Polyclonal Rabbit Anti-Human Lambda Light Chains Nr kat

Polyclonal Rabbit
Anti-Human
Lambda Light Chains
Nr kat. A 0193
Wydanie z 01.12.02
Przeznaczenie
Do badań diagnostycznych in vitro.
Przeciwciało Polyclonal Rabbit Anti-Human Lambda Light Chains, nr kat. A 0193 jest przeznaczone do badań
immunocytochemicznych. To przeciwciało nadaje się również do badań technikami immunoprecypitacji, w tym
metodą immunofiksacji i immunoblotingu (1).
Podczas badania immunocytochemicznego przeciwciało znakuje komórki plazmatyczne i związane komórki
limfatyczne zawierające lekkie łańcuchy lambda stanowiąc użyteczne narzędzie podczas klasyfikacji pacjentów
z gammopatią monoklonalną (2) i amyloidozą (3,4). Ponadto przeciwciało można stosować do rozróżniania
nowotworowego rozrostu monoklonalnego z czynnościowej hiperplazji komórek B (5-7). Identyfikacja
różnicująca jest wspomagana przez wyniki panelu przeciwciał.
Interpretację wyników powinien przeprowadzić pracownik uprawniony do wykonywania takich badań w oparciu
o historię choroby pacjenta oraz inne testy diagnostyczne.
Wstęp
W skład ludzkich immunoglobulin wchodzą dwa identyczne łańcuchy ciężkie ( o ciężarze cząsteczkowym około
50 000) i dwa identyczne łańcuchy lekkie ( o ciężarze cząsteczkowym około 20 000). Cztery łańcuchy są
związane przy pomocy wiązań kowalencyjnych mostkami dwusiarczkowymi. Łańcuchy lekkie są albo
łańcuchami kappa albo lambda. Pięć immunoglobulin IgA, IgD, IgE, IgG i IgM różni się pod względem
łańcuchów ciężkich, a ponadto IgA i IgM występują również w formach spolimeryzowanych (8).
Na pojedynczych komórkach B występuje ekspresja albo łańcuchów kappa, albo lambda, lecz nigdy dwa typy
jednocześnie. W populacji poliklonalnej stosunek komórek B z kappa do lambda wynosi 2:1, a występowanie
mieszaniny typów komórek noszących lekkie łańcuchy kappa i lambda sugeruje poliklonalność oraz reaktywne i
nienowotworowe komórki B (9). Choroby takie jak szpiczak mnogi i chłoniak linii B charakteryzują się rozrostem
z monoklonalnych komórek nowotworowych plazmatycznych produkujących jedynie jeden typ lekkiego
łańcucha. Stąd wykazanie populacji komórek z ograniczeniem do jednego łańcucha lekkiego kappa lub lambda
jest bardzo cennym narzędziem w diagnozie histopatologicznej takich chorób (4). Pierwotna amyloidoza, AL
(amyloid light-chain, lekki łańcuch amyloidu) również należy do zaburzeń komórek plazmatycznych, w której
wykazanie obecności jednego typu łańcucha kappa lub lambda w złogach amyloidu ma istotne znaczenie
diagnostyczne i odróżnia tę chorobę od amyloidozy AA, w której nie występują złogi lekkich łańcuchów
immunoglobulin (3).
Odczynnik dostarczony
Oczyszczona frakcja immunoglobulin z surowicy odpornościowej królika jest dostarczana w postaci płynnej. W
0,1 mol/L NaCl, 15 mmol/L NaN3.
Stężenie białka: Patrz: informacja podana na etykiecie fiolki. Miano przeciwciała (SRI): 1 600 mg/L (10).
W związku z brakiem międzynarodowego wzorca preparatu lambda, do określenia mina używa się preparatu
poliklonalnego lambda (wyizolowanego z ludzkiej IgG). Zmienność wartości miana w różnych seriach A 0193
wynosi mniej niż 10%. Ten poziom zmienności uzyskuje się przez dopasowanie miana każdej z serii do miana
wzorca preparatyki przeciwciał, utrzymywanego w temp. -80°C.
