Ćwiczenie 9. Transformacja komórek kompetentnych metodą szoku

Zakład Biotechnologii i Inżynierii Genetycznej SUM,
Inżynieria genetyczna 2016/17
Ćwiczenie 9.
http://2012.igem.org
Transformacja komórek kompetentnych metodą szoku termicznego
1. Do probówki z komórkami kompetentnymi Escherichia coli DH5α dodaj:
a. BADANA: 5 µl mieszaniny ligacyjnej (nie „przepłukuj” końcówki pipety zawiesiną
komórek! Tylko wypuść plazmid znajdujący się w tipsie do zawiesiny!).
b. KONTROLA: do zawiesiny komórek dodaj 2 ng czystego plazmidu pUC 19.
2. Pozostaw komórki na lodzie przez 30 minut.
3. Inkubuj komórki w 42°C dokładnie przez 45 sekund!
4. Inkubuj komórki na lodzie przez 2 minuty.
5. Do komórek niezwłocznie dodaj 1 ml pożywki LB bez ampicyliny (o temp. 37°C) i inkubuj
z wytrząsaniem w 37°C przez 1 godzinę.
6. Wysiej komórki na płytkę z podłożem LB (z ampicyliną, X-Gal, IPTG) po 100 i 500 µl zawiesiny
bakterii i inkubuj przez noc.
7. Pobierz pojedyncze kolonie i zaszczep nimi 5 ml podłoża LB z ampicyliną. Inkubuj przez noc
w 37°C z wytrząsaniem (200-250 rpm) – to twój materiał do izolacji plazmidów metodą miniprep, którą wykonasz na kolejnych ćwiczeniach.
Literatura:
 Bednarek I. (red.) Inżynieria genetyczna i terapia genowa. Zagadnienia podstawowe i aspekty praktyczne.
Wydawnictwo SUM, Katowice 2008. Rozdział II.
 Turner P.C. (red.): „Biologia molekularna. Krótkie wykłady”. PWN, Warszawa 2004. Sekcja G4 i L1.