0843 FLEX Polyclonal Rabbit Anti-Human Prostate-Specific

0843
FLEX
Polyclonal Rabbit
Anti-Human
Prostate-Specific Antigen
Ready-to-Use
(Link)
Nr kat. IR514
Przeznaczenie
Do stosowania w diagnostyce in vitro.
Przeciwciała FLEX Polyclonal Rabbit Anti-Human Prostate-Specific Antigen Ready-to-Use, (Link), są przeznaczone
do stosowania w immunohistochemii w aparatach Autostainer Link. Przeciwciała te są przydatne w identyfikacji
ludzkiego antygenu swoistego dla stercza (PSA) do stosowania w badaniach immunohistochemicznych (1, 2).
Interpretacja kliniczna dodatniego lub ujemnego odczynu musi być uzupełniona przez ocenę morfologiczną,
wykonanie odpowiednich prób kontrolnych i interpretowana przez doświadczonego patologa w kontekście historii
choroby pacjenta i innych badań diagnostycznych.
Synonimy antygenu
Ludzka kalikreina 3 (hK3) (3).
Streszczenie
i informacje ogólne
PSA jest białkiem o masie 33 kDa, naleŜącym do proteaz z rodziny kalikrein (4). Wytwarzana jest głównie przez
nabłonek gruczołu krokowego i wyściółkę nabłonkową gruczołów okołocewkowych (3) i wydzielany jest w stęŜeniu
0,5-2 g/L do płynu nasiennego, gdzie upłynnia Ŝel powstający po wytrysku przez trawienie głównych białek
tworzących Ŝel. Przy zastosowaniu ogniskowania izoelektrycznego i chromatografii jonowymiennej moŜliwe
jest wyizolowanie z płynu nasiennego od pięciu do sześciu izoform PSA (4). Z normalnego i rozrostowego stercza
PSA wydostaje się do płynu pozakomórkowego i przez dyfuzję dociera do krwi, gdzie jego stęŜenie jest około
miliona razy niŜsze niŜ w płynie nasiennym. W raku stercza dochodzi do zaburzenia układu i polaryzacji komórek
nabłonkowych, co prowadzi do aktywnego wydzielania PSA do przestrzeni zewnątrzkomórkowej i do krąŜenia,
znacznie zwiększając stęŜenie PSA w osoczu (4).
PSA ulega silnej ekspresji w prawidłowej i nowotworowej tkance stercza. Choć PSA moŜna uznać za swoisty
dla stercza, PSA i/lub ekspresję genów PSA wykryto na niskich poziomach w niektórych tkankach pozasterczowych,
takich jak prawidłowa tkanka sutka (3, 4), raki sutka, mleko, osocze kobiet, śluzówka macicy, nowotwory nadnerczy
i raki nerek (3).
Zobacz dokument Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych firmy Dako lub następujące
części instrukcji do systemu detekcji IHC: 1) Zasada przeprowadzenia odczynu, 2) Niezbędne materiały
niedostarczone z zestawem, 3) Przechowywanie, 4) Przygotowanie preparatu, 5) Wykonanie barwienia, 6) Kontrola
jakości, 7) Rozwiązywanie problemów, 8) Interpretacja wyniku barwienia, 9) Ograniczenia metody.
Dostarczany
odczynnik
Gotowe do uŜycia królicze przeciwciała poliklonalne są dostarczane w postaci ciekłej w buforze zawierającym białko
stabilizujące i roztwór NaN3 o stęŜeniu 0,015 mol/L.
Immunogen
PSA wyizolowany z ludzkiego płynu nasiennego.
Swoistość
Przeciwciało reaguje z ludzkim antygenem swoistym dla stercza. Ślady zanieczyszczeń przeciwciałami usunięto przez
absorpcję w fazie stałej z innymi białkami ludzkiego osocza.
Swoistość tych przeciwciał określono następująco:
Immunoelektroforeza krzyŜowa: Przy uŜyciu 12,5 µL roztworu stęŜonego przeciwciała na cm2 Ŝelu i 2 µL ludzkiego
płynu nasiennego pojawia się wyłącznie osad PSA. W przypadku uŜycia 12,5 µL roztworu stęŜonego przeciwciała na
cm2 i 2 µL ludzkiego osocza nie pojawia się osad. Barwnik: Coomassie Brilliant Blue.
Środki ostroŜności
1. Odczynniki przeznaczone dla przeszkolonych UŜytkowników.
2. Opisywany produkt zawiera silnie toksyczny związek — azydek sodu (NaN3), w czystej postaci. StęŜenie NaN3
występujące w produkcie nie jest klasyfikowane jako niebezpieczne. Jednak w wyniku reakcji NaN3 z ołowiem lub
miedzią, wchodzącymi w skład instalacji kanalizacyjnych, mogą powstawać silnie wybuchowe azydki metali.
