Monoclonal Mouse

FLEX
Monoclonal Mouse
Anti-Human CD2
Klon AB75
Ready-to-Use
(Link)
Nr kat. IR651
Przeznaczenie
Do badań diagnostycznych in vitro.
Przeciwciało FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human CD2, klon AB75, Ready-to-Use (Link), jest przeznaczone do
stosowania w immunohistochemii w aparatach Autostainer Link. Przeciwciało to znakuje prawidłowe komórki T oraz
powiązane nowotwory i jest szczególnie przydatne w identyfikacji chłoniaka z prekursorowych komórek T (1),
chłoniaka z obwodowych komórek T (2) oraz anaplastycznego chłoniaka z dużych komórek (3). Interpretacja
kliniczna wystąpienia lub braku barwienia musi być uzupełniona przez badania morfologiczne z wykorzystaniem
odpowiednich prób kontrolnych i powinna być przeprowadzana przez doświadczonego patologa z uwzględnieniem
historii choroby pacjenta i innych badań diagnostycznych.
Synonimy antygenu
Antygen T11, LFA-2 (lymphocyte function associated antigen-2 [antygen związany z czynnością limfocytów]) (4, 5).
Podsumowanie
i wyjaśnienie
Cząsteczka CD2 to glikoproteina transmembranowa o masie 50-55 kDa, i ulega ekspresji w zdecydowanej
większości tymocytów i praktycznie wszystkich obwodowych limfocytach T (4, 5). W ludzkiej cząsteczce CD2
zidentyfikowano trzy ważne funkcjonalnie epitopy, oznaczone jako T111, T112 i T113 (CD2R). Cząsteczka CD2 pełni
dwie funkcje: odpowiada za adhezję i aktywację. CD2 wiąże się z receptorem CD58 (LFA-3), należącym do
nadrodziny immunoglobulin. Wiążąc się z LFA-3 CD2 aktywuje komórki T i może również mediować adhezję
tymocytów do nabłonka grasicy. CD2 stanowi jeden z najwcześniejszych antygenów ograniczonych do linii
komórkowej pojawiających się w czasie różnicowania komórek T. CD2 uważany jest za uniwersalny antygen
komórek T i jest przydatny w identyfikacji praktycznie we wszystkich prawidłowych limfocytów T. Ulega on ekspresji
w większości chłoniaków i białaczek z komórek prekursorowych i pograsicznych, i zazwyczaj nie ulega ekspresji w
nowotworach z komórek B. CD2 może zostać nieprawidłowo usunięty w niektórych nowotworowych populacjach
komórek T, w szczególności w chłoniakach z obwodowych komórek T. Wykazano, że przeciwciała skierowane
przeciwko CD2 znakują tymocyty (95%), dojrzałe obwodowe komórki T (prawie wszystkie), komórki NK (80–90%) i
grasicze komórki B (50%) (4).
Patrz dokument Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych firmy Dako lub następujące
części instrukcji do systemu detekcji IHC: 1) Zasady procedury, 2) Niezbędne materiały niedostarczone z zestawem,
3) Przechowywanie, 4) Przygotowanie preparatu, 5) Wykonanie odczynu, 6) Kontrola jakości, 7) Rozwiązywanie
problemów, 8) Interpretacja wyniku odczynu, 9) Ograniczenia metody.
Odczynnik
dostarczony
Gotowe do użycia mysie przeciwciała monoklonalne są dostarczane w postaci ciekłej w buforze zawierającym białko
stabilizujące i azydek sodu o stężeniu 0,015 mol/L.
Klon: AB75. Izotyp: IgG1, kappa.
Immunogen
Rekombinowane białko fuzyjne odpowiadające zewnętrznej domenie cząsteczki CD2.
Swoistość
W analizie Western blot lizatu komórek linii MOLT-4 przeciwciało znakuje ludzką CD2.
Środki ostrożności
1. Do stosowania przez wyszkolony personel.
2. Produkt zawiera azydek sodu (NaN3), substancję chemiczną silnie toksyczną w czystej postaci. Azydek sodu,
zastosowany w produkcie w stężeniu, które nie jest sklasyfikowane jako niebezpieczne, może reagować z
elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, powodując nagromadzenie silnie wybuchowych azydków
metali. Po usunięciu spłukać dużą ilością wody, aby zapobiec nagromadzeniu się azydku metalu w kanalizacji.
