Monoclonal Mouse Anti-Thyroid Transcription Factor, TTF-1

Monoclonal
Mouse Anti-Thyroid
Transcription Factor, TTF-1
1
Clone 8G7G3/1
Nr kat. M3575
Cel uŜycia
Tylko dla diagnostyki in vitro.
Przeciwciało to słuŜy do immunohistochemicznej, jakościowej identyfikacji, w mikroskopie świetlnym tarczycowego czynnika
transkrypcyjnego-1(ang. thyroid transcription factor-1TTF), zarówno w tkankach prawidłowych jak i patologicznych. Ekspresja dodatnia
pomaga klasyfikować guzy płuc oraz tarczycy. W diagnostyce róŜnicowej zalecane jest zastosowania panelu przeciwciał. Interpretację
kliniczną kaŜdego wybarwienia dodatniego lub jego braku naleŜy uzupełnić badaniami morfologicznymi i histologicznymi z uŜyciem
stosownych kontroli. Interpretację powinien przeprowadzić wykwalifikowany patolog, w oparciu o historię kliniczną pacjenta oraz inne testy
diagnostyczne.
Krótki opis produktu
Tarczycowy czynnik transkrypcyjny-1 (ang. thyroid transcription factor-1- TTF-1) naleŜy do rodziny homeodomenowych czynników
transkrypcyjnych i jest wybiórczo wydzielany w tarczycy, płucu oraz międzymózgowiu. TTF-1 przypisuje się rolę regulatora transkrypcji
genów swoistych dla tarczycy oraz zaobserwowano, Ŝe jest on waŜnym aktywatorem róŜnicowania się genów swoistych dla płuc.2,3
Zobacz dokument „Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych” firmy Dako lub następujące części instrukcji do
systemu detekcji IHC: 1) Zasady procedury, 2) Niezbędne materiały niedostarczone z zestawem, 3) Przechowywanie, 4) Przygotowanie
preparatu, 5) Wykonanie odczynu, 6) Kontrola jakości, 7) Rozwiązywanie problemów, 8) Interpretacja wyniku odczynu, 9) Ograniczenia
metody.
Odczynniki dostarczone
Mysie przeciwciała monoklonalne są dostarczane w postaci nadsączu hodowli tkankowej w buforze Tris-HCl o stęŜeniu 0,05 mol/l i pH 7,2,
zawierającym azydek sodu o stęŜeniu 0,015 mol/l. Produkt zawiera białko stabilizujące.
Klon: 8G7G3/11
Podklasa: IgG1, kappa
StęŜenie białka g/L: Patrz ulotka na fiolce.
W przypadku metody LSAB+, HRP (nr kat. K0679) stosowanej do diagnostyki immunohistochemicznej zaleca się rozcieńczenie M3575 w
stosunku 1:200.
W przypadku metody LSAB2, HRP, Liquid DAB (nr kat. K0673) stosowanej do diagnostyki immunohistochemicznej zaleca się rozcieńczenie
M3575 w stosunku 1:50. Informacje te są jedynie wytycznymi, gdyŜ optymalne stęŜenie przeciwciał powinno zostać ustalone doświadczalnie
w kaŜdym laboratorium uŜywającym danego produktu.
StęŜenie białka w poszczególnych partiach moŜe być róŜne, co nie wpływa na optymalne rozcieńczenie. Miana poszczególnych partii są
porównywane i korygowane względem partii referencyjnej w celu zapewnienia powtarzalnej charakterystyki barwienia
immunohistochemicznego we wszystkich partiach.
Antygen
Rekombinowany, szczurzy TTF-11
Charakterystyka
Wykazano reaktywność monoklonalnych przeciwciał skierowanych przeciwko antygenom szczurzym, klon 8G7G3/1 (anty-TTF-1), z
czynnikiem TTF-1 pochodzącym od szczurów, ludzi i myszy. Przy pomocy techniki Western blotting zauwaŜono wyraźną ekspresję anti-TTF1 na prąŜku o masie 40 kD w immunoblotach z jądrowych ekstraktów oraz całych lizatach komórkowych wykazujących pozytywną ekspresje
linii komórórkowych MLE 15 ( mysi nabłonek płucny), H441-4 (ludzki gruczolakorak płuca), H 345 (ludzki rak drobnokomórkowy) i
szczurzych pneumocytach II rzędu. Nie obserwuje się ekspresji w liniach komórkowych nie mających mRNA TTF-1, takich jak HeLa i 3T3.
