Monoclonal Mouse Anti-Human CD45R0 Clone UCHL1 Nr

Monoclonal Mouse
Anti-Human CD45R0
Clone UCHL1
Nr kat. M0742
Przeznaczenie
Do stosowania w diagnostyce in vitro.
Przeciwciała Monoclonal Mouse Anti-Human CD45R0, Clone UCHL1, są przeznaczone do stosowania w immunohistochemii.
Przeciwciała te znakują białko CD45R0 zarówno w komórkach prawidłowych, jak i nowotworowych (1, 2). Znakowanie białka CD45R0
jest uŜytecznym narzędziem w klasyfikacji chłoniaków. Wyniki panelu przeciwciał są pomocne w klasyfikacji róŜnicowej. Interpretacja
kliniczna wystąpienia barwienia lub jego braku musi być uzupełniona o badania morfologiczne z wykorzystaniem odpowiednich prób
kontrolnych i powinna być przeprowadzana przez doświadczonego patologa z uwzględnieniem historii choroby pacjenta i innych badań
diagnostycznych. Przeciwciała te są przeznaczone do stosowania po pierwotnym rozpoznaniu guza w konwencjonalnym badaniu
histopatologicznym z zastosowaniem barwników do nieimmunologicznych barwień histochemicznych.
Podsumowanie i wyjaśnienia
CD45 jest glikoproteiną transbłonową podlegającą ekspresji w większości komórek jądrzastych pochodzenia niekrwiotwórczego. CD45,
kodowany przez pojedynczy gen zmapowany do chromosomu 1, przyjmuje róŜne izoformy, które rozróŜniono, opierając się na
zróŜnicowanym splicingu egzonów 4, 5 i 6. W przypadku leukocytów ludzkich zidentyfikowano pięć róŜnych izoform CD45, nazwanych
odpowiednio ABC, AB, BC, B i 0. Izoformy te są rozpoznawane przez przeciwciała CD45RA, CD45RB, CD45RC i CD45R0. Zakres Mr
izoform CD45R0 wynosi 180 000, a gen odpowiadający białku CD45R0 nie zawiera Ŝadnych (czyli 0) egzonów 4, 5 i 6 ulegających
zróŜnicowanemu splicingowi. Wszystkie izoformy CD45 mają ten sam segment wewnątrzkomórkowy, w którym stwierdzono aktywność
fosfatazy tyrozynowej. RóŜne leukocyty wykazują ekspresję charakterystycznych dla nich izoform CD45, a zatem komórki T wykazują
ekspresję izoform CD45 właściwych dla ich stadium rozwoju i aktywacji. Komórki B wykazują głównie ekspresję izoformy ABC, natomiast
monocyty i komórki dendrytyczne wykazują głównie ekspresję izoform B i 0. W granulocytach występuje zasadniczo ekspresja wyłącznie
izoform B i 0 (3).
Odczynnik dostarczony
Mysie przeciwciała monoklonalne dostarczane w postaci nadsączu hodowli komórkowej w buforze Tris/HCl o stęŜeniu 0,05 mol/L,
pH 7,2, z dodatkiem 15 mmol/L NaN 3.
Klon: Clone UCHL1 (4). Izotyp: IgG2a, kappa.
StęŜenie mysich IgG: patrz etykieta na fiolce.
Immunogen
IL-2-zaleŜna linia komórek T, CA1 (4).
Swoistość
Przeciwciała zdefiniowano jako przeciwciała przeciwko CD45RB podczas konferencji Fourth (5) / Fifth (6) International Workshop and
Conference on Human Leucocyte Differentiation Antigens (4./5. międzynarodowe warsztaty i konferencja na temat antygenów
róŜnicujących ludzkie leukocyty).
W badaniach metodą Western blot komórek jednojądrzastych we krwi obwodowej wykryto swoistą reakcję przeciwciał z prąŜkiem
180 kDa odpowiadającym białku CD45R0. W przypadku linii komórkowych transfekowanych wspólnym antygenem leukocytarnym (LCA),
wykazujących ekspresję izoform CD45 ABC, AB, BC, B lub 0, przeciwciała reagowały wyłącznie z transfektantami wykazującymi
ekspresję CD45R0 (7).
Środki ostroŜności
1. Do stosowania przez wyszkolony personel.
2. Opisywany produkt zawiera silnie toksyczny związek — azydek sodu (NaN 3), w czystej postaci. Azydek sodu, zastosowany w
produkcie w stęŜeniu, które nie jest sklasyfikowane jako niebezpieczne, moŜe reagować z elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i
miedzi, powodując nagromadzenie silnie wybuchowych azydków metali. Po usunięciu spłukać duŜą ilością wody, aby zapobiec
nagromadzeniu się azydków metali w kanalizacji.
3. Podobnie jak w przypadku wszelkich materiałów pochodzących ze źródeł biologicznych, naleŜy stosować właściwe procedury
postępowania.
