Corona CAD - Rafał Bachorz
Transkrypt
Corona CAD - Rafał Bachorz
laboratorium 7-8/2010 |sprzęt i a pa r at u r a l a b o r ato r yj n a s p r z ę t i a pa r at u r a l a b o r ato r yj n a – nowa jakość w detekcji HPLC Rys. 2. Chromatogram pokazujący rozdział oligosacharydów (200 ng na kolumnie w oknie głównym, 5 ng na kolumnie w oknie wewnętrznym) Streszczenie W niniejszym podejście do detekcji HPLC. Detektor wyładowań koronowych Corona CAD jest uniwersalnym detektorem, który umożliwia oznaczanie dowolnej, nielotnej, substancji. Jego odpowiedź nie zależy od budowy chemicznej oznaczanego związku chemicznego. Oprócz omówienia budowy i zasady działania detektora Corona CAD przedstawiony został przykładowy rozdział U V-VIS jest prawdopodobnie najczęściej stosowanym detektorem w HPLC, ale zawodzi, gdy badane związki nie posiadają grup chromoforowych. Detektor refraktometryczny jest uniwersalny, ale cechuje się niższą czułością i nie umożliwia pracy w gradiencie. Oprócz tych dwóch mamy co najmniej kilka innych możliwości, każda z nich ma jednak mniejsze lub większe ograniczenia. oligosacharydów z użyciem tego detektora. Słowa kluczowe detekcja HPLC, detektor wyładowań koronowych, rozdział oligosacharydów Summary In this article the novel approach to the HPLC detection has been presented. The charged aerosol detector is an universal detector, which Detektor Corona CAD Od pewnego czasu dostępny jest na rynku zupełnie nowy, uniwersalny detektor, który łączy w sobie czułość detektora UV-VIS z uniwersalnością refraktometru. Detektor wyładowań koronowych (lub naładowanego aerozolu) Corona CAD (ang. charged aerosol detector) pozwala na wykrywanie substancji, dla których prężność par jest niższa od 10-5 hPa, a jego odpowiedź nie zależy od ich budowy chemicznej. Zasada działania detektora pokazana jest na rys. 1. Detektor Corona CAD wymaga dostarczania gazu. Zalecane jest, aby był to azot lub czyste sprężone powietrze. Eluat opuszczający kolumnę wprowadzony jest do nebulizera, gdzie za pomocą strumienia gazu tworzy się aerozol. Aerozol kierowany jest przez tubę osuszającą, gdzie następuje odparowanie składników fazy ruchomej, do komory wyładowań koronowych. W tej komorze cząsteczki analitów „zderzają się” ze strumieniem dodatnio naładowanych jonów azotu utworzonych podczas wyładowań koronowych. Jony azotu łączą is capable of measuring any sufficiently non-volatile compound. The response of Corona CAD is independent of chemical properties of the analyte. Besides the main points associated with the working principle also the application of Corona CAD detector to the separation of oligosaccharides has been presented. Key words HPLC detection, charged aerosol detector, separation of oligosaccharides 7-8/2010 B, 40,01 min 30% B, 50,0 min 30% B. Do analizy wykorzystano standardy oligosacharydów, które przygotowano przez rozpuszczenie 1 mg substancji w 70% acetonitrylu. Na rys. 2 zaprezentowano przykładowy chromatogram przedstawiający rozdział mieszaniny standardowych oligosacharydów. W oknie głównym jest pokazany rozdział mieszaniny oligosacharydów w ilości 200 ng każdego z nich na kolumnie, małe okno przedstawia analogiczny chromatogram, z tym że ilość każdego składnika mieszaniny to 5 ng na kolumnie. Zaprezentowane chromatogramy stanowią doskonały przykład zastosowania detekcji wyładowań koronowych do związków chemicznych, które nie posiadają grup chromoforowych. Corona CAD artykule przedstawione jest nowatorskie |laboratorium się z cząsteczkami analitu, a liczba przyłączonych ładunków jest proporcjonalna do wielkości cząstki. Elektrostatycznie naładowane cząsteczki analitu są następnie kierowane przez pułapkę jonową do kolektora. Pułapka jonowa ma na celu wychwycenie jonów azotu, do których nie przyłączyły się cząsteczki analitu. W kolektorze następuje oddanie ładunków połączonych z cząsteczkami analitów. Oddany ładunek elektryczny mierzony jest za pomocą czułego elektrometru, a jego wartość jest proporcjonalna do ilości analitu w badanej próbce. Detektor Corona CAD umożliwia oznaczanie związków w warunkach nebulizacji: temperatury pokojowej i ciśnienia atmosferycznego. Faza ruchoma powinna składać się z lotnych substancji, które można łatwo odparować. Stosowane są te same fazy ruchome jak w spektrometrii mas. Detektor wyładowań koronowych pozwala na pracę w gradiencie, co jest problemem np. w detekcji refraktometrycznej. Uniwersalność detektora Corona CAD pozwala na zastosowanie go do oznaczania całego spektrum związków chemicznych, np. białek, DNA, oligonukleotydów, aminokwasów czy oligosacharydów. Oznaczanie tych ostatnich stanowi często problem w analizach chromatograficznych. Wynika to z faktu, że cząsteczki cukrów nie posiadają grup chromoforowych, co uniemożliwia stosowanie detekcji UV-VIS. W takiej sytuacji można z powodzeniem wykorzystać detektor wyładowań koronowych Corona CAD. Detektor wyładowań koronowych można również stosować w tzw. szybkiej chromatografii. Zaprojektowana została specjalna wersja detektora – Corona ultra. Charakteryzuje się ona wyższą częstotliwością zbierania danych (100 Hz) oraz możliwością ustawienia temperatury w nebulizerze. Podsumowanie Detektor wyładowań koronowych Corona CAD stanowi doskonałą alternatywę i uzupełnienie dla klasycznych detektorów w sytuacjach, kiedy oznaczane substancje nie posiadają grup chromoforowych. Innowacyjna koncepcja pozwala na stosowanie detektora do oznaczeń wszystkich nielotnych substancji, a jego odpowiedź nie zależy od ich budowy chemicznej. Detektor wyładowań koronowych Corona CAD może być sprzęgany z dowolnym zestawem HPLC. Charakteryzuje się wysoką czułością, szerokim dynamicznym zakresem pomiarowym, powtarzalnością wyników i prostotą obsługi. Podsumowując, detektor Corona CAD posiada wszystkie cechy uniwersalnego detektora HPLC. Detektor wyładowań koronowych jest również dostępny w wersji zaprojektowanej do szybkiej chromatografii. q reklama Rozdział oligosacharydów dr Rafał Bachorz Polygen Sp. z o.o. 48 Rys. 1. Schemat działania detektora wyładowań koronowych Corona CAD z użyciem Corona CAD Opracowana została metoda oznaczania oligosacharydów (glukoza, maltoza, maltotrioza, maltotetroza, maltopentoza, maltoheksoza i maltoheptoza) z użyciem detektora Corona CAD, której granice detekcji można oszacować na poziomie < 5 ng. Do rozdziału wykorzystano kolumnę Asahipak NH2P-50 (4,6 x 250 mm, 5 µm) firmy Shodex. Parametry zestawu HPLC to: przepływ 1 ml/min, temperatura kolumny 35°C, objętość nastrzyku 10 µl, faza ruchoma (A – acetonitryl, B – woda), gradient: czas 0,01 min 30% B, 40,0 min 70% 49