fluorochrome conjugated single reagent

Monoclonal Mouse Anti-Human CD103, Mucosa Lymphocyte Antigen, Klon Ber-ACT8
Nr kat. F7138
Nr kat. R7188
Przeznaczenie
FITC-skoniugowane
RPE-skoniugowane
Do diagnostyki in vitro.
F7138 i R7188 są przeznaczone do użycia w cytometrii przepływowej. W cytometrii przepływowej, CD103
ekspresjonowane jest na śluzówkowych limfocytach T, zaktywowanych komórkach T CD8+ oraz na komórkach
białaczkowych komórek włosowanych narządu spiralnego. W kilku poważnie złośliwych schorzeniach, np.,
związane z enteropatią białaczki z limfocytów T oraz białaczce komórek włosowatych narządu spiralnego,
komórki ekspresjonują CD103. Przeciwciało odpowiednie jest do immunofenotypowania białaczek i chłoniaków
(1, 2). Interpretacja wyników musi być przeprowadzona przez wykwalifikowany personel w powiązaniu z historią
choroby pacjenta oraz wynikami innych testów diagnostycznych.
Synonimy antygenu
ITGAE, Antygen 1 ludzkich limfocytów śluzówkowych (HML-1), Integryna łańcucha αE (3).
Wstęp
CD103 stanowi podjednostkę integryny αE heterodimerycznej integryny αEβ7 należącej do niewielkiej
podrodziny integryn β7. Przeciwciała przeciwko CD103 immunoprecypitują białko antygenowe zbudowane z
dwóch łańcuchów o masach, odpowiednio, 105 kDa (β7) i 175 kDa (αE) w warunkach nieredukujących. Po
redukcji, łańcuch o masie 175 kDa dysocjuje na dwa fragmenty o wielkości 150 i 25 kDa (4).
Odczynnik dostarczony
Koniugaty anty-CD103, F7138 oraz R7188, otrzymano z oczyszczonego monoklonalnego przeciwciała
mysiego. Koniugaty dostarczano w formie płynnej w buforze zawierającym 1% albuminę surowicy wołowej
(BSA) i 15 mmol/LNaN3, pH 7,2. Każde opakowanie wystarcza na 100 testów (10 µL koniugatu na 106
limfocytów stymulowanych PHA z prawidłowej krwi obwodowej człowieka).
Isotyp: IgG1, kappa. Stężenie koniugatu mg/L: Patrz etykieta na opakowaniu.
Przeciwciało
Nr kat.
Fluorochrom
Kontrola Ujemna
Nr kat.
F7138
FITC (Izomer 1 Izotiocjanianu Fluoresceiny)
X0927
R7188
RPE (R-Fikoerytryna)
X0928
Immunogen
linia komórkowa HTLV-1+ MAPS-16 (1).
Swoistość
Anty-CD103, Ber-ACT8, zostało zaprezentowane na the Fifth International Workshop and Conference on
Human Leucocyte Differentiation Antigens, a badania przeprowadzone przez różne laboratoria potwierdziły jej
reaktywność z antygenem CD103 (4). Przeciwciało reaguje z epitopem zlokalizowanym na łańcuchu
polipeptydowym o masie 150 kDa i wykrywa tą samą cząsteczkę, co przeciwciała monoklonalne HML-1, LF61 i
B-Ly7 (1). W jelicie, przeciwciało znakuje więcej niż 90% limfocytów śródbłonkowych jelita i około 40%
limfocytów T warstwy podśluzowej (3). W innych prawidłowych tkankach reaktywność przeciwciała ogranicza
się do kilku (0.5-5%) spoczynkowych komórek T CD8+ w krwi obwodowej, węzłach chłonnych oraz migdałku i
barwi niektóre porozrzucane małe limfocyty obecne w strefach T oraz follicle mantels. W miazdze czerwonej
śledziony barwi 8-10% komórek (1, 3).
Środki ostrożności
1. Do stosowania przez osoby przygotowane zawodowo.
2. Produkt zawiera azydek sodu (NaN3), odczynnik chemiczny silnie toksyczny w czystej postaci. W stężeniu
obecnym w produkcie, chociaż nie klasyfikowanym jako niebezpieczne, azydek sodu może reagować z
elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, tworząc silnie wybuchowe pochodne lub azydki tych
metali. Przy usuwaniu odpadów przepłukać spływ dużą ilością wody, aby uniknąć tworzenia się azydków.
