Elektroforeza

Nazwisko i imię ………………………………………………… Grupa …………….. Data …………….
Elektroforeza białek i lipoprotein surowicy w żelu agarozowym.
Białka surowicy, w tym lipoproteiny, wykazują podobną ruchliwość w tych samych warunkach rozdziału.
Położenie pasm białek uwidacznia się po ich wybarwieniu. Końcowy obraz pasm (rodzaj widocznych
białek) zależy od wybranego sposobu barwienia.
1. Warunki elektroforezy.
a. rodzaj i stężenie żelu:
b. pH rozdziału = ………….;
bufor …………………………..…
c. ładunek białek:
d. napięcie prądu:
e. czas trwania rozdziału:
f. barwnik kontroli rozdziału:
2. Schemat naniesienia próbek w ilości po 3 - 5l wysolonych frakcji i pełnej surowicy:
Zaznacz kierunek elektroforezy, nazwij elektrody i określ ich ładunek
--------
start
3. Procedura obróbki płytek po elektroforezie.
a. utrwalanie: skład utrwalacza
b. „pressing”, płukanie, „pressing”, suszenie
4. Wybarwianie – rodzaj użytego barwnika w roztworze do barwienia
a. Niespecyficzne - wszystkich białek surowicy - ……………………..……
b. Specyficzne - lipoprotein surowicy - …………………………..…………
5. Odbarwianie tła w kąpielach odbarwiacza o składzie chemicznym:
1
6. Ocena frakcji białek
Fizjologiczny obraz elektroforezy białek surowicy ludzkiej i densytogram – wykres uzyskany w wyniku oceny
gęstości optycznej frakcji białkowych z użyciem desytometru.
Wskaż i opisz frakcje w elektroforogramie i na wykresie desytometrycznym. Wskaż rodzaj elektrod, ich ładukek oraz
kierunek elektroforezy.
Podaj fizjologiczne wartości (udział %) frakcji białek.
Podaj wartości normalne stężenia białka całkowitego w surowicy :
Jaki jest prawidłowy stosunek ilości albumin/globulin? ………………………………..
Fizjologiczny obraz elektroforezy lipoprotein surowicy ludzkiej i densytogram – wykres uzyskany w wyniku oceny
gęstości optycznej frakcji lipidowych z użyciem desytometru.
Wskaż i opisz frakcje w elektroforogramie i na wykresie desytometrycznym. Wskaż kierunek elektroforezy. Podaj
fizjologiczne wartości (udział %) frakcji lipoprotein.
Podaj prawidłowe stężenie cholesterolu całkowitego w osoczu:
2
Zadania.
1. Wyjaśnij pojęcie elektroforezy. Podaj czynniki odpowiedzialne za względną ruchliwość cząsteczek w ośrodku
porowatym.
2. Zaznacz zdania prawdziwe dla elektroforezy :
a. Rozmiar porów w żelu poliakryloamidowym można kontrolować na etapie polimeryzacji
b. Elektroforeza PAGE rozdziela makrojony w warunkach natywnych i redukujących
c. SDS – detergent anionowy denaturuje białka i nadaje im ładunek dodatni
d. Metoda elektroforezy SDS-PAGE rozdziela cząsteczki w zależnie od ich wielkości
e. W obecności SDS najszybciej poruszają się makrocząstki o dużej masie
f. W obecności SDS najszybciej poruszają się makrocząstki o największym ładunku
3. Elektroforeza białek i lipoprotein surowicy krwi w agarozie, pH=8.6. Zaznacz zdania prawdziwe.
a. Większość białek surowicy stanowią albuminy, ich pasmo jest homogenne i najintensywniej się barwi
b. Największą prędkość anodową wykazują gamma-globuliny
c. W przewlekłym zapaleniu pasmo gamma-globulin poszerza się i intensywniej barwi w stosunku do normy
d. Rozdział surowicy zdrowego człowieka ujawnia obecność 2-3 frakcji lipoprotein
e. Obecność apolipoprotein warunkuje ruchliwość elektroforetyczną lipoprotein
4. Dodatek β-merkaptoetanolu do badanej próbki sprawia, że cząsteczki białek podczas elektroforezy:
a) tworzą jony obojnacze
c) ulegają wytrąceniu z roztworu
e) tracą strukturę III-rzędową
b) wędrują się w stronę elektrody dodatniej
d) ujawniają skład podjednostkowy
f) mają taką samą gęstość ładunku
5. Białka surowicy rozdzielono metodą elektroforezy w agarozie (żel 1%, pH 8,6) i wybarwiono czernią amidową.
Narysuj układ frakcji widoczny po zabarwieniu.
Podpisz frakcje, zaznacz położenie elektrod odpowiedniego znaku i kierunek elektroforezy.
start
6. Odważono 500 mg zliofilizowanego białka i rozpuszczono w buforze uzyskując objętość 25 cm3. Otrzymano
roztwór 0,0001 M o gęstości 1 g/cm3. Jaką masę cząsteczkową posiada rozpuszczone białko?
3