FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human CD34 Class II Klon QBEnd 10

FLEX
Monoclonal Mouse
Anti-Human
CD34 Class II
Klon QBEnd 10
Ready-to-Use
(Dako Autostainer/Autostainer Plus)
Nr kat. IS632
Przeznaczenie
Do stosowania w diagnostyce in vitro.
Przeciwciało FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human CD34 Class II, klon QBEnd 10, Ready-to-Use, (Dako
Autostainer/ Autostainer Plus), jest przeznaczone do stosowania w immunohistochemii w aparatach Dako
Autostainer/Autostainer Plus. Przeciwciała te są przydatne w identyfikacji nowotworów pochodzenia naczyniowego
i limfatycznego oraz klasyfikacji białaczek (1–3). Interpretacja kliniczna dodatniego lub ujemnego odczynu musi być
uzupełniona przez ocenę morfologiczną, wykonanie odpowiednich prób kontrolnych i interpretowana przez
doświadczonego patologa w kontekście historii choroby pacjenta i innych badań diagnostycznych.
Streszczenie
i informacje ogólne
CD34 jest jednołańcuchowym białkiem przezbłonowym o masie ok. 116 kDa. Ekspresja białka CD34
występuje w niedojrzałych komórkach krwiotwórczych macierzystych/progenitorach, komórkach śródbłonka naczyń
włosowatych, fibroblastach embrionalnych i niektórych komórkach glejowych w tkance nerwowej (4, 5).
NajwyŜszy poziom ekspresji CD34 obserwuje się w najwcześniejszych progenitorach, a ekspresja słabnie stopniowo
w miarę dojrzewania komórek (6, 7). CD34 jest antygenem róŜnicującym leukocyty, swoistym dla etapu a nie szlaku
róŜnicowania w kierunku określonej linii komórkowej. Najmniej dojrzałe definiowalne prekursory linii
komórek B tkanki chłonnej (CD19+/CD10+/TdT+) to CD34+ (5-7). Niedojrzałe prekursory linii komórek T tkanki
chłonnej takŜe wykazują ekspresję TdT i CD34 (5). Prawidłowe limfocyty izolowane z krwi obwodowej, monocyty,
granulocyty i płytki krwi nie wykazują ekspresji białka CD34. Ekspresja CD34 zachodzi w około 60 % ostrych
białaczek limfoidalnych limfocytów B, 40 % ostrych białaczek szpikowych i w 1 % do 5 % ostrych białaczek
limfoidalnych limfocytów T (7). Stwierdzono, Ŝe chroniczne białaczki limfoidalne, chłoniaki i szpiczaki mnogie nie
wykazują ekspresji CD34 (4–7).
Przeciwciała monoklonalne przeciwko CD34 zalicza się do trzech głównych klas: klasa I, klasa II i klasa III,
określonych na podstawie czułości epitopów CD34 na rozkład przez określone enzymy. Przeciwciała QBEnd 10 są
zaliczane do przeciwciał monoklonalnych II klasy, które rozpoznają epitop CD34 oporny na trawienie neuraminidazą,
a wraŜliwy na trawienie glukoproteazą i chymopapainą (4, 7, 8).
Zobacz dokument Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych firmy Dako lub następujące
części instrukcji do systemu detekcji IHC: 1) Zasada przeprowadzenia odczynu, 2) Niezbędne materiały
niedostarczone z zestawem, 3) Przechowywanie, 4) Przygotowanie preparatu, 5) Wykonanie barwienia, 6) Kontrola
jakości, 7) Rozwiązywanie problemów, 8) Interpretacja wyniku barwienia, 9) Ograniczenia metody.
Dostarczany
odczynnik
Gotowe do uŜycia mysie przeciwciała monoklonalne są dostarczane w postaci ciekłej w buforze zawierającym białko
stabilizujące i roztwór NaN3 o stęŜeniu 0,015 mol/L.
Klon: QBEnd 10. Izotyp: IgG1, kappa.
Immunogen
Nabłonkowe błony komórkowe uzyskane jako pęcherzyki z ludzkiego łoŜyska (6, 8).