3. Podobnie jak w przypadku wszelkich materiałów pochodzących ze źródeł‚ biologicznych, należy stosować
właściwe procedury postępowania.
4. W celu uniknięcia kontaktu z oczami i skórą należy nosić odpowiednie osobiste wyposażenie ochronne.
5. Niewykorzystany roztwór utylizować zgodnie z lokalnymi, wojewódzkimi i krajowymi rozporządzeniami.
Przechowywanie
(118101-001)
Przechowywać w temperaturze 2–8°C. Nie stosować po upływie terminu ważności podanego na fiolce. Jeśli
odczynniki są przechowywane w warunkach innych niż podane powyżej, użytkownik musi zweryfikować takie
warunki. Nie ma oczywistych oznak wskazujących na niestabilność produktu. Dlatego jednocześnie z badaniem
próbek pochodzących od pacjenta należy wykonywać kontrole dodatnie i ujemne. W wypadku nieoczekiwanego
wyniku odczynu, którego nie można wyjaśnić różnicami w procedurach laboratoryjnych, gdy podejrzewa się problem
z przeciwciałem, należy się skontaktować z działem wsparcia technicznego firmy Dako.
IR651/PL/SSM/07.04.08 str. 1/2
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Faks +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Przygotowanie
próbek
oraz materiały
wymagane, ale
niedostarczane
Przeciwciała mogą być wykorzystane do znakowania utrwalonych formaliną skrawków zatapianych w parafinie.
Preparaty tkankowe należy pociąć na skrawki o wymiarach około 4 µm.
Wymagane jest poddanie preparatów cieplnemu odmaskowaniu antygenu (HIER). Optymalne wyniki uzyskuje się w
wyniku wstępnej obróbki tkanek przy użyciu roztworu EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH (10x),
(Link) (nr kat. K8002/8004).
Odparafinowane skrawki: Do obróbki wstępnej utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków
tkankowych, które zostały odparafinowane, zalecany jest odczynnik Dako PT Link (nr kat. PT100/PT101).
Szczegółowe instrukcje zawiera Instrukcja użytkownika aparatu PT Link.
Postępować według procedury wstępnej obróbki zamieszczonej w ulotce roztworu EnVision FLEX Target Retrieval
Solution, High pH (10x), (Link) (nr kat. K8002/K8004). Dla aparatów PT Link należy stosować następujące
parametry: Temperatura wstępnego ogrzewania: 65°C; temperatura i czas odmaskowania antygenu: 97°C przez 20
(±1) minut, ochłodzić do 65°C. Usunąć statywy na szkiełka aparatu Autostainer wraz ze szkiełkami ze zbiornika
aparatu PT Link i natychmiast zanurzyć szkiełka w słoju/zbiorniku (np. PT Link Rinse Station, nr kat. PT109)
wypełnionym rozcieńczonym buforem EnVision FLEX Wash Buffer (10x), (Link) (nr kat. K8002) o temperaturze
pokojowej. Zostawić szkiełka w buforze Wash Buffer na 1-5 minut.
Skrawki zatapiane w parafinie: W celu odmiennego przygotowania próbek zarówno odparafinowanie, jak i
odmaskowanie można wykonać w aparacie PT Link z zastosowaniem zmienionej procedury. Informacje można
znaleźć w Instrukcji użytkownika aparatu PT Link. Po zakończeniu wykonywania odczynu skrawki tkankowe należy
poddać odwodnieniu, oczyszczeniu i nakryć za pomocą środka do trwałego zatapiania.
W trakcie przygotowywania oraz podczas procedury znakowania immunohistochemicznego skrawki nie powinny
wyschnąć. W celu uzyskania lepszego przylegania skrawków do szkiełek podstawowych zaleca się stosowanie
szkiełek Dako Silanized Slides (nr kat. S3003).
