Monoclonal Mouse Anti-Human E-cadherin Clone NCH-38

Monoclonal Mouse
Anti-Human
E-cadherin
Clone NCH-38
Nr kat. M3612
Cel uŜycia
Tylko do diagnostyki In vitro.
Mysie, monoklonalne Anti-Human E-cadherin, clone NCH-38 (Anti E-cadherin, NCH-38) słuŜy do jakościowej identyfikacji metodą
immunohistochemiczną w mikroskopie świetlnym, ekspresji E-kadheryny na komórkach, zarówno w tkankach prawidłowych jak i
patologicznych. Interpretację kliniczną kaŜdego wybarwienia dodatniego lub jego braku naleŜy uzupełnić badaniami morfologicznymi i
histologicznymi z uŜyciem stosownych kontroli. Interpretację powinien przeprowadzić wykwalifikowany patolog, w oparciu o historię kliniczną
pacjenta oraz inne testy diagnostyczne.
Synonimy
E-CD, uvomorulin, L-CAM, Arc-1, lub cell-CAM 120/1801-3
Krótki opis produktu
E- kadheryna jest transbłonową cząsteczką adhezyjna o masie 120 kD. Gen dla niej zlokalizowany jest na chromosomie 16q22.1. Funkcją
domeny zewnątrzkomórkowej E-kadheryny jest udział w procesie adhezji komórki do komórki, co jest efektem homofilicznych reakcji
regulowanych stęŜeniem wapnia. Wewnątrzkomórkowa domena E-kadheryny łączy się poprzez kateniny z aktyną cytoszkieletu. Ekadheryna pełni bardzo waŜną funkcję w przyleganiu międzykomórkami pochodzenia nabłonkowego, ustaleniu polaryzacji nabłonków,
formowaniu gruczołów oraz układaniu warstw komórek. Zlokalizowana jest głównie w złączach międzykomórkowych i zagęszczeniach
plazminogenu urokinazowego oraz receptora dla nabłonkowego czynnika wzrostu w miejscach styku komórek.5,6 Mechanizm downregulation E-kadheryny obserwowano w wielu nowotworach złośliwych i zwykle dotyczyło to przypadków o znacznym stopniu
zaawansowania klinicznego oraz wiązało się z postępem choroby.5-8
Zobacz dokument „Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych” firmy Dako lub następujące części instrukcji do
systemu detekcji IHC: 1) Zasady procedury, 2) Niezbędne materiały niedostarczone z zestawem, 3) Przechowywanie, 4) Przygotowanie
preparatu, 5) Wykonanie odczynu, 6) Kontrola jakości, 7) Rozwiązywanie problemów, 8) Interpretacja wyniku odczynu, 9) Ograniczenia
metody.
Odczynniki dostarczone
Mysie przeciwciała monoklonalne są dostarczane w postaci nadsączu hodowli tkankowej w buforze Tris-HCl o stęŜeniu 0,05 mol/l i pH 7,2,
zawierającym azydek sodu o stęŜeniu 0,015 mol/l. Produkt zawiera białko stabilizujące.
Klon: NCH-384
Podklasa: IgG1, kappa
StęŜenie mysiego IgG mg/L: Patrz ulotka na fiolce.
W przypadku metody wizualizacji LSAB2, HRP, Liquid DAB detection system stosowanej do diagnostyki immunohistochemicznej zaleca się
rozcieńczenie M3612 w stosunku od 1:50 do 1:100. Informacje te są jedynie wytycznymi, gdyŜ optymalne stęŜenie przeciwciał powinno
zostać ustalone doświadczalnie w kaŜdym laboratorium uŜywającym danego produktu.
Antygen
E-kadheryna (uvomorulina) i rekombinowane białko GST4
Charakterystyka
Badając lizaty linii komórkowej A431 z zastosowaniem techniki Western blot wykazano ekspresję przeciwciała anti-E-cadherin, NCH-38 na
prąŜku o masie 120 kD, bedącym odpowiednikiem dojrzałej formy tej cząsteczki oraz na prąŜku o masi 82 kD , będącym odpowiednikiem
fragmentu E-kadheryny.4
Materiały wymagane, lecz niedostarczone w zestawie
Zobacz „Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych” firmy Dako i/lub instrukcje do systemu detekcji. Zaleca się
Antibody Diluent (nr kat. S0809) jako rozcieńczalnik dla metod barwienia immunohistochemicznego. Zaleca się Mouse IgG1 (nr kat. X0931)
jako kontrola negatywna dla metod barwienia immunohistochemicznych.