Swoistość
Przeciwciała anty-CD34, QBEnd 10, opisano podczas warsztatów Fourth and Fifth International Workshops and
Conferences on Human Leucocyte Differentiation Antigens (4. i 5. międzynarodowe warsztaty i konferencje na temat
antygenów róŜnicujących ludzkie leukocyty), a ich reaktywność z CD34 (6, 8) i epitopem klasy II (8) została
potwierdzona przez róŜne laboratoria.
Na skrawkach utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie migdałków przeciwciała znakują komórki
śródbłonka.
Środki ostroŜności
1. Odczynniki przeznaczone dla przeszkolonych UŜytkowników.
2. Opisywany produkt zawiera silnie toksyczny związek — azydek sodu (NaN3), w czystej postaci. StęŜenie NaN3
występujące w produkcie nie jest klasyfikowane jako niebezpieczne. Jednak w wyniku reakcji NaN3 z ołowiem lub
miedzią, wchodzącymi w skład instalacji kanalizacyjnych, mogą powstawać silnie wybuchowe azydki metali.
Przy usuwaniu resztek odczynnika uŜywać duŜych ilości wody do przepłukiwania, aby uniknąć gromadzenia się
azydków w instalacji kanalizacyjnej.
3. Podobnie jak w przypadku kaŜdego produktu otrzymywanego z materiału biologicznego, naleŜy stosować
odpowiednie procedury postępowania.
4. NaleŜy stosować właściwe wyposaŜenie ochronne, zabezpieczające przed kontaktem odczynnika ze skórą
bądź oczami.
5. Niewykorzystany odczynnik naleŜy usuwać zgodnie ze stosownymi przepisami lokalnymi i krajowymi.
(116922-002)
Dako Denmark A/S
IS632/PL/MNI/2009.12.04 s. 1/3
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Przechowywanie
Przechowywać w temperaturze 2–8 °C. Nie stosowa ć po upływie terminu waŜności podanego na opakowaniu.
JeŜeli odczynniki są przechowywane w warunkach innych niŜ podane na ulotce dołączanej do opakowania,
uŜytkownik powinien je zweryfikować. Nie ma jednoznacznych oznak świadczących o niestabilności produktu. Z tego
względu jednocześnie z badaniem próbek pochodzących od pacjentów, naleŜy wykonywać dodatnie i ujemne próby
kontrolne. W wypadku nieoczekiwanego wyniku odczynu, którego nie moŜna wyjaśnić róŜnicami w procedurach
laboratoryjnych, gdy podejrzewa się problem z przeciwciałem, naleŜy się skontaktować z działem wsparcia
technicznego firmy Dako.
Przygotowanie
próbek oraz materiały
wymagane, ale
niedostarczane
Przeciwciała mogą być wykorzystane do znakowania utrwalonych formaliną skrawków zatapianych w parafinie.
Preparaty tkankowe naleŜy pociąć na skrawki o wymiarach około 4 µm.
Wymagane jest poddanie cieplnemu odmaskowaniu antygenu (HIER) z uŜyciem Dako PT Link (nr kat.
PT100/PT101). Szczegółowe instrukcje zawiera Instrukcja uŜytkownika aparatu PT Link. Optymalne wyniki uzyskuje
się w wyniku wstępnej obróbki tkanek przy uŜyciu roztworu EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH
(50x) (nr kat. K8000/K8004).
Skrawki zatapiane w parafinie: Do obróbki wstępnej utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków
tkankowych, zalecana jest procedura 3 w 1 z uŜyciem odczynnika Dako PT Link. Postępować według procedury
wstępnej obróbki tkanek, zamieszczonej w ulotce roztworu EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x)
(nr kat. K8000/K8004). Uwaga: Po przeprowadzeniu barwienia skrawki muszą być odwodnione, oczyszczone
zakryte za pomocą środka do trwałego zatapiania.
Odparafinowane skrawki: Do obróbki wstępnej utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków
tkankowych, zalecane jest uŜycie odczynnika Dako PT Link i przeprowadzenie procedury opisane dla skrawków
parafinowych. Po zakończeniu barwienia szkiełka naleŜy zatopić w wodnym lub trwałym środku do zatapiania.