Przy usuwaniu resztek odczynnika uŜywać duŜych ilości wody do przepłukiwania, aby uniknąć gromadzenia się
azydków w instalacji kanalizacyjnej.
3. Podobnie jak w przypadku kaŜdego produktu otrzymywanego z materiału biologicznego, naleŜy stosować
odpowiednie procedury postępowania.
4. NaleŜy stosować właściwe wyposaŜenie ochronne, zabezpieczające przed kontaktem odczynnika ze skórą bądź
oczami.
5. Niewykorzystany odczynnik naleŜy usuwać zgodnie ze stosownymi przepisami lokalnymi i krajowymi.
Przechowywanie
(115791-003)
Dako Denmark A/S
Przechowywać w temperaturze 2–8 °C. Nie stosowa ć po upływie terminu waŜności podanego na opakowaniu.
JeŜeli odczynniki są przechowywane w warunkach innych niŜ podane na ulotce dołączanej do opakowania,
uŜytkownik powinien je zweryfikować. Nie ma jednoznacznych oznak świadczących o niestabilności produktu.
Z tego względu jednocześnie z badaniem próbek pochodzących od pacjentów, naleŜy wykonywać dodatnie i ujemne
próby kontrolne. W wypadku nieoczekiwanego wyniku odczynu, którego nie moŜna wyjaśnić róŜnicami
w procedurach laboratoryjnych, gdy podejrzewa się problem z przeciwciałem, naleŜy się skontaktować z działem
wsparcia technicznego firmy Dako.
IR514/PL/MNI/2009.12.04 s. 1/2
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Przygotowanie
próbek
oraz materiały
wymagane, ale
niedostarczane
Przeciwciała mogą być wykorzystane do znakowania utrwalonych formaliną skrawków zatapianych w parafinie.
Preparaty tkankowe naleŜy pociąć na skrawki o wymiarach około 4 µm.
Wymagane jest poddanie cieplnemu odmaskowaniu antygenu (HIER) z uŜyciem Dako PT Link (nr kat.
PT100/PT101). Szczegółowe instrukcje zawiera Instrukcja uŜytkownika aparatu PT Link. Optymalne wyniki uzyskuje
się w wyniku wstępnej obróbki tkanek przy uŜyciu roztworu EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH
(50x) (nr kat. K8000/K8004).
Skrawki zatapiane w parafinie: Do obróbki wstępnej utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków
tkankowych, zalecana jest procedura 3 w 1 z uŜyciem odczynnika Dako PT Link. Postępować według procedury
wstępnej obróbki tkanek, zamieszczonej w ulotce roztworu EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x)
(nr kat. K8000/K8004). Uwaga: Po przeprowadzeniu barwienia skrawki muszą być odwodnione, oczyszczone
zakryte za pomocą środka do trwałego zatapiania.
Odparafinowane skrawki: Do obróbki wstępnej utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków
tkankowych, zalecane jest uŜycie odczynnika Dako PT Link i przeprowadzenie procedury opisane dla skrawków
parafinowych. Po zakończeniu barwienia szkiełka naleŜy zatopić w wodnym lub trwałym środku do zatapiania.
W trakcie przygotowywania oraz podczas procedury znakowania immunohistochemicznego skrawki nie powinny
wyschnąć. W celu uzyskania lepszego przylegania skrawków do szkiełek podstawowych, zaleca się stosowanie
szkiełek FLEX IHC Microscope Slides (nr kat. K8020).
Wykonanie odczynu
oraz materiały
wymagane, ale
niedostarczane
Zalecanym systemem wizualizacji jest EnVision FLEX, High pH (Link) (nr kat. K8000). W oprogramowaniu
Autostainer Link wstępnie zaprogramowano etapy odczynu i czasy inkubacji. Zalecana objętość uŜytego odczynika
to 1 x 200 µL lub 2 x 150 µL na preparat. Szczegółowe informacje dotyczące wkładania szkiełek mikroskopowych i
odczynników przedstawiono w Instrukcji uŜytkownika aparatu Autostainer Link. Jeśli protokoły nie są dostępne w
uŜywanym systemie Autostainer, naleŜy skontaktować się z działem wsparcia technicznego firmy Dako. Wszystkie
procedury inkubacji naleŜy równieŜ przeprowadzać w temperaturze pokojowej.
