Monoclonal Mouse Anti-Human Thyroid Peroxidase Clone

Monoclonal Mouse
Anti-Human
Thyroid Peroxidase
Clone MoAb47
Nr kat. M7257
Wydanie 19.12.02
Przeznaczenie
Do badań diagnostycznych in vitro.
Przeciwciała Monoclonal Mouse Anti-Human Thyroid Peroxidase (TPO), Clone MoAb47, są przeznaczone do stosowania w
immunohistochemii. Przeciwciała te znakują peroksydazę tarczycową (TPO) i mogą być uŜytecznym narzędziem w
róŜnicowaniu łagodnych i złośliwych nowotworów tarczycy (1-3). Wyniki panelu przeciwciał są pomocne w diagnostyce
róŜnicowej. Interpretacja wyników musi zostać przeprowadzona przez wykwalifikowanego patologa z uwzględnieniem
historii choroby pacjenta i wyników innych badań diagnostycznych.
Wprowadzenie
Peroksydaza tarczycowa (TPO) jest białkiem transbłonowym o masie 107 kDa zawierającym hemową grupę prostetyczną i
występuje w postaci dimeru na szczytowej powierzchni komórek pęcherzyków tarczycy (4, 5). TPO jest głównym enzymem
biorącym udział w syntezie hormonów tarczycy, który katalizuje utlenianie jodu i jodowanie reszt tyrozyny oraz sprzęga
jodotyrozynę w trijodotyroninę (T3) i tetrajodotyroninę (T4) (5). Gen TPO zawiera 17 egzonów i zlokalizowany jest na krótkim
ramieniu chromosomu 2 (2).
Złośliwe nowotwory tarczycy wykazują anomalię w genie TPO skutkującą mniejszym powinowactwem przeciwciał antyTPO, MoAb47. ObniŜona immunoreaktywność TPO występuje we wczesnym stadium karcynogenezy pęcherzyków, przed
rozwojem inwazyjności, której towarzyszy przyspieszony wzrost komórek i pojawienie się atypii komórek (2).
Dostarczony
odczynnik
Mysie przeciwciała monoklonalne dostarczane w postaci nadsączu hodowli komórkowej w buforze Tris/HCl o stęŜeniu
0,05 mol/L i pH 7,2 z dodatkiem 15 mmol/L NaN3.
Klon: MoAb47 (6). Izotyp: IgG1, kappa.
StęŜenie mysich IgG: patrz etykieta na fiolce.
Immunogen
Ludzka TPO (hTPO) z mikrosomów tarczycy oczyszczona metodą chromatografii powinowactwa immunologicznego (6).
Swoistość
W testach ELISA i testach inhibicji przeciwciała znakują oczyszczoną hTPO (6).
Epitop rozpoznany przez przeciwciała znaleziono w obrębie nukleotydów 2224–2260 w egzonie 12 genu TPO (2).
Surowica pobrana od pacjentów z chorobą Gravesa-Basedowa i zapaleniem tarczycy typu Hashimoto w rozcieńczeniu 1:20
hamuje wiązanie przeciwciał z hTPO pokrywającą studzienki testu ELISA, co wskazuje na to, Ŝe surowica tych pacjentów
wykazuje pewną reaktywność epitopu z przeciwciałami (6).
Środki ostroŜności
1. Do stosowania przez wyszkolony personel.
2. Opisywany produkt zawiera silnie toksyczny związek — azydek sodu (NaN3), w czystej postaci. Azydek sodu,
zastosowany w produkcie w stęŜeniu, które nie jest sklasyfikowane jako niebezpieczne, moŜe reagować z elementami
kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, powodując nagromadzenie silnie wybuchowych azydków metali. Po usunięciu
spłukać duŜą ilością wody, aby zapobiec nagromadzeniu się azydków metali w kanalizacji.
3. Podobnie jak w przypadku wszelkich materiałów pochodzących ze źródeł biologicznych, naleŜy stosować właściwe
procedury postępowania.
Przechowywanie
Przechowywać w temperaturze 2–8°C. Nie naleŜy uŜywać odczynników po upływie terminu waŜności podanego na fiolce.