4. W celu uniknięcia kontaktu z oczami i skórą naleŜy nosić odpowiednie osobiste wyposaŜenie ochronne.
5. Niewykorzystany roztwór usuwać zgodnie z rozporządzeniami lokalnymi, wojewódzkimi i krajowymi.
Przechowywanie
Przechowywać w temperaturze 2-8°C. Nie naleŜy uŜywać odczynników po upływie terminu waŜności podanego na fiolce. Jeśli odczynniki
są przechowywane w warunkach innych niŜ podane powyŜej, uŜytkownik powinien zweryfikować te warunki. Nie ma wyraźnych oznak
wskazujących na niestabilność produktu. Dlatego jednocześnie z badaniem próbek pochodzących od pacjenta naleŜy wykonywać
kontrole pozytywne i negatywne. W przypadku uzyskania nieoczekiwanego wyniku odczynu, którego nie moŜna wyjaśnić róŜnicami w
procedurach laboratoryjnych, i gdy podejrzewa się problem z przeciwciałem, naleŜy skontaktować się z działem wsparcia technicznego
firmy Dako.
Przygotowanie próbek
Skrawki parafinowe: Przeciwciała mogą być wykorzystane do znakowania skrawków utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie.
Roztwór Bouina i formalina kwaśna (pH <3,1) są nieodpowiednie (4). Zalecane jest poddanie preparatów tkankowych cieplnemu
odmaskowaniu antygenu. Optymalne wyniki uzyskuje się z zastosowaniem roztworów: Dako Target Retrieval Solution, nr kat. S1700,
bufor cytrynianowy 10 mmol/L, pH 6,0 lub bufor Tris 10 mmol/L, EDTA 1 mmol/L, pH 9,0. Wstępne traktowanie preparatów tkankowych
proteinazą K powodowało uszkodzenie antygenu. W trakcie przygotowywania oraz podczas procedury znakowania
immunohistochemicznego skrawki nie powinny wyschnąć.
Skrawki mroŜakowe i preparaty komórkowe: przeciwciała mogą być wykorzystane do znakowania skrawków mroŜakowych zatopionych
w acetonie (1, 7), rozmazów komórkowych (1) i preparatów przygotowanych z uŜyciem cytowirówek (7).
Procedura barwienia
Rozcieńczenie: przeciwciała Monoclonal Mouse Anti-Human CD45R0, nr kat. M0742, mogą być stosowane w rozcieńczeniach od 1:50
do 1:100 na utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawkach ludzkich migdałków z zastosowaniem trwającego 20 minut
cieplnego odmaskowania antygenu w roztworze Dako Target Retrieval Solution, nr kat. S1700, i inkubacji z przeciwciałem pierwotnym
przez 30 minut w temperaturze pokojowej. Optymalne warunki mogą się zmieniać w zaleŜności od rodzaju materiału i sposobu jego
przygotowania i powinny być określone indywidualnie w kaŜdym laboratorium. Zalecana kontrola ujemna to odczynnik Dako
MouseIgG2a, nr kat. X0943, rozcieńczony do tego samego stęŜenia mysich IgG, co przeciwciało pierwotne. Dopóki nie została ustalona
stabilność rozcieńczonych przeciwciał i kontroli ujemnej w procedurze barwienia, zaleca się rozcieńczenie tych odczynników
bezpośrednio przed uŜyciem lub rozcieńczenie w rozcieńczalniku Dako Antibody Diluent, nr kat. S0809. Równolegle z odczynami na
materiale pochodzącym od pacjentów naleŜy wykonywać dodatnie i ujemne próby kontrolne.
Wizualizacja: zaleca się stosowanie zestawu Dako EnVision™+/HRP, nr kat. K4004 i K4006. Postępować zgodnie z procedurą
dostarczoną z zestawem do wizualizacji.
Automatyzacja: przeciwciała nadają się do wykonywania odczynów immunohistochemicznych w systemach zautomatyzowanych, takich
jak Dako Autostainer.
(108419-003)
M0742/PL/SSM/2014.03 s. 1/2
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Dania | Tel. +45 44 85 95 00 | Faks +45 44 85 95 95 | Nr CVR 33 21 13 17
Charakterystyka pracy
Komórki znakowane przeciwciałami zasadniczo wykazują odczyn ograniczony do błony komórkowej.
Tkanki prawidłowe: przeciwciała znakują większość tymocytów, subpopulację komórek T w fazie spoczynku z podgrup CD4 i CD8, a
takŜe dojrzałe aktywowane komórki T. Dodatkowo znakowane są granulocyty i monocyty, natomiast brak reakcji zaobserwowano w
przypadku prawidłowych komórek B i NK (4). W badaniu obejmujących sporą ilość tkanek prawidłowych (1) przeciwciała znakowały
limfocyty w obszarach komórek T prawidłowych migdałków, śledziony, oraz reaktywnych węzłów chłonnych. W przypadku grasicy
przeciwciała znakowały 90% tymocytów korowych i około 50% tymocytów rdzeniowych. W odróŜnieniu od tego blasty duŜych tymocytów
korowych nie wykazywały odczynu dodatniego. Stale obserwowano odczyn błonowy w przypadku dojrzałych komórek szpikowych i około
20% makrofagów. Rozmyty i w rzadkich przypadkach silny odczyn cytoplazmatyczny obserwowano w nabłonku gruczołowym, płaskim,
przejściowym, hepatocytach, syncytiotrofoblastach i wszystkich mięśniach gładkich.