Przeciwciało anti-TTF-1 jest takŜe przydatne do diagnostyki z wykorzystaniem metody ELISA oraz rekombinowanego TTF-1.1
Materiały wymagane, lecz niedostarczone w zestawie
Zobacz „Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych” firmy Dako i/lub instrukcje do systemu detekcji. Zaleca się
Antibody Diluent (nr kat. S0809) jako rozcieńczalnik dla metod barwienia immunohistochemicznego. Zaleca się Mouse IgG1 (nr kat. X0931)
jako kontrola negatywna dla metod barwienia immunohistochemicznych.
(113218-003)
303355PL_002 s. 1/3
Środki ostroŜności
1. Odczynniki są przeznaczone dla przeszkolonych UŜytkowników.
2. Opisywany produkt zawiera silnie toksyczny związek — azydek sodu (NaN3), w czystej postaci. StęŜenie NaN3 występujące w
produkcie nie jest klasyfikowane jako niebezpieczne. Jednak w wyniku reakcji NaN3 z ołowiem lub miedzią, wchodzącymi w skład
instalacji kanalizacyjnych, mogą powstawać silnie wybuchowe azydki metali. Przy usuwaniu resztek odczynnika uŜywać duŜych ilości
wody do przepłukiwania, aby uniknąć gromadzenia się azydków w instalacji kanalizacyjnej.4
3. Podobnie jak w przypadku kaŜdego produktu otrzymywanego z materiału biologicznego, naleŜy stosować odpowiednie procedury
postępowania.
4. NaleŜy stosować właściwe wyposaŜenie ochronne, zabezpieczające przed kontaktem odczynnika ze skórą bądź oczami.
5. Niewykorzystane odczynniki naleŜy usuwać zgodnie ze stosownymi przepisami lokalnymi i ogólnokrajowymi.
Przechowywanie
Przechowywać w temperaturze 2–8 °C. Nie nale Ŝy uŜywać odczynników po upływie terminu waŜności podanego na fiolce. JeŜeli odczynniki
są przechowywane w warunkach innych niŜ podane na ulotce dołączanej do opakowania, UŜytkownik powinien je zweryfikować.6 Nie ma
jednoznacznych oznak świadczących o niestabilności tego produktu. Dlatego równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od
pacjentów naleŜy wykonywać dodatnie i ujemne próby kontrolne. W wypadku nieoczekiwanego wyniku odczynu, którego nie moŜna wyjaśnić
róŜnicami w procedurach laboratoryjnych, gdy podejrzewa się problem z przeciwciałem, naleŜy się skontaktować z działem wsparcia
technicznego firmy Dako.
Przygotowanie próbek
Skrawki parafinowe
Przeciwciało anti-TTF-1 moŜna stosować na skrawkach tkankowych utrwalonych w formalinie, a później zatopionych w parafinie. Przed
procedurą barwienia immunohistochemicznego naleŜy odparafinować skrawki tkankowe, a następnie poddać procesowi odkrywania
epitopów. Dla lepszego przylegania skrawków do szkiełka podstawnego zaleca się stosowanie szkiełek silanizowanych Silanized Slides (nr
kat. S3003). Zaleca się Target Retrieval Solution (nr kat. S1700) oraz podgrzewanie w kuchence mikrofalowej przez 40 minut, aby odsłonić
epitopy pod wpływem temperatury.
MroŜone skrawki tkankowe oraz rozmazy komórkowe
Przeciwciało anti-TTF-1 moŜna stosować na mroŜonych skrawkach utrwalanych w acetonie oraz w rozmazach komórek, które następnie
utrwalono
Sposób barwienia
Stosować się do instrukcji zawartych w opisach wybranych metod barwienia.
Interpretacja barwienia
Ekspresję przeciwciała anti-TTF-1 obserwuje się w jądrze komórkowym.
Charakterystyczne ograniczenia produktu
1. Zaleca się stosowanie chromogenu DAB z metodami wizualizacji LSAB2, HRP (Liquid DAB) oraz LSAB+, HRP (Liquid DAB+) do
otrzymania najlepszego efektu barwienia.
2. Zaobserwowano ogniskową ekspresje poliklonalnego przeciwciała TTF-1 w 1/66 przypadku gruczolakoraka Ŝołądka oraz 1/8
gruczolakoraka endometrium. 11
Charakterystyka występowania
Tkanki prawidłowe
Ekspresje anti-TTF-1 obserwuje się w pneumocytach typu II i komórkach Clara płuc oraz komórkach pęcherzykowych tarczycy. Nie
zaobserwowano ekspresji TTF-1 w następujących tkankach: przysadka, jądra, nadnercza, skóra, gruczoł sutkowy, nerki, jelito grube,
wątroba, trzustka, jelito cienkie, mózg oraz Ŝołądek.1,7,8
Tkanki patologiczne
Wykazano immunohistochemicznie ekspresję TTF-1 w nowotworowych komórkach pochodzących z nowotworów płuca oraz tarczycy.