JeŜeli odczynniki są przechowywane w warunkach innych niŜ podane, uŜytkownik powinien zweryfikować te warunki. Nie
ma wyraźnych oznak wskazujących na niestabilność produktu. Dlatego jednocześnie z badaniem próbek pochodzących od
pacjenta naleŜy wykonywać kontrole pozytywne i negatywne. W przypadku uzyskania nieoczekiwanego wyniku odczynu,
którego nie moŜna wyjaśnić róŜnicami w procedurach laboratoryjnych, i gdy podejrzewa się problem z przeciwciałem,
naleŜy skontaktować się z naszym działem wsparcia technicznego.
Przygotowlanie
próbek
Skrawki parafinowe: przeciwciała mogą być wykorzystane do znakowania skrawków utrwalonych w formalinie i zatopionych
w parafinie. Wymagane jest poddanie preparatów tkankowych cieplnemu odmaskowaniu antygenu. Optymalne wyniki
uzyskuje się z zastosowaniem roztworu Dako Target Retrieval Solution, High pH, nr kat. S 3308, lub 10 mmol/L buforu Tris
z 1 mmol/L EDTA, pH 9,0. Mniej optymalne wyniki uzyskuje się z zastosowaniem roztworu Dako Target Retrieval Solution,
nr kat. S 1700, lub 10 mmol/L buforu cytrynianowego, pH 6,0. Wstępne traktowanie preparatów tkankowych proteinazą K
okazało się nieskuteczne. W trakcie przygotowywania oraz podczas procedury znakowania immunocytochemicznego
skrawki nie powinny wyschnąć.
Skrawki mroŜakowe i rozmazy komórkowe: przeciwciała mogą być stosowane do znakowania skrawków mroŜakowych (1).
Procedura barwienia
Rozcieńczenie: przeciwciała Monoclonal Mouse Anti-Human Thyroid Peroxidase (TPO), nr kat. M 7257, mogą być
stosowane w rozcieńczeniach od 1:25 do 1:50 na utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawkach ludzkiego
gruczołu tarczycy oraz z zastosowaniem trwającego 20 minut cieplnego odmaskowania antygenu w roztworze Dako Target
Retrieval Solution, High pH, nr kat. S 3308, i inkubacji z przeciwciałami pierwotnymi przez 30 minut w temperaturze
pokojowej. Optymalne warunki mogą się zmieniać w zaleŜności od rodzaju materiału i sposobu jego przygotowania i
powinny być określone indywidualnie w kaŜdym laboratorium. Zalecana kontrola ujemna to odczynnik Dako Mouse IgG1, nr
kat. X 0931, rozcieńczony do takiego samego stęŜenia mysich IgG, co przeciwciało pierwotne. Dopóki nie została ustalona
stabilność rozcieńczonych przeciwciał i kontroli ujemnej w procedurze barwienia, zaleca się rozcieńczenie tych
odczynników bezpośrednio przed uŜyciem lub rozcieńczenie w rozcieńczalniku Dako Antibody Diluent, nr kat. S 0809.
Równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów naleŜy wykonywać dodatnie i ujemne próby kontrolne.
Wizualizacja: zaleca się stosowanie zestawu DAKO LSAB™+/HRP, nr kat. K 0679, oraz zestawów DAKO
EnVision™+/HRP, nr kat. K 4004 i K 4006. W przypadku skrawków mroŜakowych i rozmazów komórkowych dobrą
alternatywą jest zestaw Dako APAAP, nr kat. K 0670, jeśli problemem moŜe być barwienie endogennej peroksydazy.
Postępować zgodnie z procedurą dostarczoną z zestawem do wizualizacji.
Automatyzacja: przeciwciała nadają się do wykonywania odczynów immunocytochemicznych w systemach
zautomatyzowanych, takich jak Dako Autostainer.
(124903-001)
M7257/PL/CE/19.12.02 s.1/2
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Dania | Tel. +45 44 85 95 00 | Faks +45 44 85 95 95 | Nr CVR 33 21 13 17
Charakterystyka
działania
Prawidłowe komórki pęcherzyków tarczycy znakowane przeciwciałami wykazują nieco ziarnisty odczyn cytoplazmatyczny.
W obszarze okołojądrowym większości komórek zaobserwować moŜna wyraźnie wyodrębniony pierścień (1).