Tkanki nieprawidłowe: w przypadku guzów pochodzących z komórek T przeciwciała znakowały 100% przypadków ziarniniaka
grzybiastego (Mycosis fungoides) (n=10), 83% przypadków chłoniaków z obwodowych komórek T (n=25), 78% przypadków ostrej
białaczki limfoblastycznej (n=9) oraz 100% przypadków histiocytozy złośliwej jelit (n=13). Odczyn dodatni uzyskano równieŜ w 2/2
przypadki prawdziwego chłoniaka histiocytarnego. Nie obserwowano znakowania przeciwciałami w wielu przypadkach chłoniaków z
komórek B (n=62), ale niektóre chłoniaki z komórek B typu centroblastycznego i immunoblastycznego wykazały rozlany odczyn
cytoplazmatyczny. Komórki Reed-Sternberga chłoniaka Hodgkina (n=16) wykazały dodatni odczyn cytoplazmatyczny i ujemny odczyn
błonowy. W 4/4 przypadki mięsaka granulocytowego przeciwciała znakowały jedynie dojrzałe komórki szpikowe (1). Z kilkoma wyjątkami
przeciwciała znakowały 28 przypadków złośliwego chłoniaka z komórek T w skórze. Większość reaktywnych komórek T z 85 wycinków
biopsyjnych wykazała dodatnią reakcję z przeciwciałami. Komórki chłoniaka z komórek B w skórze wykazywały stale odczyn ujemny,
podobnie jak komórki w 125 przypadkach nielimfatycznych nowotworów skóry (8).
Piśmiennictwo
1.
Norton AJ, Ramsay AD, Smith SH, Beverley PCL, Isaacson PG. Monoclonal antibody (UCHL1) that recognises normal and
neoplastic T cells in routinely fixed tissues. J Clin Pathol 1986;39:399-405.
2.
Davey FR, Elghetany MT, Kurec AS. Immunophenotyping of hematologic neoplasms in paraffin-embedded tissue sections. Am J
Clin Pathol 1990;93. Suppl 1:S17-S26.
3.
Sewell WA, Cooley MA, Hegen M. NL6. CD45 workshop panel report. In: Kishimoto T, Kikutani H, von dem Borne AEG, Goyert SM,
Mason DY, Miyasaka M, et al., editors. Leucocyte typing VI. White cell differentiation antigens. Proceedings of the 6th International
Workshop and Conference; 1996 Nov 10-14; Kobe, Japan. New York, London: Garland Publishing Inc.; 1997. p. 499-502.
4.
Smith SH, Brown MH, Rowe D, Callard RE, Beverley PCL. Functional subsets of human helper-inducer cells defined by a new
monoclonal antibody, UCHL1. Immunology 1986;58:63-70.
5.
Schmidt RE. Non-lineage/natural killer section report: new and previously defined clusters. In: Knapp W, Dörken B, Gilks WR, Rieber
EP, Schmidt RE, Stein H, et al., editors. Leukocyte typing IV. White cell differentiation antigens. Proceedings of the 4th International
Workshop and Conference; 1989 Feb 21-25; Vienna, Austria. Oxford, New York, Tokyo: Oxford University Press; 1989. p. 517-42.
6.
Morimoto C. T18. CD45 cluster report. In: Schlossman SF, Boumsell L, Gilks W, Harlan JM, Kishimoto T, Morimoto C, et al., editors.
Leukocyte typing V. White cell differentiation antigens. Proceedings of the 5th International Workshop and Conference; 1993 Nov 37; Boston, USA. Oxford, New York, Tokyo: Oxford University Press; 1995. p. 386-9.
7.
Poppema S, Lai R, Visser L. Monoclonal Antibody OPD4 is reactive with CD45R0, but differs from UCHL1 by the absence of
monocyte reactivity. Am J Pathol 1991;139:725-9.
8.
Sterry W, Hauschild A. Use of monoclonal antibodies (UCHL1, Ki-B3) against T and B cell antigens in routine paraffin-embedded
skin biopsy specimens. J Am Acad Dermatol 1989;21:98-107.
Objaśnienia symboli
Numer katalogowy
Ograniczenie temperatury
Wyrób medyczny do diagnostyki
in vitro
Numer partii
Sprawdzić w instrukcji obsługi
ZuŜyć przed
(108419-003)
Producent
M0742/PL/SSM/2014.03 s. 2/2
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Dania | Tel. +45 44 85 95 00 | Faks +45 44 85 95 95 | Nr CVR 33 21 13 17