Środki ostroŜności
1. Odczynniki są przeznaczone dla przeszkolonych UŜytkowników.
2. Opisywany produkt zawiera silnie toksyczny związek — azydek sodu (NaN3), w czystej postaci. StęŜenie NaN3 występujące w
produkcie nie jest klasyfikowane jako niebezpieczne. Jednak w wyniku reakcji NaN3 z ołowiem lub miedzią, wchodzącymi w skład
instalacji kanalizacyjnych, mogą powstawać silnie wybuchowe azydki metali. Przy usuwaniu resztek odczynnika uŜywać duŜych ilości
wody do przepłukiwania, aby uniknąć gromadzenia się azydków w instalacji kanalizacyjnej.9
3. Podobnie jak w przypadku kaŜdego produktu otrzymywanego z materiału biologicznego, naleŜy stosować odpowiednie procedury
postępowania.
4. NaleŜy stosować właściwe wyposaŜenie ochronne, zabezpieczające przed kontaktem odczynnika ze skórą bądź oczami.
5. Niewykorzystane odczynniki naleŜy usuwać zgodnie ze stosownymi przepisami lokalnymi i ogólnokrajowymi.
(113220-001)
303718PL_001 s. 1/4
Przechowywanie
Przechowywać w temperaturze 2–8 °C. Nie nale Ŝy uŜywać odczynników po upływie terminu waŜności podanego na fiolce. JeŜeli odczynniki
są przechowywane w warunkach innych niŜ podane na ulotce dołączanej do opakowania, UŜytkownik powinien je zweryfikować. Nie ma
jednoznacznych oznak świadczących o niestabilności tego produktu. Dlatego równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od
pacjentów naleŜy wykonywać dodatnie i ujemne próby kontrolne. W wypadku nieoczekiwanego wyniku odczynu, którego nie moŜna wyjaśnić
róŜnicami w procedurach laboratoryjnych, gdy podejrzewa się problem z przeciwciałem, naleŜy się skontaktować z działem wsparcia
technicznego firmy Dako.
Przygotowanie próbek
Skrawki tkankowe
Przeciwciało anti-E-cadherin, NCH-38 moŜna stosować na skrawkach tkankowych utrwalonych w formalinie, a później zatopionych w
parafinie. Przed procedurą barwienia immunohistochemicznego naleŜy odparafinować skrawki tkankowe, a następnie poddać procesowi
odkrywania epitopów. Odsłanianie epitopów pod wpływem ciepła obejmuje zanurzenie skrawków tkankowych we wcześniej podgrzanym
roztworze buforowym oraz utrzymanie temperatury zarówno w łaźni wodnej (95–99 °C) jak i szybkowarze (95–99 °C) c zy teŜ w autoklawie
(121 °C). Dla lepszego przylegania skrawków do szki ełka podstawnego zaleca się stosowanie szkiełek silanizowanych Silanized Slides (nr
kat. S3003). W przypadku odkrywania epitopów przez 20-minutowe podgrzewanie, zaleca się Target Retrieval Solution (nr kat. S1700) lub
10x Concentrate (nr kat. S1699).
MroŜona skrawki tkankowe i rozmazy komórkowe
Przeciwciało anti-E-cadherin moŜna stosować na mroŜonych skrawkach utrwalanych w acetonie oraz w rozmazach komórek, które
następnie utrwalono. Nie wymaga się odsłaniania epitopów ani antygenów.
Sposób barwienia
Stosować się do instrukcji zawartych w opisach wybranych metod barwienia.
Interpretacja barwienia
Ekspresję przeciwciała anti-E-cadherin, NCH-38 obserwuje się w błonie i/lub cytoplazmie komórkowe.
