Monoclonal Mouse

Monoclonal Mouse
Anti-Human
Nucleophosmin
Klon 376
Nr kat. M7305
Przeznaczenie
Do stosowania w diagnostyce in vitro.
Przeciwciało Monoclonal Mouse Anti-Human Nucleophosmin, klon 376, jest przeznaczone do stosowania w
immunohistochemii. Przeciwciało umożliwia zidentyfikowanie natywnej nukleofosminy (NPM) i jej zmutowanego
odpowiednika NPMc+. Nukleofosmina jest zlokalizowana w jądrach komórek prawidłowych w różnych tkankach —
do nieprawidłowej akumulacji nukleofosminy dochodzi w cytoplazmie białaczkowych komórek blastycznych w dużej
podgrupie przypadków ostrej białaczki szpikowej z prawidłowym kariotypem (1-3). Interpretacja kliniczna dodatniego
lub ujemnego odczynu musi być uzupełniona przez ocenę morfologiczną, wykonanie odpowiednich prób kontrolnych
i interpretowana przez doświadczonego patologa w kontekście historii choroby pacjenta i innych badań
diagnostycznych.
Synonimy antygenu
B23, NO38, NPM, numatryna, (1).
Streszczenie
i informacje ogólne
Nukleofosmina (NPM) jest fosfoproteiną należącą do rodziny białek nukleoplazmin (1). NPM jest zlokalizowana
głównie w jądrach komórek wielu tkanek (4). Jednak NPM może być transportowana między jądrem komórkowym i
cytoplazmą — transport oraz odpowiednie rozmieszczenie nukleofosminy w regionach komórki ma duże znaczenie
dla homeostazy komórki (1). W wielu ludzkich nowotworach złośliwych często dochodzi do nadmiernej ekspresji,
mutacji, delecji oraz zmiany rozmieszczenia genu NPM (NPM1). W zależności od poziomu ekspresji i ilości gen NPM
działa jako onkogen lub wywiera działanie supresorowe. Całkowita utrata funkcji NPM prowadzi do aneuploidii i
aktywacji punktów zwrotnych proliferacji komórek (1).
Mutacje w eksonie 12 genu NPM1 są przyczyną generacji zmutowanego odpowiednika NPM — NPMc, który jest
zlokalizowany (nieprawidłowo) w cytoplazmie białaczkowych komórek blastycznych w dużej podgrupie przypadków
pierwotnej ostrej białaczki szpikowej (AML) z prawidłowym kariotypem (1-4). Obecność NPMc wykazano w wielu
liniach z preparatów AML wszystkich podtypów z wyjątkiem M3 (ostra białaczka promielocytowa), M4eo (ostra
białaczka mielomonocytarna z eozynofilią) i M7 (ostra białaczka megakariocytowa) (2, 4). Prawdopodobne jest, że
mutacja i akumulacja genu NPMc (NPMc+) jest głównym czynnikiem prowadzącym do białaczki, ponieważ może
zakłócać prawidłowe działanie NPM. Obecności NPMc nie stwierdzono w żadnym przypadku pierwotnej białaczki
AML z określoną nieprawidłowością genetyczną, w preparatach z wtórnych białaczek AML ani w nowotworach
układu krwiotwórczego i spoza układu krwiotwórczego innych niż AML (2, 4). Obecność NPMc stwierdzono tylko w
pierwotnych białaczkach AML z prawidłowym kariotypem (2, 4, 5).
Zobacz dokument Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych firmy Dako lub następujące
części instrukcji do systemu detekcji IHC: 1) Zasady procedury, 2) Niezbędne materiały niedostarczone z zestawem,
3) Przechowywanie, 4) Przygotowanie preparatu, 5) Wykonanie odczynu, 6) Kontrola jakości, 7) Rozwiązywanie
problemów, 8) Interpretacja wyniku odczynu, 9) Ograniczenia metody.
Dostarczany
odczynnik
Monoklonalne przeciwciała mysie dostarczane w postaci płynnej jako nadsącz hodowli komórkowej (zawierający
płodową surowicę bydlęcą), dializowany wobec roztworu Tris/HCl o stężeniu 0,05 mol/L, pH 7,2 i zawierający azydek
sodu w stężeniu 0,015 mol/L.
Klon: 376. Izotyp: IgG1, lambda.
Immunogen
Rekombinowane białko NPM o pełnej długości.
Swoistość
W testach Western blot lizatów komórek U937, lizatów linii komórkowej AML (2) i lizatów komórek OCI-AML3 (3)
przeciwciało barwi prążek odpowiadający masie 37 kDa, czyli białku NPM.
