Monoclonal Mouse Anti-Human CD5, klon DK23
Transkrypt
Monoclonal Mouse Anti-Human CD5, klon DK23
Monoclonal Mouse Anti-Human CD5, klon DK23 Nr kat. C 7242 APC-Conjugated Nr kat. F 0795 FITC-Conjugated Nr kat. R 0842 RPE-Conjugated Przeznaczenie Do badań diagnostycznych in vitro. Produkty o nr kat. C 7242, F 0795 i R 0842 są przeznaczone do stosowania w cytometrii przepływowej. Uważa się, że przeciwciało anty-CD5 wraz z panelem innych przeciwciał w badaniach cytometrii przepływowej pełni zasadniczą rolę we wstępnej ocenie chronicznych zaburzeń limfoproliferacyjnych. Ponadto przeciwciało antyCD5 może być użyteczne w fenotypowaniu ostrej białaczki (1). Interpretację wyników powinien przeprowadzić wykwalifikowany patolog w oparciu o historię choroby pacjenta oraz inne testy diagnostyczne. Synonimy antygenu T1, Tp67 (2). Wstęp CD5 jest monomerem przezbłonowej glikoproteiny o masie cząsteczkowej 67 000 z dużą domeną cytoplazmatyczną odpowiednią do transdukcji sygnału (3). CD5 pojawia się we wczesnej fazie rozwoju tymocytów (3), przy słabej ekspresji na tymocytach i wysokiej ekspresji na wszystkich dojrzałych limfocytach T (2). Ekspresję CD5 wykazuje większość nowotworów T-komórkowych (76%) i prawie 85% ostrych białaczek limfoblastycznych jest CD5 dodatnich (4). Ponadto ekspresja CD5 występuje na niskim poziomie na małym podzestawie dojrzałych limfocytów B (komórki B1a), co ulega rozszerzeniu podczas życia płodowego i w szeregu zaburzeń autoimmunologicznych oraz w niektórych zaburzenia limfoproliferacyjnych pochodzenia B-komórkowego, zwłaszcza w przewlekłej białaczce limfatycznej (CLL) (2) i białaczce ośrodków rozmnażania (5). Odczynnik dostarczony Koniugaty anty-CD5, C 7242, F 0795 i R 0842 zostały wyprodukowane z oczyszczonego mysiego przeciwciała monoklonalnego. Koniugaty są dostarczane w postaci płynnej w buforze zawierającym 1% albuminę surowicy bydlęcej (BSA) oraz 15 mmol/L NaN3 o pH 7,2. Każda fiolka zawiera 100 testów (10 µL koniugatu przeznaczone jest dla maksymalnie 106 leukocytów z normalnej krwi obwodowej). Izotyp: IgG1, kappa. Stężenie koniugatu mg/L: zob. informacja podana na etykiecie fiolki. Swoistość Przeciwcia ło nr kat. Fluorochrom Kontrola negatywna nr kat. F 0795 FITC (Fluorescein Isothiocyanate Isomer 1) X 0927 R 0842 RPE (R-Phycoerythrin) X 0928 C 7242 APC (Allophycocyanin) X 0968 Swoistość przeciwciała Anti-CD5, DK23, stanowi równoważnik wobec przeciwciał grupy CD5 Leu-1 (5). Wykazano, że przeciwciało Anti-CD5, DK23, w przewlekłych białaczkach i szpiczakach znakuje 4/4 (100%) przypadki przewlekłych białaczek limfatycznych B-komórkowych, 2/2 (100%) przypadki białaczek prolimfocytarnych T-komórkowych, 36/39 (92%) przypadków przewlekłych białaczek limfatycznych Bkomórkowych, 5/6 (83%) przypadków białaczek prolimfocytarnych B-komórkowych, 0/14 (0%) przypadków białaczek kosmatokomórkowych i 0/25 (0%) przypadków szpiczaka (6). Środki ostrożności 1. Do stosowania przez wyszkolony personel. 2. Produkt zawiera azydek sodu (NaN3), substancję chemiczną silnie toksyczną w czystej postaci. Azydek sodu, zastosowany w produkcie w stężeniu, które nie jest sklasyfikowane jako niebezpieczne, może reagować z elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, powodując nagromadzenie silnie wybuchowych azydków metali. Po usunięciu spłukać dużą ilością wody, aby zapobiec nagromadzeniu się azydku metalu w kanalizacji. 