Procedura barwienia
oraz materiały
wymagane, ale
niedostarczane
Zalecanym system wizualizacji jest EnVision FLEX+, Mouse, High pH, (Link) (nr kat. K8002). W systemie
Autostainer Link wstępnie zaprogramowano etapy odczynu i czasy inkubacji. Szczegółowe informacje dotyczące
wkładania szkiełek mikroskopowych i odczynników przedstawiono w Instrukcji użytkownika aparatu Autostainer Link.
Jeśli protokoły nie są dostępne w używanym systemie Autostainer, należy skontaktować się z działem wsparcia
technicznego firmy Dako. Wszystkie procedury inkubacji należy również przeprowadzać w temperaturze pokojowej.
Optymalne warunki mogą się zmieniać w zależności od rodzaju materiału i sposobów jego przygotowania i powinny
być określone indywidualnie w każdym laboratorium. Aby możliwe było wykonanie oceny przez patologów z różnym
nasileniem odczynu preparatów, należy skontaktować się z działem obsługi/obsługą techniczną firmy Dako w celu
uzyskania informacji dotyczącej zmiany programowania protokołu. Należy upewnić się, że działanie
zmodyfikowanego protokołu jest prawidłowe – w tym celu należy ocenić, czy odczyn jest taki jak opisany w części
„Charakterystyka wydajnościowa”.
Zalecane jest barwienie kontrastowe hematoksyliną przy użyciu EnVision FLEX Hematoxylin, (Link) (nr kat.
K8008). Zaleca się stosowanie niewodnego, trwałego środka do zatapiania.
Równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów należy wykonywać dodatnie i ujemne próby
kontrolne z użyciem identycznego protokołu. Dodatnia kontrola tkankowa powinna obejmować migdałki, natomiast
we wszystkich dodatnich preparatach komórki/struktury powinny wskazywać odczyn reakcji taki jak opisany dla tej
tkanki w części „Charakterystyka wydajnościowa”. Zalecana kontrola ujemna to FLEX Negative Control, Mouse
(Link) (nr kat. IR750).
Interpretacja
wybarwienia
Komórki znakowane przez przeciwciała wykazują zarówno odczyn błonowy i cytoplazmatyczny.
Charakterystyka
działania
Tkanki normalne: W migdałkach, izolowane komórki T w strefie rozmnażania wykazują silny odczyn, natomiast
komórki T w strefie T rozmnażania migdałków wykazują odczyn umiarkowany do silnego.
Tkanki patologiczne: W badaniu 75 pacjentów pediatrycznych przeciwciało znakowało 24/58 anaplastycznych
chłoniaków z dużych komórek (2). W innym badaniu odczyn dodatni dla CD2 stwierdzono w 92/36 chłoniaków z
nieokreślonych obwodowych komórek T i 7/8 chłoniaków z prekursorowych komórek T (1).
Piśmiennictwo
1.
Hyjek E, Chadburn A, Liu YF, Cesarman E et al. BCL-6 protein is expressed in precursor T-cell lymphoblastic
lymphoma and in prenatal and postnatal thymus. Blood 2001;97:270-76.
2.
Went P, Agostinelli C, Gallaminni A, Piccaluga PP et al. Marker expression in peripheral T-cell lymphoma:
A proposed clinical-pathological prognostic score. J Clin Oncol 2006;24:2472-79.
3.
D’Amore SEG, Menin A, Bonoldi E, Bevilacqua P et al. Anaplastic large cell lymphomas: A study of 75 pediatric
patients. Pediatr Devl Pathol 2007;10:181-91.
4.
Leong AS-Y, Cooper K and Leong FJW-M. CD2. Manual of diagnostic antibodies for immunohistology. London:
Greenwich Medical Media; 2003. p. 61-62
5.
Moingeon P, Chang HC, Sayre PH, Clayton LK et al. The structural biology of CD2. Immunol Rev 1989;111:111-44.
Objaśnienie symboli
(118101-001)
Numer katalogowy
Temperatura przechowywania
Zużyć przed
Wyrób medyczny do
diagnostyki in vitro
Zawartość wystarcza na <n>
testów
Producent
Sprawdzić w instrukcji
stosowania
Numer serii
IR651/PL/SSM/07.04.08 str. 2/2
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Faks +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17