Środki ostrożności
1. Odczynniki przeznaczone dla przeszkolonych Użytkowników.
2. Opisywany produkt zawiera silnie toksyczny związek — azydek sodu (NaN3), w czystej postaci. Stężenie NaN3
występujące w produkcie nie jest klasyfikowane jako niebezpieczne. Jednak w wyniku reakcji NaN3 z ołowiem lub
miedzią, wchodzącymi w skład instalacji kanalizacyjnych, mogą powstawać silnie wybuchowe azydki metali. Przy
usuwaniu resztek odczynnika używać dużych ilości wody do przepłukiwania, aby uniknąć gromadzenia się
azydków w instalacji kanalizacyjnej.
3. Podobnie jak w przypadku każdego produktu otrzymywanego z materiału biologicznego, należy stosować
odpowiednie procedury postępowania.
4. Należy stosować właściwe wyposażenie ochronne, zabezpieczające przed kontaktem odczynnika ze skórą bądź
oczami.
5. Niewykorzystany odczynnik należy usuwać zgodnie ze stosownymi przepisami lokalnymi i krajowymi.
Przechowywanie
(114828-001)
Przechowywać w temperaturze 2–8°C. Nie stosować po upływie terminu ważności podanego na opakowaniu. Jeżeli
odczynniki są przechowywane w warunkach innych niż podane na ulotce dołączanej do opakowania, Użytkownik
powinien je zweryfikować. Nie ma jednoznacznych oznak świadczących o niestabilności tego produktu. Dlatego
równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów należy wykonywać dodatnie i ujemne próby
kontrolne. W wypadku nieoczekiwanego wyniku odczynu, którego nie można wyjaśnić różnicami w procedurach
laboratoryjnych, gdy podejrzewa się problem z przeciwciałem, należy się skontaktować z działem wsparcia
technicznego firmy Dako.
M7305/PL/JOG/21.02.07 str. 1/3
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Przygotowanie
próbek i materiały
dodatkowe
wymagane, ale
niedostarczane
Skrawki parafinowe:
Przeciwciała mogą być wykorzystane do znakowania utrwalonych formaliną lub B5 (2) skrawków zatapianych w
parafinie.
Wymagane jest poddanie odparafinowanych skrawków tkankowych cieplnemu odmaskowaniu antygenu (HIER).
Optymalne wyniki uzyskuje się w wyniku wstępnej obróbki tkanek, polegającej na odmaskowaniu HIER przy użyciu
roztworu Dako Target Retrieval Solution, pH 9 (nr kat. S2368/S2367).
Odmaskowanie HIER: 15 minut w temperaturze wrzenia. Przed zanurzeniem preparatów należy ogrzać roztwór do
odmaskowania antygenu.
Po obróbce cieplnej należy pozostawić naczynie z buforem i preparatami na 20 minut, aż ostygnie do temperatury
pokojowej. Po zakończeniu procedury HIER delikatnie przepłukać skrawki roztworem buforu lub wodą dejonizowaną.
W trakcie przygotowywania i procedury znakowania immunohistochemicznego skrawki nie powinny wyschnąć. W
celu uzyskania lepszego przylegania skrawków do szkiełek podstawowych zaleca się stosowanie szkiełek Dako
Silanized Slides (nr kat. S3003).
Skrawki mrożakowe i rozmazy komórkowe:
Opisywane przeciwciała nie mogą być stosowane do odczynów na utrwalonych w acetonie skrawkach mrożakowych
lub utrwalonych rozmazach cytologicznych.
Wykonanie odczynu
oraz materiały
wymagane, ale
niedostarczane
Rozcieńczenie: Przeciwciała Monoclonal Mouse Anti-Human Nucleophosmin, nr kat. M7305, mogą być używane w
zakresie rozcieńczeń od 1:50 do 1:100 na poddanych wstępnej obróbce utrwalanych w formalinie skrawkach
zatopionych w parafinie, przy 30-minutowej inkubacji w temperaturze pokojowej. Zaleca się rozcieńczenie
przeciwciał odczynnikiem Dako Antibody Diluent (nr kat. S0809). Podane informacje mają charakter wyłącznie
orientacyjny. Optymalne warunki mogą się zmieniać w zależności od rodzaju materiału i sposobu jego
przygotowania i powinny być określone indywidualnie w każdym laboratorium. Zalecana kontrola ujemna to
odczynnik Dako Negative Control, Mouse IgG1, nr kat. X0931, rozcieńczony do tego samego stężenia mysich IgG,
co przeciwciało pierwotne. O ile nie potwierdzono stabilności rozcieńczonych przeciwciał i kontroli ujemnej w
rzeczywistej procedurze wykonania odczynu, zaleca się rozcieńczenie tych odczynników bezpośrednio przed
użyciem. Równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów należy wykonywać dodatnie i ujemne
próby kontrolne.
Wizualizacja: Zaleca się stosowanie odczynników Dako EnVision™+ System/HRP, Dual Link Rabbit/Mouse (nr kat.
K4061), Dako EnVision™+ System/HRP, Rabbit/Mouse (nr kat. K4065), Dako Real™ EnVision™ Detection Kit,
Peroxidase/DAB+, Rabbit/Mouse (nr kat. K5007*), Dako EnVision™+ System/HRP, Mouse (nr kat. K4004/K4005).
