Monoclonal Mouse Anti-Human CD68/FITC Clone KP1

Monoclonal Mouse Anti-Human CD68/FITC Clone KP1

Monoclonal Mouse
Anti-Human CD68/FITC
Clone KP1
Numer katalogowy F 7135
Wydanie 01.01.03
Przeznaczenie
Do diagnostyki in vitro.
F 7135 jest przeznaczone do użycia w cytometrii przepływowej. Anti-CD68, Clone KP1, jest przeciwciałem
przeciwko antygenowi związanemu z monocytami/makrofagami i może być używane, razem z panelem innych
przeciwciał, do odróżniania komórek pochodzenia limfoidalnego i monocytarno/makrofagowego (1, 2).
Interpretacji wyników może dokonywać wykwalifikowany patolog w oparciu o wywiad kliniczny i inne testy
diagnostyczne.
Synonimy antygenu
Macrosialin, gp110 (8).
Wprowadzenie
CD68 to wysoce glikozylowane lizosomalne białko błonowe o masie 110 kDa. Białko CD68 należy do rodziny
lizosomalnych glikoprotein plazmatyczno-błonowych, które bierze udział w endocytozie i/lub kierowaniu do
lizosomów (3, 7). W odróżnieniu od wielu innych antygenów CD na leukocytach, cząsteczka CD68 jest
antygenowo bardzo heterogenna, a różne przeciwciała przeciwko CD68 wykazują różną reaktywność z
komórkami (4).
CD68 ulega silnej ekspresji w ziarnistościach cytoplazmy, a słabo na powierzchni makrofagów, monocytów,
neutrofili, bazofili I komórek NK (3). CD68 mozna także znaleźć w komórkach nowotworowych o pochodzeniu
mieloidalnym. Ponadto CD68 ulega ekspresji na około 40% limfocytów B krwi obwodowej i słabo na 50%
komórek ostrej białaczki limfoblastycznej wywodzącej się z komórek B (3). CD68 można też wykryć w
cytoplazmie komórek nie hematopoetycznych, szczególnie wątroby, miedniczek i kłębuszków nerek (3).
Odczynnik dostarczony
Przeciwciało Anti-CD68, F 7135, zostało wyprodukowane z oczyszczonych monoklonalnych przeciwciał mysich.
Koniugat jest dostarczany w postaci płynnej w buforze zawierającym 1% albuminy z surowicy wołu (BSA) i 15
mmol/L NaN3, o pH 7,2. Każda fiolka zawiera ilość przeciwciała na 100 oznaczeń (10 L przeciwciała na
maksymalnie 106 leukocytów z normalnej ludzkiej krwi obwodowej).
Izotyp: IgG1, kappa. Stężenie koniugatu mg/L:Zobacz etykietka na fiolce.
Przeciwciało,
nr katalogowy
F 7135
Fluorochrom
Kontrola
negatywna,
nr katalogowy
FITC (Fluorescein Isothiocyanate Isomer 1)
X 0927
Immunogen
Lizosomalna frakcja ludzkich makrofagów z płuc (6).
Swoistość
Anti-CD68, KP1, zostało oznaczone jako anti-CD68 na czwartym International Workshop and Conference on
Human Leucocyte Differentiation Antigens, który odbył się w Wiedniu w 1989 roku (7).
Anti-CD68, KP1, znakuje cytoplazmę w typie M1-M5 AML, dając silne barwienie ziarnistości (1, 4). Komórki
tuczne, zarówno normalne, jak i patologiczne, a także 1/1 przypadek prawdziwego nowotworu wywodzącego
się z histiocytów, też barwiły się przeciwciałem (2, 5).
Środki ostrożności
1. Do stosowania przez osoby przygotowane zawodowo.
2. Produkt zawiera azydek sodowy (NaN3), odczynnik chemiczny silnie toksyczny w czystej postaci. W stężeniu
obecnym w produkcie, chociaż nie klasyfikowanym jako niebezpieczne, azydek sodowy może reagować z
elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, tworząc silnie wybuchowe pochodne lub azydki tych metali.
Przy usuwaniu odpadów przepłukać spływ dużą ilością wody, aby uniknąć tworzenia się azydków.
3. Jak w przypadku każdego materiału biologicznego należy stosować odpowiednie procedury.
Przechowywanie
Staining procedure
(108480-002)
Przechowywać w temp. 2-8oC. Nie używać po upływie daty ważności wskazanej na opakowaniu. Jeśli produkt
był przechowywany w warunkach innych niż wskazane, użytkownik musi sprawdzić jakość produktu. Ponieważ
nie ma wyraźnych oznak wskazujących na zmianę trwałości produktu, zawsze należy badać dodatnią i ujemną
kontrolę równolegle z próbką badaną. Jeżeli pojawia się nieswoiste barwienie bez zmiany procedur
laboratoryjnych i można podejrzewać, że dzieje się to z winy przeciwciała, należy skontaktować się z serwisem
technicznym firmy Dako.
1.
Przenieść 50 L (max. 106 komórek) zawiesiny komórek, która ma być analizowana (pełna krew, szpik
kostny lub komórki jednojądrzaste) do każdej probówki.