Charakterystyka występowania
Tkanki prawidłowe
Wykazano metodami immunohistochemicznymi ekspresję E-kadheryny w 40/40 przypadkach prawidłowego nabłonka dróg moczowych,
zarówno w skrawkach mroŜonych i parafinowych. 8 Zaobserwowano silną ekspresję E-kadheryny w prawidłowym, ludzkim gruczole
piersiowym na granicach między komórkami wyścielającymi światło przewodów międzyzrazikowych i międzyzrazikowych końcowych oraz
przewodzików, natomiast słabszą ekspresję obserwowano w komórkach mioepitelialnych przewodów i przewodzików, zarówno w skrawkach
mroŜonych i parafinowych.10 Wykazano silną ekspresję tego przeciwciała w komórkach nabłonka płaskiego przełyku (15/15 przypadków) na
granicy komórka-komórka jednak nie dotyczyło to większości komórek warstwy powierzchownej rogowaciejącej. Wykazano ekspresję Ekadherynę w prawidłowej błonie śluzowej Ŝołądka na granicy komórka-komórka w nabłonku wyścielającym dołeczki, krypty oraz głębokie
gruczoły Ŝołądka, zarówno w skrawkach mroŜonych i parafinowych. 1, 2 Silną ekspresję tego przeciwciała obserwowano w prawie wszystkich
gruczołach prawidłowego endometrium w skrawkach mroŜonych.11 Ekspresję E-kadheryny obserwowano w prawidłowej skórze, na bocznej i
górnej powierzchni keratynocytów warstwy podstawnej, w złączach międzykomórkowych, natomiast nie obserwowano jej na powierzchni
podstawnej tych komórek. Obserwowano jednolitą ekspresję E-kadheryny dookoła komórek warstw ponadpodstawnych naskórka, jednak
bez ekspresji w powierzchownej warstwie rogowej. Ekspresję E-kadheryny obserwowano w strukturach przydatkowych skóry, w tym w
komórkach zapasowych pęcherzyków w gruczołach łojowych oraz potowych skóry a przede wszystkim w warstwie zewnętrznej komórek
pochewki korzenia włosa przy braku ekspresji w warstwie wewnętrznej pochewki korzenia włosa. Brak ekspresji E-kadheryny wykazano w
komórkach tworzących prawidłową skórę właściwą, w skrawkach parafinowych. 5 Silną ekspresję E-kadheryny wykazano takŜe komórkach
nabłonkowych prawidłowej prostaty, zwłaszcza w okolicy połączeń komórka-komórka, w skrawkach mroŜonych.3
Tkanki patologiczne
Ekspresję E-kadheryny obserwowano w wielu róŜnych nieprawidłowych komórkach. 1-3,5-8,10,11 Obserwacje te przedstawiono w Tabela 1.
Table 1. Ekspresja w patologicznych tkankach
Rodzaj tkanki
Ekspresja pozytywna/negatywna.Lokalizacja oraz rodzaj ekspresji
Pęcherz moczowy: Pierwotny rak
13/40 pozytywnych, homogenna (błonowa)
pęcherza moczowego z komórek
13/40 pozytywnych, heterogenna
14/40 negatywnych
przejściowych/urotelialnycha,b
High Grade (grade IIb i III): 10/24 pozytywnych
Low Grade (grade I i IIa): 16/16 pozytywnych
Stopień powierzchowny (Ta i Ti): 21/22 pozytywnych
Stopień naciekający (T2, T3 i T4): 5/18 pozytywnych
Rak gruczołu piersiowego: Brak
136/168 pozytywnych
przerzutów do węzłówb (bez
chemioterapii ani terapii hormonalnej)
Rak przewodowy gruczołu piersiowego 55/87a silnie pozytywnych, większość komórek
a,b
29/87a słabo pozytywnych, heterogenna
14/24b silnie pozytywnych, większość komórek
10/24b słabiej pozytywnych, heterogenna
(113220-001)
303718PL_001 s. 2/4
Rak zrazikowy gruczołu piersiowego a,b
Przełyk: Rak płaskonabłonkowy a
Rak Ŝołądka b
Endometrioza a
3/21a pozytywnych ogniskowo — bardzo rozproszona ekspresja w
błonach wewnątrzkomórkowych lub słaba cytoplazmatyczna
3/14b pozytywne, — bardzo rozproszona ekspresja w błonach
wewnątrzkomórkowych lub słaba cytoplazmatyczna
4/15 pozytywnych
10/15 pozytywnych, heterogenna lub słaba
108/413 pozytywnych, homogenna ekspresja liniowa, podobna do
obserwowanej w prawidłowej śluzówce Ŝołądka
95/413 pozytywnych, ekspresja umiarkowanie ograniczona liniowa
lub punktowa wewnątrzkomórkowa w 20–60% komórek guza
86/413 pozytywnych, silnie ograniczona ekspresja w postaci
drobnych punktów wewnątrzkomórkowo w mniej niŜ 20% komórek
124/413 ujemna lub słaba punktowa immunorektywność <5%
komórek.
Wykazano charakterystyczną ekspresję E-kadheryny dotyczącą
niewielkiego odsetka raków sygnetowatokomórkowych i
niezróŜnicowanych. WyraŜała się ona paternem „plaque-like”,
czasami współistniała z bardzo słabą ekspresją w błonie
komórkowej.
3/9 pozytywnych
6/9 pozytywnych, heterogenna
Skóra: znamiona melanocytarne b
20/20 pozytywnych, błonowa w powierzchownym kompartmencie
znamion lub na granicach pomiędzy gniazdami znamion i
keratynocytach otaczającego nabłonka. Ekspresja w gniazdach
komórkowych znamion ze złącza była bardziej heterogenna niŜ w
części naskórkowej lub bardziej rozproszona. Nie obserwowano
ekspresji w gniazdach melanocytów w brodawkach skórnych.
