Barwienie met. Ziehl-Neelsena na „zimno”

Barwienie met. Ziehl-Neelsena na „zimno”
Zastosowanie:
Wiele komórek bakteryjnych można łatwo zabarwić za pomocą met. Grama. Do wyjątków należą
prątki oraz gatunki Nocardia, które tą metodą pozostają niezabarwione, lub wykazują zmienną reakcję.
Wiąże się to z zawartością w ich ścianach komórkowych dużej zawartości lipidów. Aby zabarwić te
komórki zaczęto używać większego stężenia barwnika, fenolu jako zaprawy, oraz ogrzewania.
W 1915 r Kinyoun opracował metodę barwienia tych bakterii „na zimno”, stosując jeszcze większe
stężenie fuksyny jako barwnika podstawowego co pozwoliło wyeliminować etap ogrzewania.
Sposób użycia:
1. Utrwalić preparat termicznie (przez 3-krotne przeciągnięcie szkiełka nad płomieniem palnika,
o
lub w suszerce o temp 80 C, przez co najmniej 15 minut.);
2. Na utrwalony rozmaz nanieść kilka kropli fuksyny karbolowej i pozostawić na 5 minut;
3. Spłukać preparat wodą destylowaną;
4. Odbarwiać przez 1-2 minuty roztworem zakwaszonego alkoholu, co kilkanaście sekund
zmieniając go na świeży do momentu, aż odbarwiacz spływający ze szkiełka nie będzie
zabarwiony na czerwono.
5. Spłukać preparat wodą destylowaną
6. Pokryć preparat roztworem błękitu metylenowego i pozostawić na 4 minuty.
7. Spłukać preparat wodą i pozostawić do wyschnięcia na powietrzu.
Wyniki: Bakterie kwasoodporne - czerwone
Pozostałe bakterie – niebieskie
KOLCHEM 93-259 Łódź, ul. Gersona 5A. Tel. 42 207 78 50, 695 238 149