Optymalne warunki mogą się zmieniać w zaleŜności od rodzaju materiału i sposobu jego przygotowania i powinny
być określone indywidualnie w kaŜdym laboratorium. Zalecana objętość uŜytego odczynika to 1 x 200 µL lub 2 x 150
µL na preparat. Szczegółowe informacje dotyczące wkładania szkiełek mikroskopowych i odczynników
przedstawiono w Instrukcji uŜytkownika aparatu Autostainer Link. Jeśli protokoły nie są dostępne w uŜywanym
systemie Autostainer, naleŜy skontaktować się z działem wsparcia technicznego firmy Dako. Wszystkie procedury
inkubacji naleŜy równieŜ przeprowadzać w temperaturze pokojowej.
Zalecane jest barwienie kontrastowe hematoksyliną za pomocą EnVision( FLEX Hematoxylin (Link) (nr kat. K8008).
Zaleca się stosowanie bezwodnego, trwałego środka do zatapiania.
Równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów naleŜy wykonywać dodatnie i ujemne próby
kontrolne z uŜyciem identycznego protokołu. Dodatnia kontrola tkankowa powinna obejmować gruczoł krokowy,
natomiast we wszystkich dodatnich preparatach komórki/struktury powinny wskazywać odczyn reakcji taki jak
opisany dla tej tkanki w części „Charakterystyka wydajnościowa”. Zalecana kontrola ujemna to FLEX Negative
Control, Rabbit (Link) (nr kat. IR600).
Interpretacja odczynu
Przeciwciała dają odczyn cytoplazmatyczny.
Charakterystyka
wydajnościowa
Tkanki prawidłowe: Przeciwciało silnie znakuje nabłonek stercza. Nie zaobserwowano znakowania w 34 innych
tkankach ludzkich, takich jak mózg, skóra, mięśnie, nerwy, sutki, węzły chłonne, śledziona i grasica oraz róŜnych
częściach układów: oddechowego, trawiennego, moczowego i płciowego (5).
Tkanki nieprawidłowe: We wszystkich 60 badanych przypadkach raków gruczołu krokowego (ocena wg Gleasona
3–5) stwierdzono dodatni odczyn rozlany w barwieniu przeciwciałem. W 57/60 przypadków raka >95% komórek
wykazywało dodatni odczyn z PSA (6). Przeciwciało znakowało 3/15 (20%) przypadków raków przewodowych sutka,
a 2/7 (28%) przypadków raków gruczołu apokrynowego sutka wykazało nieregularne obszary komórek
immunoreaktywnych (5). Odczyn ujemny z przeciwciałem wykazało 310 innych rodzajów nowotworów, w tym
40 raków gruczołowych sutka, 40 raków gruczołowych płuc, 40 raków gruczołowych okręŜnicy, 40 raków z komórek
nerek, 40 raków nabłonka dróg moczowych, 30 zmian gruczołowych pęcherza moczowego, 40 rakowiaków
i 40 guzów ślinianek. Silny rozlany odczyn zaobserwowano wzdłuŜ kanalików nienowotworowych przewodów
ślinowych w 27/30 przypadkach (90%) guzów ślinianek. TakŜe 13/40 (32%) przypadków łagodnych pęcherzyków
nasiennych wykazało odczyn cytoplazmatyczny (6).
Piśmiennictwo
1. Gillespie JW, Best CJM, Bichsel VE, Cole KA, Greenhut SF, Hewitt SM, et al. Technical advance. Evaluation of
non-formalin tissue fixation for molecular profiling studies. Am J Pathol 2002;160:449-57.
2. Meng FJ, Shan A, Jin L, Young CYF. Short communication: The expression of a variant prostate-specific antigen
in human prostate. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev 2002;11:305-9.
3. Polascik TJ, Oesterling JE, Partin AW. Prostate specific antigen: a decade of discovery – what we have learned
and where we are going [Review]. J Urol 1999;162:293-306.
4. Stenman U-H, Leinonen J, Zhang W-M, Finne P. Prostate-specific antigen. Cancer Biol 1999;9:83-93.
5. Alanen KA, Kuopio T, Koskinen PJ, Nevalainen TJ. Immunohistochemical labelling for prostate specific antigen in
non-prostatic tissues. Path Res Pract 1996;192:233-7.
6. Varma M, Morgan M, Jasani B, Tamboli P, Amin MB. Polyclonal anti-psa is more sensitive but less specific than
monoclonal anti-psa. Implications for diagnostic prostaic pathology. Am J Clin Pathol 2002;118:202-7.
Objaśnienie symboli
Numer katalogowy
Temperatura przechowywania
ZuŜyć przed
Wyrób medyczny do
diagnostyki in vitro
Zawartość wystarcza na <n>
testów
Producent
Sprawdzić w instrukcji
stosowania
Numer serii
(115791-003)
Dako Denmark A/S
IR514/PL/MNI/2009.12.04 s. 2/2
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17