Specsheet Template CE

Monoclonal Mouse Anti-Human CD4, Klon MT310
Nr katalogowy C 7226
Nr katalogowy F 0766
Nr katalogowy R 0805
Nr katalogowy C 7069
Przeznaczenie
APC-Conjugated
FITC-Conjugated
RPE-Conjugated
RPE-Cy5-Conjugated
Do diagnostyki in vitro.
C 7226, F 0766, R 0805 i C 7069 są przeznaczone do cytometrii przepływowej. Pomiar względnej i absolutnej
liczby komórek CD4-dodatnich w krwi obwodowej jest szczególnie ważne w ocenie stanu immunologicznego
chorego. Ponadto, przeciwciała przeciw CD4 są ważne w ocenie immunofenotypowej reaktywnych limfocytów i
w badaniach zaburzeń odpowiedzi limfoproliferacyjnej (1). Interpretacja badań musi być przeprowadzona przez
wykwalifikowany personel z uwzględnieniem historii choroby i innych testów diagnostycznych.
Wprowadzenie
CD4 jest glikoproteiną o masie cząsteczkowej 55 kDa z czterema immunoglobulinopodobnymi zewnętrznymi
domenami, domeną przezbłonową i wysoko konserwatywną domeną wewnątrzkomórkową (1). CD4 działa jako
koreceptor w indukowanej antygenem, przebiegającej w warunkach restrykcji MHC klasy II, aktywacji komórek
T. CD4 odgrywa również rolę w regulacji adhezji limfocytów T i B przy braku rozpoznania antygenu i w
różnicowaniu grasiczym (2).
CD4 jest obecny na tymocytach, jest markerem komórek T pomocniczych/indukujących i jest obecny na
65% dojrzałych obwodowych komórek T. Może służyć do identyfikacji subpopulacji supresorowych
cytotoksycznych komórek T
wśród CD4-dodatnich komórek T. CD4 jest także obecny
monocytach/makrofagach, komórkach Langerhansa i innych komórkach dendrytycznych. Komórki B
wykazują ekspresji CD4.
55lub
na
nie
Większość obwodowych chłoniaków T komórkowych pochodzi z pomocniczych komórek T, stąd większość
pograsiczych nowotworów T komórkowych wykazuje ekspresję CD4 (1).
Odczynnik dostarczony
Koniugaty anty-CD4, C 7226, F 0766, R 0805 i C 7069 zostały wyprodukowane z oczyszczonego mysiego
monoklonalnego przeciwciała. Koniugaty są dostarczone w postaci płynnej, w buforze zawierającym 1%
surowicy cielęcej (BSA) i 15 mmol/L NaN3, pH 7.2. Każda probówka zawiera objętość potrzebną do wykonania
100 testów (10 L koniugatu dla ok. 106 leukocytów normalnej ludzkiej krwi obwodowej).
Isotyp: IgG1, kappa. Stężenie koniugatu mg/L: Zob. opis na fiolce.
Przeciwciało
Nr
katalogowy
Fluorochrom
Kontrola
negatywna
Nr katalogowy
F 0766
FITC (izotiocyjanian fluoresceiny, izomer 1)
X 0927
R 0805
RPE (R-fikoerytryna)
X 0928
C 7069
RPE-Cy5 (R-fikoerytryna+ cyanina 5)
X 0955
C 7226
APC (allofikocyanina)
X 0968
Swoistość
Anti-CD4, MT310 zostało zaakceptowane przez Second International Workshop and Conference on Human
Leucocyte Differentiation Antigens. Badania różnych laboratoriów potwierdziły ich reaktywność z antygenem
CD4 (3).
Środki ostrożności
1. Do stosowania przez osoby przygotowane zawodowo.
2. Produkt zawiera azydek sodowy (NaN3 ), odczynnik chemiczny silnie toksyczny w czystej postaci. W
stężeniu obecnym w produkcie, chociaż nie klasyfikowanym jako niebezpieczne, azydek sodowy może
reagować z elementami kanalizacji z miedzi lub ołowiu tworząc silnie wybuchowe azydki tych metali. Przy
usuwaniu odpadów przepłukać spływ dużą ilością wody, aby uniknąć tworzenia się azydków.