W trakcie przygotowywania oraz podczas procedury znakowania immunohistochemicznego skrawki nie powinny
wyschnąć. W celu uzyskania lepszego przylegania skrawków do szkiełek podstawowych, zaleca się stosowanie
szkiełek FLEX IHC Microscope Slides (nr kat. K8020).
Wykonanie odczynu
oraz materiały
wymagane, ale
niedostarczane
Zalecanym systemem wizualizacji jest EnVision FLEX, High pH (Dako Autostainer/Autostainer Plus)
(nr kat. K8010). Oprogramowanie aparatów Dako Autostainer/Autostainer Plus zawiera wstępnie zaprogramowane
etapy odczynu i czas barwienia, które są aktywne podczas korzystania z następujących protokołów:
Protokół wzorcowy: FLEXRTU2 (dawka odczynnika 200 µL) lub FLEXRTU3 (dawka odczynnika 300 µL)
Autoprogram: CD34 (bez barwienia kontrastowego) lub CD34H (z barwieniem kontrastowym)
Dla etapu „Auxiliary” naleŜy ustawić opcję „rinse buffer” w programach barwienia ≤10 szkiełek. Przy programach
z więcej niŜ 10 szkiełkami, etap „auxiliary” naleŜy ustawić na „none”. Zapewnia to porównywalne czasy płukania.
Wszystkie procedury inkubacji naleŜy równieŜ przeprowadzać w temperaturze pokojowej. Szczegółowe informacje
zawiera instrukcja obsługi odpowiedniego aparatu. Jeśli protokoły nie są dostępne w uŜywanym aparacie
Autostainer, naleŜy skontaktować się z działem wsparcia technicznego firmy Dako.
Optymalne warunki mogą się zmieniać w zaleŜności od rodzaju materiału i sposobu jego przygotowania i powinny
być określone indywidualnie w kaŜdym laboratorium. Aby moŜliwe było wykonanie oceny przez patologów z róŜnym
nasileniem odczynu preparatów, naleŜy skontaktować się z działem obsługi/obsługą techniczną firmy Dako
w celu uzyskania informacji dotyczącej zmiany programowania protokołu. NaleŜy upewnić się, Ŝe działanie
zmodyfikowanego protokołu jest prawidłowe — w tym celu naleŜy ocenić, czy odczyn jest taki jak opisany w części
„Charakterystyka wydajnościowa”.
Zalecane jest barwienie kontrastowe hematoksyliną za pomocą EnVision FLEX Hematoxylin (Dako
Autostainer/Autostainer Plus) (nr kat. K8018). Zaleca się stosowanie bezwodnego, trwałego środka do zatapiania.
Równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów naleŜy wykonywać dodatnie i ujemne próby
kontrolne z uŜyciem identycznego protokołu. Dodatnia kontrola tkankowa powinna obejmować wątrobę, natomiast
we wszystkich dodatnich preparatach komórki/struktury powinny wskazywać odczyn reakcji taki jak opisany dla tej
tkanki w części „Charakterystyka wydajnościowa”. Zalecana kontrola ujemna to FLEX Negative Control, Mouse
(Dako Autostainer/Autostainer Plus) (nr kat. IS750).
Interpretacja odczynu
Przeciwciała dają odczyn błonowy.
Charakterystyka
wydajnościowa
Tkanki prawidłowe: Przeciwciało znakuje naczynia włosowate większości tkanek oraz tętnicę pępkową, w mniejszym
zakresie, Ŝyłę. Brak odczynu w nabłonku większości duŜych naczyń i nabłonku zatok łoŜyska (8).