Postępować zgodnie z procedurą dostarczoną z systemami do wizualizacji.
*Niedostępne na terenie Stanów Zjednoczonych
Automatyzacja: Przeciwciała dobrze nadają się do wykonywania odczynów immunohistochemicznych w systemach
zautomatyzowanych, takich jak Dako Autostainer.
Interpretacja odczynu
Komórki znakowane przez przeciwciała wykazują zarówno wzór odczynu jądrowego lub cytoplazmatycznego i
jądrowego.
Charakterystyka
wydajnościowa
Tkanki prawidłowe: Przeciwciało znakuje natywny gen NPM w jądrach komórek jelit, nerek, wątroby, płuc, węzłów
chłonnych, trzustki, gruczołu krokowego, śledziony, grasicy i migdałków. Znakowanie jąder zaobserwowano we
wszystkich komórkach móżdżka, a dodatkowo stwierdzono wybarwienie cytoplazmy dużych neuronów. Rozlany
odczyn cytoplazmatyczny stwierdzono w rozproszonych komórkach mitotycznych i postmitotycznych.
Tkanki nieprawidłowe: Przeciwciało barwiło białka natywne NPM i zmutowane białka NPMc (2, 3) — w rezultacie
uzyskano odczyn jądrowy i cytoplazmatyczny białaczkowych komórek blastycznych w 208/591 preparatów (~35%) z
pierwotnych białaczek AML oraz w 142/230 (~61%) preparatów z pierwotnych białaczek AML z prawidłowym
kariotypem. Natomiast odczyn jądrowy i cytoplazmatyczny w białaczkowych komórkach blastycznych
zaobserwowano tylko w 24/263 przypadków AML z nieprawidłowym kariotypem — w żadnym z tych przypadków nie
stwierdzono nieprawidłowości genetycznych często występujących w pierwotnych białaczkach AML (2). W
podzbiorze chłoniaków z ekspresją kinazy chłoniaka anaplastycznego (ALK) (6, 7) oraz w 4/4 przypadków AML z
ekspresją białka fuzyjnego NPM-MLF1 (8) obserwowano białko NPM zlokalizowane w jądrach i cytoplazmie. Samo
znakowanie jąder stwierdzono w 135/135 preparatów wtórnych białaczek AML oraz w 980/980 preparatów z
nowotworów układu krwiotwórczego i spoza układu krwiotwórczego innych niż AML (2).
(114828-001)
M7305/PL/JOG/21.02.07 str. 2/3
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Piśmiennictwo
1.
Grisendi S, Mecucci C, Falini B, Pandolfi PP. Nucleophosmin and cancer. Nature Rev Cancer 2006;6:493-505.
2.
Falini B, Mecucci C, Tiacci E, Alcaly M, Rosatin R, Pasqualucci L, et al. Cytoplasmic nucleophosmin in acute
myologenous leukemia with a normal karyotype. New Engl J Med 2005;352:254-66.
3.
Falini B, Bolli N, Shan J, Martelli PM, Liso A, Pucciarini A, et al. Both carboxy-terminus NES motif and mutated
tryptophan(s) are crucial for aberrant nuclear export of nucleophosmin leukemic mutants in NPMc+ AML. Blood
2006;107:4514-23.
4.
Falini B, Martelli PM, Bolli N, Bonasso R, Ghia E, Pallotta MT, et al. Immunohistochemistry predicts
nucleophosmin (NPM) mutations in acute myeloid leukemia. Blood 2006;108:1999-2005.
5.
Pasqualucci L, Liso A, Martelli MP, Bolli N, Pacini R, Tabarrinni A, et al. Mutated nucleophosmin detects clonal
multilineage involvement in acute myeloid leukemia: Impact on WHO classification. Blood 2006: Epub. ahead of
print.
6.
Cordell JL, Pulford KAF, Bigerna B, Roncador G, Banham A, Colombo E, Pelicci PG, et al. Detection of normal
and chimeric nucleophosmin in human cells. Blood 1999;93:632-42.
7.
Falini B, Pulford K, Pucciarini A, Carbone A, Wolf-Peeters CD, Cordell J, et al. Lymphomas expressing ALK
fusion protein(s) other than NPM-ALK. Blood 1999:94;3509-15.
8.
Falini B, Bigerna B, Pucciarini A, Tiacci E, Mecucci C, Morris SW, et al. Aberrant subcellular expression of
nucleophosmin and NPM-MLF1 fusion protein in acute myeloid leukaemia carrying t(3;5): A comparison with
NPMc+ AML. Leukemia 2006:20;368-71.
Objaśnienie symboli
(114828-001)
Numer katalogowy
Temperatura przechowywania
Wyrób medyczny do
diagnostyki in vitro
Numer serii
Sprawdzić w instrukcji
stosowania
Zużyć przed
Producent
M7305/PL/JOG/21.02.07 str. 3/3
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17