Immunogen
Łańcuchy lekkie immunoglobuliny poliklonalnej typu lambda wyizolowane z puli surowicy ludzkiej.
Swoistość
Przeciwciało reaguje z wolnymi łańcuchami lambda jak również z nienaruszonymi cząsteczkami immunoglobulin.
Ślady przeciwciał powodujących skażenie zostały usunięte przez absorpcję fazy stałej z białkami osocza ludzkiego.
Testy swoistości; barwienie z barwnikiem Coomassie Brilliant Blue:
Podwójna immunodyfuzja: Nie obserwuje się żadnych reakcji z łańcuchami kappa lub gamma podczas stosowania
15 L przeciwciała z 15 L IgG kappa.
Immunoelektroforeza krzyżowa: Przy zastosowaniu 12,5 L przeciwciała na cm kwadratowy żelu z 2 L ludzkiego
osocza lub 2 L z puli stężonego moczu pacjentów z białkomoczem w kanalikach nerkowych pojawiają się jedynie
złogi związane z łańcuchem lambda.
Może zachodzić reakcja krzyżowa z immunoglobulinami pochodzącymi od innych gatunków. Za pomocą badań
immunocytochemicznych dowiedziono, że przeciwciało reaguje krzyżowo z immunoglobulinami krowy, psa, konia i
świni.
Środki ostrożności
1. Do stosowania przez wyszkolony personel.
2. Produkt zawiera azydek sodu (NaN3), substancję chemiczną silnie toksyczną w czystej postaci. Azydek
sodu, zastosowany w produkcie w stężeniu, które nie jest sklasyfikowane jako niebezpieczne, może reagować
z elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, powodując nagromadzenie silnie wybuchowych
azydków metali. Po usunięciu spłukać dużą ilością wody, aby zapobiec nagromadzeniu się azydku metalu w
kanalizacji.
3. Podobnie jak w przypadku wszelkich materiałów pochodzących ze źródeł biologicznych należy stosować
właściwe procedury postępowania.
4. Ten produkt można wykorzystać w różnych technikach badawczych oraz z różnymi rodzajami próbek i
materiałów; dlatego każde laboratorium powinno dokonać walidacji systemu stosowanego do analiz.
Przechowywanie
Przechowywać w temperaturze 2-8 C. Nie używać po upłynięciu daty ważności podanej na etykiecie fiolki.
Jeśli odczynniki są przechowywane w warunkach innych niż podane powyżej, użytkownik musi zweryfikować te
warunki. Nie ma oczywistych oznak wskazujących na utratę stabilności produktu. Dlatego jednocześnie z
badaniem próbek pacjenta należy wykonywać odpowiednie kontrole. W przypadku uzyskania nieoczekiwanych
(107742-002)
A 0193/PL/PAH/01.12.02 s. 1/3
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17
wyników, których nie można wyjaśnić różnicami w procedurach laboratoryjnych, oraz gdy istnieje podejrzenie,
że przyczyną może być problem z przeciwciałem, należy skontaktować się z Działem Pomocy Technicznej
naszej firmy.
BADANIE IMMUNOCYTOCHEMICZNE
Przygotowanie próbek
Skrawki parafinowe: Przeciwciało można stosować dla znakowania skrawków tkanek utrwalonych w formalinie
lub B5, zatopionych w parafinie (2). Wymagane jest wstępne przygotowanie tkanek za pomocą proteinazy K lub
odzyskiwania epitopu wzbudzanego temperaturą. Optymalne wyniki przy stosowaniu podwyższonej
temperatury podczas odzyskiwania epitopu daje zastosowanie roztworów Dako Target Retrieval Solution, nr
kat. S 1700, Dako Target Retrieval Solution, High pH, nr kat. S 3308, 10 mmol/L buforu cytrynianowego o pH
6,0 lub 10 mmol/L buforu Tris i 1 mmol/L EDTA o pH 9,0. Nie wolno dopuścić do wyschnięcia skrawków tkanki
podczas przygotowania lub następującej po nim procedury barwienia immunocytochemicznego.