2.
Dodać 100 L Dako IntraStain, Reagent A (Fixation), numer katalogowy K 2311. Zamieszać delikatnie na
mieszadle, aby zawiesić komórki.
3.
Inkubować w temperaturze pokojowej przez 15 minut.
4.
Dodać 2 mL PBS i zamieszać na mieszadle.
5.
Odwirować przy 300 x g przez 5 minut, potem odciągnąć i odrzucić supernatant, zostawiając około 50 L
płynu.
F 7135/PL/KKR/01.01.03 str. 1/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17
6.
Zmieszać dokładnie na mieszadle, aby zawiesić komórki i dodać 100 L Dako IntraStain, Reagent B
(Permeabilisation), numer katalogowy K 2311. Dodać 10 L F 7135. Zamieszać delikatnie na mieszadle,
aby zawiesić komórki.
7.
Użyć niereagującego przeciwciała o tym samym izotypie i sprzęgniętego z tym samym fluorochromem jako
kontroli ujemnej (patrz tabela).
8.
Inkubować w ciemnościach, w temperaturze pokojowej, przez 15 minut.
9.
Powtórzyć kroki 4 i 5.
10.
Zawiesić komórki w płynie odpowiednim do pomiarów cytometrycznych,np. 0,3 mL roztworu zawierającego
1% paraformaldehyd jako utrwalacz w 0,01 mol/L PBS, o pH 7,4.
11.
Zanalizować na cytometrze przepływowym.
Zaleca się użyć odpowiedniej kontroli dodatniej i ujemnej przy każdym pomiarze dla sprawdzenia odczynnika i
przygotowania próbki. Proszę zwrócić uwagę, że odczynniki sprzęgnięte z fluorochromami są wrażliwe na
światło i próbki powinny być przed nim chronione podczas barwienia aż do czasu analizy.
Literatura
1.
Horny H-P, Wehrmann M, Steinke B, Kaiserling E. Assessment of the value of immunohistochemistry in the
subtyping of acute leukemia on routinely processed bone marrow biopsy specimens with particular reference
to macrophage-associated antibodies. Hum Pathol 1994;25:810-4.
2.
Warnke RA, Pulford KAF, Pallesen G, Ralfkiaer E, Brown DC, Gatter KC, et al. Diagnosis of
myelomonocytic and macrophage neoplasms in routinely processed tissue biopsies with monoclonal
antibody KP1. Am J Pathol 1989;135:1089-95.
3.
Goyert SM. MC12. CD68 workshop panel report. In: Kishimoto T, Kikutani H, von dem Borne AEG,
Goyert SM, Mason DY, Miyasaka M, et al., editors. Leucocyte typing VI. White cell differentiation
antigens. Proceedings of the 6th International Workshop and Conference; 1996 Nov 10-14; Kobe, Japan.
New York, London: Garland Publishing Inc; 1997. p. 1015-6.
4.
Falini B, Flenghi L, Pileri S, Gambacorta M, Bigerna B, Durkop H, et al. PG-M1: a new monoclonal
antibody directed against a fixative-resistant epitope on the macrophage-restricted form of the CD68
molecule. Am J Pathol 1993;142:1359-72.
5.
Horny H-P, Schaumburg-Lever G, Bolz S, Geerts ML, Kaiserling E. Use of monoclonal antibody KP1 for
identifying normal and neoplastic human mast cells. J Clin Pathol 1990;43:719-22.
6.
Pulford KAF, Rigney EM, Micklem KJ, Jones M, Stross WP, Gatter KC, et al. KP1: a new monoclonal
antibody that detects a monocyte/macrophage associated antigen in routinely processed tissue sections.
J Clin Pathol 1989;42:414-21.
7.
Micklem K, Cordell J, Rigney E, Simmons D, Pulford K, Stross P, et al. M13.1. A macrophage-associated
antigen defined by five mAB. In: Knapp W, Dörken B, Gilks WR, Rieber EP, Schmidt RE, Stein H, et al.,
editors. Leucocyte typing IV. White cell differentiation antigens. Proceedings of the 4th International
Workshop and Conference; 1989 Feb 21-25; Vienna, Austria. Oxford, New York, Tokyo: Oxford
University Press; 1989. p. 843-6.
8.
Goyert SM. CD Guide. CD68. In: Kishimoto T, Kikutani H, von dem Borne AEG, Goyert SM, Mason DY,
Miyasaka M, et al., editors. Leucocyte typing VI. White cell differentiation antigens. Proceedings of the 6th
International Workshop and Conference; 1996 Nov 10-14; Kobe, Japan. New York, London: Garland
Publishing Inc.; 1997. p. 1166.
Objaśnienia symboli
(108480-002)
Numer katalogowy
Temperatura przechowywania
Zużyć przed
Wyrób medyczny do
diagnostyki in vitro
Chronić przed światłem
(sprawdź w rozdz.
przechowywanie)
Producent
Sprawdź w instrukcji
stosowania
Numer serii
F 7135/PL/KKR/01.01.03 str. 2/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17