Skóra: Czerniak złośliwy b
13/70 pozytywnych, błonowa
30/70 pozytywnych, heterogenna
11/70 cytoplazmatyczna
16/70 negatywnych
Ekspresja związana z histologicznym typem czerniaków
1/34 superficial spreading melanoma-positive, błonowa
18/34 superficial spreading melanoma-positive, heterogenna
8/34 superficial spreading melanoma-cytoplazmatyczna
7/34 superficial spreading melanoma-brak
3/8 nodular melanoma-positive, heterogenna
2/8 nodular melanoma-cytoplazmatyczna
3/8 nodular melanoma-brak
4/9 lentigo malignant melanoma-pozytywnych, heterogenna
1/9 lentigo malignant melanoma-cytoplazmatyczna
4/9 lentigo malignant melanoma-brak
1/8 lentiginous melanoma-positive, błonowa
5/8 lentiginous melanoma-positive, heterogenna
2/8 lentiginous melanoma-brak
11/11 metastic melanoma-pozytywnych, błonowa
Rak gruczołu krokowego: Guz pierwotny 44/84 pozytywnych, homogenna
a
27/84 pozytywnych, heterogenna
13/84 brak
Zmiany przerzutowe a
2/8 pozytywnych, homogenna
5/8 pozytywnych, heterogenna
1/8 brak
W większości raków silną i jednolitą ekspresję obserwowano w
granicach międzykomórkowych. Natomiast w większości przypadków
średnio i słabo zróŜnicowanych nowotworów obserwowano
heterogenna ekspresję albo jej brak.
a
Testy przeprowadzono na mroŜonych skrawkach tkankowych
b
Testy przeprowadzono na skrawkach tkankowych utrwalonych w formalina i zatopionych w parafinie.
Piśmiennictwo
11. Shiozaki H, Tahara H, Oka H, Miyata M, Kobayashi K, Tamura S, Iihara K, Doki Y, Hirano S, Takeichi M, Mori T. Expression of
immunoreactive E-cadherin adhesion molecules in human cancers. Am J Pathol 1991;139(1):17-23
12. Gabbert HE, Mueller W, Schneider A, Meier S, Moll R, Birchmeier W, Hommel G. Prognostic value of E-cadherin expression in 413
gastric carcinomas. Int J Cancer 1996;69(3):184-9
13. Umbas R, Schalken JA, Aalders TW, Carter BS, Karthaus HFM, Schaafsma HE, Debruyne FMJ, Isaacs WB. Expression of the cellular
adhesion molecule E-cadherin is reduced or absent in high-grade prostate cancer. Canc Res 1992;52(18):5104-9
14. Antibody Certification 6/8/99. On file at Dako.
15. Silye R, Karayiannakis AJ, Syrigos KN, Poole S, Van Noorden S, Batchelor W, Regele H, Sega W, Boesmueller H, Krausz T, Pignatelli
M. E-cadherin/catenin complex in benign and malignant melanocytic lesions. J Pathol 1998;186(4):350-5
(113220-001)
303718PL_001 s. 3/4
16. Heimann R, Lan F, McBride R, Hellman S. Separating favorable from unfavorable prognostic markers in breast cancer: the role of Ecadherin. Canc Res 2000;60(2):298-304
17. Bracke ME, Van Roy FM, Mareel MM. The E-cadherin/catenin complex in invasion and metastasis. Cur Top Microbiol Immunol
1996;213 (Pt 1):123-61
18. Garcia del Muro X, Torregrosa A, Munoz J, Castellsague X, Condom E, Vigues F, Arance A, Fabra A, Germa JR. Prognostic value of
the expression of E-cadherin and ß-catenin in bladder cancer. Eur J Cancer 2000;36(3):357-62
19. Department of Health, Education and Welfare, National Institute for Occupational Safety and Health, Rockville, MD. “Procedures for the
decontamination of plumbing systems containing copper and/or lead azides.” DHHS (NIOSH) Publ. No. 78-127, Current 13. August 16,
1976
10. Moll R, Mitze M, Frixen UH, Birchmeier W. Differential loss of E-cadherin expression in infiltrating ductal and lobular breast carcinomas.
Am J Pathol 1993;143(6):1731-42
11. Gaetje R, Kotzian S, Herrmann G, Baumann R, Starzinski-Powitz A. Nonmalignant epithelial cells, potentially invasive in human
endometriosis, lack the tumor suppressor molecule E-cadherin. Am J Pathol 1997;150(2):461-7
Edition 06/07
(113220-001)
303718PL_001 s. 4/4