Skrawki zamrożone i przygotowanie komórek: Przeciwciało można stosować do znakowania utrwalonych w
acetonie skrawków zamrożonych (6).
Procedura barwienia
Rozcieńczanie: Przeciwciało Polyclonal Rabbit Anti-Human Lambda Light Chains, nr kat. A 0193, można
rozcieńczać w zakresie 1:1000-1:2000 w przypadku jego stosowania na skrawkach parafinowych ludzkich
migdałków utrwalonych w formalinie, stosując podwyższoną temperaturę podczas odzyskiwania epitopu w
10 mmol/L buforze Tris i 1 mmol/L EDTA o pH 9,0 przez 20 minut oraz inkubację w temperaturze pokojowej z
pierwszym przeciwciałem przez 30 minut. Optymalne warunki mogą się zmieniać w zależności od próbki i
metody przygotowania i powinny być określone przez każde z poszczególnych laboratoriów. Zalecaną kontrolą
ujemną jest odczynnik Dako Rabbit Immunoglobulin Fraction (Solid-Phase Absorbed), nr kat. X 0936, rozcieńczony
do takiego samego stężenia białka jak pierwsze przeciwciało. Jeśli nie wyznaczono trwałości odczynnika w
aktualnie stosowanym systemie testowym, zaleca się rozcieńczenie produktu bezpośrednio przed użyciem lub
zastosowanie do tego celu odczynnika Dako Antibody Diluent, nr kat. S 0809.
Wizualizacja: Zaleca się stosowanie zestawu DAKO LSAB™+/HRP, nr kat. K 0679 oraz zestawów DAKO
EnVision™+/HRP, nr kat. K 4008 oraz K 4010. Należy postępować zgodnie z procedurą załączoną do
wybranego zestawu wizualizacji.
Automatyzacja: Przeciwciało jest odpowiednie do barwienia immunocytochemicznego przy wykorzystaniu
platform automatycznych, takich jak Dako Autostainer.
Charakterystyka działania
Komórki znakowane przeciwciałem wykazują barwienie błony komórkowej i(lub) cytoplazmy.
Tkanki normalne: W normalnych tkankach migdałków przeciwciało znakuje komórki plazmatyczne, ośrodków
namnażania i strefy płaszcza dając poliklonalny wzór z wyraźnym rozróżnieniem pomiędzy komórkami
dodatnimi i ujemnymi.
Tkanki patologiczne: W reaktywnych węzłach chłonnych wykazano wyraźny wzór wybarwienia przy użyciu Dako
Anti-Lambda oraz niewyróżniający się wzór uzyskano przy użyciu Dako Anti-Kappa wyraźnie wykazując
poliklonalność komórek B w tym zaburzeniu (6). W przypadku szpiczaka (palsmocytoma) nieprawidłowe
komórki plazmatyczne były jednego typu albo kappa-dodatnie, albo lambda-dodatnie (5). Podczas znakowania
zamrożonych skrawków przy zastosowaniu Dako Anti-Kappa lub Dako Anti-Lambda wszystkie 15 przypadków
chłoniaka guzkowego wykazywało uderzającą przewagę jednego typu łańcucha lekkiego. Z pośród 31
przypadków chłoniaków rozlanych 23 miało większość komórek z jednym typem łańcuchów lekkich, w
większości przypadków podobnych do chłoniaka guzkowego. Wszystkie 16 przypadków chłoniaka rozlanego
olbrzymiokomórkowego również wykazywało znakowanie jednego typu łańcucha lekkiego (6). Z pośród 113
przypadków nieziarniczych chłoniaków złośliwych linii B utrwalonych w formalinie, w tym również niewielkich
próbek biopsji rdzenia o bardzo ograniczonej tkance, w 91(81%) przypadkach wykazano ekspresję jednego
typu łańcucha lekkiego przy swoistości wynoszącej 100% z zastosowaniem Dako Anti-Kappa i Anti-Lambda
(7). W aspiratach szpiku kostnego pochodzacych od 66 pacjentów z gammopatią monoklonalną surowicy
przeciwciało zastosowano do określenia stosunków nieprawidłowych łańcuchów lekkich w 24 przypadkach
gammopatii o nieokreślonym znaczeniu, 23 przypadków szpiczaka mnogiego, 5 przypadków amyloidozy, 9
przypadków makroglobulinemii, 1 przypadku szpiczaka pozaszpikowego, 3 przypadków chorób nerek i 1
przypadku chłoniaka. Występowała korelacja pomiędzy przewagą znakowania łańcucha lekkiego przez
przeciwciało a wyróżnionym w surowicy monoklonalnym łańcuchem lekkim (2). Z pośród 23 przypadków
choroby złogów łańcuchów lekkich (light chain deposite disease, LCDD) Dako Anti-Kappa znakowało próbki z
nerek z jednym typem w 17 przypadkach, natomiast jedynie 5 przypadków było dodatnich przy zastosowaniu
Dako Anti-Lambda (3).