Tkanki nieprawidłowe: Wszystkie 112 przypadków nowotworów pochodzenia naczyniowego, 54 raków róŜnych
rodzajów i 45 przypadków guzów wrzecionowatokomórkowych pochodzenia innego niŜ naczyniowe wykazywały
odczyn dodatni z przeciwciałem anty-CD34, klon QBEnd-10 (2). We wszystkich (22/22) przypadkach łagodnych guzy
pochodzenia naczyniowego stwierdzono immunoreaktywność. Tylko 5/8 przypadków naczyniaka chłonnego
wykazało słaby odczyn ogniskowy z QBEnd-10 (2). Komórki guzów w obszarach mięsaków naczyniowych
i obszarach litych wykazały immunoreaktywność względem QBEnd-10 w odpowiednio 17/23 i 13/24
przypadkach (2). W dzielących się naczyniach i większości komórek wrzecionowatych w mięsakach Kaposiego
zaobserwowano odczyn dodatni we wszystkich 40 przypadkach. Tylko w 1/54 przypadków raków stwierdzono reakcję
w świetle przewodów z QBend-10. Odczyn dodatni zaobserwowano w 17/45 przypadków guzów
wrzecionowatokomórkowych (2).
(116922-002)
Dako Denmark A/S
IS632/PL/MNI/2009.12.04 s. 2/3
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Piśmiennictwo
1. Campos L, Guyotat D, Archimbaud E, Devaux Y, Treille D, Larese A, et al. Surface marker expression in adult
acute myeloid leukaemia: correlations with initial characteristics, morphology and response to therapy. Br J
Haematol 1989;72:161-6.
2. Ramani P,Bradley NJ, Fletcher CDM. QBEND/10, a new monoclonal antibody to endothelium: assesment of its
diagnostic utility in paraffin sections. Histopathology 1990;17:237-242.
3. Fina L, Molgaard HV, Robertson D, Bradley NJ, Monaghan P, Delia D, et al. Expression of the CD34 gene in
vascular endothelial cells. Blood 1990;75(12):2417-2426.
4. Nishio H, Tada J, Hashiyama M, Hirn J, Ingles-Esteve J, Suda T. MC7. CD34 workshop panel report. In:
Kishimoto T, Kikutani H, von dem Borne AEG, Goyert SM, Mason DY, Miyasaka M, et al., editors. Leucocyte
typing VI. White cell differentiation antigens. Proceedings of the 6th International Workshop and Conference;
1996 Nov 10-14; Kobe, Japan. New York, London: Garland Publishing Inc.; 1997. p. 974–76.
5. Krause DS, Fackler MJ, Civin CI, May WS. CD34: structure, biology, and clinical utility (review). Blood 1996;87:1-13.
6. Civin CI, Trischmann TM, Fackler MJ, Bernstein ID, Bühring HJ, Campos L, et al. M7.1. Report on the CD34
cluster workshop. In: Knapp W, Dörken B, Gilks WR, Rieber EP, Schmidt RE, Stein H, et al., editors. Leukocyte
typing IV. White cell differentiation antigens. Proceedings of the 4th International Workshop and Conference;
1989 Feb 21-25; Vienna, Austria. Oxford, New York, Tokyo: Oxford University Press; 1989. p. 818–25.
7. Civin CI, Strauss LC, Fackler MJ, Trischmann TM, Wiley JM, Loken MR. Positive stem cell selection - basic
science. Prog Clin Biol Res 1990;333:387-402.
8. Dercksen MW, Daams GM, de Haas M, von dem Borne AEG, van der Schoot CE. M10.2 Characterization of the
CD34 cluster. In: Schlossman SF, Boumsell L, Gilks W, Harlan JM, Kishimoto T, Morimoto C, et al., editors.
Leucocyte typing V. White cell differentiation antigens. Proceedings of the 5th International Workshop and
Conference; 1993 Nov 3-7; Boston, USA. Oxford, New York, Tokyo: Oxford University Press; 1995. p. 850–3.
Objaśnienie symboli
Numer katalogowy
Temperatura przechowywania
ZuŜyć przed
Wyrób medyczny do
diagnostyki in vitro
Zawartość wystarcza na <n>
testów
Producent
Sprawdzić w instrukcji
stosowania
Numer serii
(116922-002)
Dako Denmark A/S
IS632/PL/MNI/2009.12.04 s. 3/3
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17