3. Podobnie jak w przypadku wszelkich materiałów pochodzących ze źródeł biologicznych należy stosować właściwe procedury postępowania. Przechowywanie Przechowywać w ciemnym miejscu w temp. 2-8 C. Nie używać po upłynięciu daty ważności podanej na etykiecie fiolki. Jeśli odczynniki są przechowywane w warunkach innych niż podane powyżej, użytkownik musi zweryfikować takie warunki. Nie ma oczywistych oznak wskazujących na utratę stabilności produktu. Dlatego jednocześnie z badaniem próbek pacjenta należy wykonywać kontrole dodatnie i ujemne. Jeśli wystąpi nieoczekiwany wzór barwienia, którego nie można wyjaśnić różnicami w procedurach laboratoryjnych i istnieje podejrzenie, że przyczyną może być problem z przeciwciałem, należy niezwłocznie skontaktować się z Działem Pomocy Technicznej naszej firmy. Procedura barwienia 1. Pobrać krew żylną do probówki z antykoagulantem. 2. Wyizolować komórki jednojądrzaste przez odwirowanie na podłożu rozdzielającym. Alternatywnie po wykonaniu czynności opisanych w punkcie 6 zhemolizować krwinki czerwone. (107824-002) C 7242/F 0795/R 0842/PL/OKJ/01.07.02 s. 1/2 Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR Nr 33 21 13 17 3. Dwukrotnie przepłukać komórki jednojądrzaste roztworem RPMI 1640 lub PBS o pH 7,2-7,4. 4. Wymieszać 100 L zawiesiny komórek z 10 L przeciwciała anty- CD5 skoniugowanego z fluorochromem. 5. Jako kontrolę ujemną zastosować niereaktywne przeciwciało monoklonalne tego samego izotopu, skoniugowane z tym samym fluorochromem (patrz: tabela). 6. Inkubować w ciemności w temp. 4 C przez 30 minut. 7. Dwukrotnie przepłukać roztworem PBS zawierającym 2% BSA. Ponownie zawiesić komórki w płynie odpowiednim dla analizy cytometrycznej, np. w 0,3 mL 1% paraformaldehydu (utrwalacz) w 0,01 mol/L PBS o pH 7,4. 8. Analizować na cytometrze przepływowym. Dla zapewnienia kontroli odczynników i przygotowania próbek zalecane jest stosowanie podczas każdego testu odpowiednich próbek kontroli dodatniej i ujemnej. Należy pamiętać, że koniugaty fluorochromu są wrażliwe na działanie światła, dlatego podczas procedury barwienia i do chwili wykonania analizy należy chronić próbki przed działaniem światła. Piśmiennictwo 1. Braylan RC, Orfao A, Borowitz MJ, Davis BH. Optimal number of reagents required to evaluate hematolymphoid neoplasias: results of an international consensus meeting. Cytometry 2001;46:23-7. 2. Lozano F, Simarro M, Calvo J. CD Guide. CD5. In: Kishimoto T, Kikutani H, von dem Borne AEG, Goyert SM, Mason DY, Miyasaka M, et al., editors. Leucocyte typing VI. White cell differentiation antigens. Proceedings of the 6th International Workshop and Conference; 1996 Nov 10-14; Kobe, Japan. New York, London: Garland Publishing Inc.; 1997. p. 1112-3. 3. Lozano F, Calvo J, Roca A, Places L, Simarro M. TC6. CD5 workshop panel report. In: Kishimoto T, Kikutani H, von dem Borne AEG, Goyert SM, Mason DY, Miyasaka M, et al., editors. Leucocyte typing VI. White cell differentiation antigens. Proceedings of the 6th International Workshop and Conference; 1996 Nov 10-14; Kobe, Japan. New York, London: Garland Publishing Inc.; 1997. p. 56-8. 4. Leong AS-Y, Cooper K, Leong FJW-M. Manual of diagnostic antibodies for immunohistology. London: Oxford University Press; 1999. p. 51-2. 5. Stein H, Lennert K, Feller AC, Mason DY. Immunohistological analysis of human lymphoma: correlation of histological and immunological categories. Adv Cancer Res 1984;42:67-147. 6. Erber WN, Mynheer LC, Mason DY. APAAP labelling of blood and bone-marrow samples for phenotyping leukaemia. Lancet 1986;i:761-5. Objaśnienia symboli (107824-002) Numer katalogowy Temperatura przechowywania Zużyć przed Wyrób medyczny do diagnostyki in vitro Chronić przed światłem Producent Sprawdzić w instrukcji stosowania Numer serii C 7242/F 0795/R 0842/PL/OKJ/01.07.02 s. 2/2 Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR Nr 33 21 13 17