3. Jak w przypadku każdego materiału biologicznego należy stosować odpowiednie procedury.
Przechowywanie
Procedura barwienia
(114453-001)
Przechowywać bez dostępu światła w temp. 2-8oC. Nie używać po upływie daty ważności wskazanej na
opakowaniu. Jeśli produkt był przechowywany w warunkach innych niż wskazane, użytkownik musi sprawdzić
jakość produktu. Nie ma wyraźnych oznak wskazujących na niestabilność produktu, dlatego równocześnie z
próbkami badanymi powinno się oznaczać wiarygodną kontrolę. Jeżeli uzyskuje się nieoczekiwane wyniki bez
zmiany procedur laboratoryjnych i można podejrzewać, że dzieje się to z winy przeciwciała, należy
skontaktować się z serwisem technicznym.
1.
Pobrać krew żylną do próbówki z antykoagulantem.
2.
Wyodrębnić komórki jednojądrzaste przez wirowanie w medium rozdzielającym. Alternatywnie,
przeprowadzić lizę krwinek czerwonych po etapie 6
3.
Przemyć komórki jednojądrzaste dwukrotnie używając RPMI 1640 lub PBS, pH 7,2-7,4.
4.
Zmieszać w próbówce 100 µL zawiesiny komórkowej z 10 µL anty-CD103 skoniugowanym z fluorochromem.
5
Jako kontrolę ujemną zaleca się użycie niereaktywnego przeciwciała monoklonalnego o tym samym izotypie i
skoniugowanym z tym samym fluorochromem (patrz tabela).
6
Inkubować w ciemności w temp. 4°C przez 30 minut.
F7138/R7188/PL/TJA/01.09.02 p. 1/2
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
7
Przemyć dwukrotnie PBS-em zawierającym 2% BSA. Ponownie zawiesić komórki w każdej z próbówek w
medium odpowiednim dla cytometrii przepływowej np. 0,3 mL 1% paraformaldehydu (utrwalacz) w 0,01 mol/L
PBS, pH 7,4.
8
Wykonać analizę na cytometrze przepływowym.
Zaleca się wykonanie kontroli ujemnej i dodatniej równolegle z przygotowaniem badanych próbek. Należy także
zwrócić uwagę na fakt że, próbki zawierające fluorochromy są nieodporne na światło, dlatego należy je
ochraniać w trakcie całej procedury przygotowania i analizy.
Literatura
1.
Kruschwitz M, Fritzsche G, Schwarting R, Micklem K, Mason DY, Falini B, et al. Ber-ACT8: New
monoclonal antibody to the mucosa lymphocyte antigen. J Clin Pathol 1991;44:636-45.
2.
Schwarting R, Dienemann D, Kruschwitz M, Fritsche G, Stein H. Specificities of monoclonal antibodies B-ly7
and HML-1 are identical. Blood 1990;75:320-1.
3.
Tanaka T. CD Guide. CD103. In: Mason D, André P, Bensussan A, Buckley C, Civin C, Clark E, et al.,
editors. Leucocyte typing VII. White cell differentiation antigens. Proceedings of the 7th International
Workshop and Conference; 2000 Jun 19-23; Harrogate, United Kingdom. New York: Oxford University
Press Inc.; 2002. p. 845-6.
4.
Cepek KL, Wong DA, Brenner MB, Springer TA. AS7/8.4. CD103 (αE) cluster report. In: Schlossman SF,
Boumsell L, Gilks W, Harlan JM, Kishimoto T, Morimoto C, et al., editors. Leucocyte typing V. White cell
differentiation antigens. Proceedings of the 5th International Workshop and Conference; 1993 Nov 3-7;
Boston, USA. Oxford, New York, Tokyo: Oxford University Press; 1995. p. 1666-7.
Legenda
(114453-001)
Numer katalogowy
Temperatura przechowywania
Zużyć przed
Wyrób medyczny do
diagnostyki in vitro
Chronić przed światłem
dziennym
Producent
Sprawdzić w instrukcji
stosowania
Numer serii
F7138/R7188/PL/TJA/01.09.02 p. 2/2
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17