Ekspresję anti-TTF-1 obserwowano w większości raków drobnokomórkowych płuca, pierwotnych jak i przerzutowych gruczolakorakach
płuca, podczas gdy nie obserwowano ekspresji w niewielkim odsetku przypadków niezróŜnicowanych raków wielkokomórkowych płuca.1,8
Ekspresje oberwano równieŜ w płaskonabłonkowym raku płuca (14%).9 Ekspresję TTF-1 obserwowano w większości atypowych
rakowiaków, przy czym nie obserwowano jej w typowych. 10 Ekspresję TTF-1 obserwowano takŜe w raku brodawkowatym
tarczycy.1Ekspresji nie obserwowano w większości badanych nowotworów w tym: pierwotne raki gruczołu piersiowego, przerzuty raka piersi
do płuc, raki z komórek nerkowych, pierwotne i przerzutowe gruczolakoraki jelita grubego i gruczołu krokowego oraz złośliwe
międzybłoniaki.1,7,8,11,12Zaobserwowano ogniskową ekspresje poliklonalnego przeciwciała TTF-1 w 1/66 przypadku gruczolakoraka Ŝołądka
oraz 1/8 gruczolakoraka endometrium. 11
Piśmiennictwo
1. Holzinger A, Dingle S, Bejarano PA, Miller M-A, Weaver TE, Di Lauro R, Whitsett JA. Monoclonal antibody to thyroid transcription
factor-1: Production, characterization and usefulness in tumor diagnosis. Hybridoma 1996;15(1):49-53
2. Lazzaro D, Price M, De Felice M, Di Lauro R. The transcription factor TTF-1 is expressed at the onset of thyroid and lung
morphogenesis and in restricted regions of the fetal brain. Development 1991;113(4):1093-104
3. Bohinski RJ, Di Lauro R, Whitsett JA. The lung-specific surfactant protein B gene promoter is a target for thyroid transcription factor-1
and hepatocyte nuclear factor-3, indicating common factors for organ-specific gene expression along the foregut axis. Mol Cell Biol
1994;14(9):5671-81
4. Department of Health, Education and Welfare, National Institute for Occupational Safety and Health, Rockville, MD. “Procedures for the
decontamination of plumbing systems containing copper and/or lead azides.” 1976
5. Center for Disease Control Manual Guide - Safety Management, No. CDC-22, Atlanta, GA. “Decontamination of laboratory sink drains
to remove azide salts.” April 30, 1976
6. Clinical Laboratory Improvement Amendments of 1988: Final Rule, 57CFR7163. February 28, 1992
7. Bohinski RJ, Bejarano PA, Balko G, Warnick RE and Whitsett JA. Determination of lung as the primary site of cerebral metastatic
adenocarcinomas using monoclonal antibody to thyroid transcription factor-1. J Neuro-Oncol 1998;40(3):227-31
(113218-003)
303355PL_002 s. 2/3
8.
Khoor A, Whitsett JA, Stahlman MT, Stephenson M, Olson SJ, Cagle PT. Utility of surfactant protein B precursor and thyroid
transcription factor 1 in differentiating adenocarcinoma of the lung from malignant mesothelioma. Hum Pathol 1999;30(6):695-700
9. Haque AK, Syed S, Lele SM, Freeman DH, Adegboyega PA. Immunohistochemical study of thyroid transcription factor-1 and
HER2/neu in non-small cell lung cancer: strong thyroid transcription factor-1 expression predicts better survival. Appl Immunohistochem
Mol Morph 2002 June;10(2):103-9
10. Folpe AL, Hansen D, Gown AM, Schmidt RA. Expression of thyroid transcription factor-1 (TTF-1) is common in pulmonary atypical
carcinoids and small cell carcinomas, but not typical carcinoids. Lab Invest 1998;78(1):174A
11. Bejarano PA, Baughman RP, Biddinger PW, Miller MA, Fenoglio-Preiser C, Al-Kafaji B, Di Lauro R, Whitsett JA. Surfactant proteins
and thyroid transcription factor-1 in pulmonary and breast carcinomas. Mod Pathol 1996;9(4):445-52
12. Harlamert HA, Mira J, Yassin R, Bejarano PA, Baughman R, Miller MA, Whitsett J. Distinguishing primary lung adenocarcinomas from
metastatic breast adenocarcinomas in cytology specimens using TTF-1 and cytokeratins 7 and 20. Mod Pathol 1997;10(1):A185
Edition 01/09
(113218-003)
303355PL_002 s. 3/3