3. Jak w przypadku każdego materiału biologicznego należy stosować odpowiednie procedury.
Przechowywanie
Przechowywać bez dostępu światła, w temp. 2-8 C. Nie używać po upłynięciu daty ważności określonej na
probówce. Jeżeli odczynnik jest przechowywany w innych warunkach niż wymienione, ich jakość musi zostać
zweryfikowana przez użytkownika. Nie oznacza to niestabilności produktu. Jednak, równocześnie z materiałem
pochodzącym od chorego, powinny być wykonane kontrole pozytywna i negatywna. W przypadku wystąpienia
nieoczekiwanych wyników barwienia, które nie mogą być wytłumaczone wariantami procedur laboratoryjnych
oraz w przypadku podejrzenia problemów z przeciwciałem, prosimy o kontakt z naszym serwisem technicznym.
Procedura barwienia
1.
Pobrać krew żylną do probówki zawierającej antykoagulant.
2.
Wyizolować komórki jednojądrzaste przez wirowanie na medium izolacyjnym. Alternatywnie, zlizować
erytrocyty po kroku 6.
(111612-004)
3.
Dwukrotnie płukać komórki jednojądrzaste w RPMI 1640 lub PBS, pH 7.2-7.4.
4.
Zmieszać 100 L zawiesiny komórek z 10 L znakowanych fluorochromem anty-CD4.
5.
Użyć nieaktywnych przeciwciał monoklonalnych tego samego izotopu i znakowanych tym samym
fluorochromem jako kontroli negatywnej (zob. tabela)
6.
Inkubować bez dostępu światła w temp. 4C przez 30 minut.
C 7226/F 0766/R 0805/C 7069/PL/OKJ/01.09.02 str. 1/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17
7.
Dwukrotnie płukać w PBS zawierającym 2% BSA. Zawiesić komórki w odpowiednim dla cytometrii
przepływowej płynie, np. 0.3 mL 0.01 mol/L PBS, pH 7.4.
8.
Przeprowadzić analizę cytometryczną.
Zaleca się stosowanie pozytywnej i negatywnej kontroli. Ponieważ koniugaty fluorochromów są wrażliwe na światło,
próbki powinny być chronione przed światłem w czasie procedury barwienia i do czasu analizy.
Swoiste ograniczenia
produktu
Piśmiennictwo
Zaobserwowano, że koniugaty RPE-Cy5 mogą wiązać się z monocytami i być przyczyną powstawania tła (4).
1. Leong AS-Y, Cooper K, Leong FJW-M. Manual of diagnostic antibodies for immunohistology. London:
Oxford University Press; 1999. p. 49-50.
2. Piatier-Tonneau D. CD Guide. CD4. In: Mason D, André P, Bensussan A, Buckley C, Civin C, Clark E, et
al., editors. Leucocyte typing VII. White cell differentiation antigens. Proceedings of the 7th International
Workshop and Conference; 2000 Jun 19-23; Harrogate, United Kingdom. New York: Oxford University
Press Inc.; 2002. p. 750-51.
3. Miedema F, Terpstra FG, Melief CJM. T cell-dependent immunoglobulin synthesis in the human system.
Studies with T cell-specific monoclonal antibodies. In: Reinherz EL, Haynes BF, Nadler LM, Bernstein ID,
editors. Leukocyte typing II. Proceedings of the 2nd International Workshop on Human Leukocyte
Differentiation Antigens; 1984 Sept 17-20; Boston, USA. New York, Berlin, Heidelberg, Tokyo: SpringerVerlag; 1986. Volume I. p. 213-22.
4. van Vugt MJ, van den Herik-Oudijk IE, van de Winkel JGJ. Binding of PE-CY5 conjugates to the human
high-affinity receptor for IgG (CD64). Blood 1996;88:2358-61.
Objaśnienia symboli
(111612-004)
Numer katalogowy
Temperatura przechowywania
Zużyć przed
Wyrób medyczny do
diagnostyki in vitro
Chronić przed silnym światłem
(sprawdź w zasadach
przechowywania)
Producent
Sprawdź w instrukcji
stosowania
Numer serii
C 7226/F 0766/R 0805/C 7069/PL/OKJ/01.09.02 str. 2/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17