IMMUNOFIKSACJA
Wskazówki sporządzania
roztworu
Przeciwciało: Nierozcieńczone, zwykle wystarcza 80 µL. Próbka: Ludzka surowica 1+3 lub mocz (stężenie
białka około 1g/L). Objętość próbki: 5 µL Próbki osocza nie nadają się, ponieważ pasmo fibrynogenu może
utrudniać interpretację.
Piśmiennictwo
1.
Withold W, Reinauer H. An immunoblotting procedure following agarose gel electrophoresis for detection
of Bence Jones proteinuria compared with immunofixationand quantitative light chain determination. Eur
J Clin Chem Clin Biochem 1995;33:135-8.
2.
Peterson LC, Brown BA, Crosson JT, Mladenovic J. Application of the immunoperoxidase technic to bone
marrow trephine biopsies in the classification of patients with monoclonal gammopathies. Am J Clin
Pathol 1986;85:688-93.
3.
Strom EH, Fogazzi GB, Banfi G, Pozzi C, Mihatsch MJ. Light chain deposition disease of the kidney.
Morphological aspects in 24 patients. Virchows Arch 1994;425:271-80.
4.
Jessup E. Antigen retrieval techniques for the demonstration of immunoglobulin light chains in formalinfixed, paraffin-wax embedded sections. UK NEQAS immunocytochemistry news. Winter 1994/95; Issue
4:12-6.
5.
Taylor CR, Burns J. The demonstration of plasma cells and other immunoglobulin-containing cells in
formalin-fixed, paraffin-embedded tissues using peroxidase-labelled antibody. J Clin Path 1974;27:14-20.
6.
Harris NL, Poppema S, Data RE. Demonstration of immunoglobulin in malignant lymphomas. Use of an
immunoperoxidase technic on frozen sections. Am J Clin Pathol 1982;78:14-21.
(107742-002)
A 0193/PL/PAH/01.12.02 s. 2/3
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17
7.
Marshall-Taylor CE, Cartun RW, Mandich D, DiGuiseppe JA. Immunohistochemical detection of
immunoglobulin light chain expression in B-cell non-Hodgkin lymphomas using formalin-fixed, paraffinembedded tissues and a heat-induced epitope retrieval technique. Appl Immunohistochem Mol Morphol
2002;10:258-62.
8.
Klein J, Hořejši V. Immunology. 2nd ed. Abingdon (UK): Blackwell Science Ltd; 1999. p. 226-7.
9.
Leong ASY, Cooper K, Leong FJWA. Manual of diagnostic antibodies for immunohistology. London:
Oxford University Press; 1999. p. 218.
10.
Becker W. Determination of antisera titres using the single radial immunodiffusion method. Immunochem
1969;6:539-46.
Objaśnienia symboli
(107742-002)
Numer katalogowy
Temperatura przechowywania
Wyrób medyczny do
diagnostyki in vitro
Numer serii
Sprawdzić w instrukcji
stosowania
Zużyć przed
Producent
A 0193/PL/PAH/01.12.02 s. 3/3
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17