio-tworzące i obszary lite
wykazywały immunopozytywną reakcję z QBEnd-10 odpowiednio w 17 z 23 i 13 z 24 przypadków (6).
Proliferujące naczynia i większość wrzecionowatych komórek w mięsaku Kaposiego było dodatnich we
wszystkich 40 przypadkach. Tylko jeden z 54 przypadków raka wykazywał reakcje świetlną z QBEnd-10.
Jednak 17 z 45 guzów wrzecionowato-komórkowych przedstawia pozytywną reakcję (6).
Ograniczenia właściwe
dla produktu
ZauwaŜono, Ŝe wiązanie monoklonalnych przeciwciał przeciw CD34 moŜe zostać zmniejszone przez środki
utrwalające obecne w odczynnikach powodujących rozpad erytrocytów, co sugeruje, Ŝe mają one negatywny
wpływ na epitop CD34. Dlatego teŜ naleŜy ostroŜnie korzystać z środków utrwalających, jeśli przeciwciało
monoklonalne ma zostać uŜyte do celów wyliczeniowych (9).
Piśmiennictwo
1.
Nishio H, Tada J, Hashiyama M, Hirn J, Ingles-Esteve J, Suda T. MC7. CD34 workshop panel report. In:
Kishimoto T, Kikutani H, von dem Borne AEG, Goyert SM, Mason DY, Miyasaka M, et al., editors.
Leucocyte typing VI. White cell differentiation antigens. Proceedings of the 6th International Workshop
and Conference; 1996 Nov 10-14; Kobe, Japan. New York, London: Garland Publishing Inc.; 1997. p.
974-76.
2.
Civin CI, Trischmann TM, Fackler MJ, Bernstein ID, Bühring HJ, Campos L, et al. M7.1. Report on the
CD34 cluster workshop. In: Knapp W, Dörken B, Gilks WR, Rieber EP, Schmidt RE, Stein H, et al.,
editors. Leukocyte typing IV. White cell differentiation antigens. Proceedings of the 4th International
Workshop and Conference; 1989 Feb 21-25; Vienna, Austria. Oxford, New York, Tokyo: Oxford
University Press; 1989. p. 818-25.
3.
Civin CI, Strauss LC, Fackler MJ, Trischmann TM, Wiley JM, Loken MR. Positive stem cell selection basic science. Prog Clin Biol Res 1990;333:387-402.
4.
Krause DS, Fackler MJ, Civin CI, May WS. CD34: structure, biology, and clinical utility (review). Blood
1996;87:1-13.
5.
Campos L, Guyotat D, Archimbaud E, Devaux Y, Treille D, Larese A, et al. Surface marker expression in
adult acute myeloid leukaemia: correlations with initial characteristics, morphology and response to
therapy. Br J Haematol 1989;72:161-6.
6.
Ramani P,Bradley NJ, Fletcher CDM. QBEND/10, a new monoclonal antibody to endothelium: assesment
of its diagnostic utility in paraffin sections. Histopathology 1990;17:237-242.
7.
Dercksen MW, Daams GM, de Haas M, von dem Borne AEG, van der Schoot CE. M10.2
Characterization of the CD34 cluster. In: Schlossman SF, Boumsell L, Gilks W, Harlan JM, Kishimoto T,
Morimoto C, et al., editors. Leucocyte typing V. White cell differentiation antigens. Proceedings of the 5th
International Workshop and Conference; 1993 Nov 3-7; Boston, USA. Oxford, New York, Tokyo: Oxford
University Press; 1995. p. 850-3.
(108558-003)
M7165/PL/ROP/2008.10.03 s 2/3
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
8.
Fina L, Molgaard HV, Robertson D, Bradley NJ, Monaghan P, Delia D, et al. Expression of the CD34
gene in vascular endothelial cells. Blood 1990;75(12):2417-2426.
9.
Serke S, van Lessen A, Huhn D. Quantitative fluorescence flow cytometry: a comparison of the three
techniques for direct and indirect immunofluorescence. Cytometry 1998;33:179-87.
Objaśnienia symboli
(108558-003)
Numer katalogowy
Temperatura przechowywania
Wyrób medyczny do
diagnostyki in vitro
Numer serii
Sprawdzić w instrukcji
stosowania
ZuŜyć przed
Producent
M7165/PL/ROP/2008.10.03 s 3/3
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17