Tkanki prawidłowe: przeciwciała znakują komórki pęcherzyków tarczycy. Tkanka łączna, warstwy włókien nerwowych,
naczynia i trzustka wykazują odczyn ujemny z przeciwciałami (2). Dodatkowo nie zaobserwowano znakowania migdałków,
wątroby, okręŜnicy, móŜdŜku, nerek ani gruczołu krokowego.
Tkanki nieprawidłowe: przeciwciała wyznakowały skrawki mroŜakowe cienkoigłowych bioptatów 150 guzków tarczycy.
W 113/125 przypadków łagodnych guzków 80–100% komórek wykazało odczyn dodatni, natomiast we wszystkich
próbkach guzów złośliwych wybarwionych zostało mniej niŜ 80% komórek. Większość raków brodawkowatych wykazało
odczyn całkowicie ujemny (1). W innym badaniu (3) przeciwciała wyznakowały utrwalone w formalinie i zatopione w
parafinie skrawki cienkoigłowych bioptatów 124 pojedynczych, zimnych guzków tarczycy. Próbki uznawano za łagodne,
jeśli co najmniej 80% komórek o wyglądzie typowym dla komórek nabłonkowych wykazało odczyn dodatni, a za złośliwe,
jeśli więcej niŜ 20% tych komórek wykazało odczyn ujemny. W charakterze kontroli uŜyto skrawków tkankowych z guzków
uzyskanych w trakcie kolejnego zabiegu i wyznakowanych przeciwciałami lub wybarwionych hematoksyliną-eozyną. TakŜe
w tym badaniu cienkoigłowe bioptaty z mniej niŜ 80% komórek dodatnich okazały się próbkami nowotworów złośliwych.
Uniwersalny i niezawodny wzorzec z ponad 80% komórek dodatnich stwierdzono we wszystkich 97 przypadkach zmian,
które następnie potwierdzono jako łagodne, z wyjątkiem 1 na 26 gruczolaków pęcherzykowych. W rezultacie czułość tej
metody w diagnozowaniu złośliwości na podstawie optymalnie wykonanego odczynu immunologicznego bioptatów
prawidłowo pobranych metodą cienkoigłową oceniono na 100%, a swoistość — na 99%. Nie zaobserwowano znakowania
komórek raka sutka ani okręŜnicy, a takŜe rakowiaka ani przerzutowego czerniaka.
Piśmiennictwo
1.
De Micco C, Zoro P, Garcia S, Skoog L, Tani EM, Carayon P, et al. Thyroid peroxidase immunodetection as a tool to
assist diagnosis of thyroid nodules on fine-needle aspiration biopsy. Eur J Endocrinol 1994;131:474-9.
2. De Micco C, Kopp F, Vassko V, Grino M. In situ hybridization and immunohistochemistry study of thyroid peroxidase
expression in thyroid tumors. Thyroid 2000;10:109-15.
3. Christensen L, Blichert-Toft M, Brandt M, Lange M, Sneppen SB, Ravnsbæk J, et al. Thyroperoxidase (TPO)
immunostaining of the solitary cold thyroid nodule. Clin Endocrinol 2000;53:161-9.
4. Rapoport B, McLachlan SM. Thyroid autoimmunity. J Clin Invest 2001;108:1253-9.
5. McLachlan SM, Rapoport B. The molecular biology of thyroid peroxidase: cloning, expression and role as autoantigen
in autoimmune thyroid disease. Endocr Rev 1992;13:192-206.
6. Ruf J, Toubert M-E, Czarnocka B, Durand-Gorde J-M, Ferrand M, Carayon P. Relationship between immunological
structure and biochemical properties of human thyroid peroxidase. Endocrinology 1989;125:1211-8.
Objaśnienia symboli
(124903-001)
Numer katalogowy
Ograniczenie temperatury
Wyrób medyczny do diagnostyki
in vitro
Numer partii
Sprawdzić w instrukcji obsługi
ZuŜyć przed
Producent
M7257/PL/CE/19.12.02 s.2/2
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Dania | Tel. +45 44 85 95 00 | Faks +45 44 85 95 95 | Nr CVR 33 21 13 17