biotechnologia farmaceutyczna

PODSTAWY BIOTECHNOLOGII PRZEMYSŁOWEJ
BIOTECHNOLOGIA FARMACEUTYCZNA
1. Działanie antybiotyków na wybrane szczepy drobnoustrojów
(test płytkowo – dyfuzyjny)
a) Wykonać posiew wgłębny (1 cm3 zawiesiny E. coli). Dokładnie okrężnymi ruchami
wymieszać zawiesinę z podłożem. Odczekać do zestalenia podłoża.
b) Po ok. 10 min. na powierzchni podłoża umieścić 4 krążki bibułowe nasączone
różnymi antybiotykami. Na denku płytki zaznaczyć rodzaj antybiotyku na
poszczególnych krążkach.
c) Wstawić płytki do termostatu (nie obracać do góry dnem).
d) Po okresie inkubacji odczytać wyniki. Określić wrażliwość drobnoustrojów na
poszczególne antybiotyki poprzez pomiar wielkości strefy zahamowania wzrostu przy
poszczególnych krążkach.
2. Określenie mocy antybiotyku (test otworów w agarze)
a) Wykonać posiew wgłębny (1 cm3 zawiesiny E. coli). Warstwa podłoża na płytce
powinna mieć grubość min. 0,5 cm. Dokładnie okrężnymi ruchami wymieszać
zawiesinę z podłożem. Odczekać do zestalenia podłoża.
b) Po upływie 10 min. wyciąć korkoborem (przestrzegając ściśle warunków
jałowości) 4 otwory o średnicy 5 mm.
c) Otwory napełnić, przy pomocy zakraplacza, poszczególnymi roztworami antybiotyku
o różnym stężeniu. Na denku płytki zaznaczyć stężenie antybiotyku w
poszczególnych otworach.
d) Po okresie inkubacji odczytać wyniki. Określić moc antybiotyku poprzez pomiar
wielkości strefy zahamowania wzrostu drobnoustrojów przy poszczególnych
otworach.
3. Test pasmowy – określenie spektrum działania antybiotyku
a) Sterylny, stalowy cylinderek nałożyć jałowo na środek wylanej i zestalonej na płytce
Petriego pożywki agarowej, lekko docisnąć. Cylinderek napełnić roztworem badanego
antybiotyku. UWAGA !!! Ostrożne poruszać płytką aby nie przesuwać
cylinderka.
b) Za pomocą ezy promieniście do cylinderka szczepić drobnoustroje testowe (od 1 do
3).
c) Na denku płytki podpisać drobnoustroje.
d) Po okresie inkubacji określić, które drobnoustroje nie rozwinęły się, co oznacza, że
antybiotyk wpływa hamująco na ich rozwój.
4. Wpływ fitoncydów na wzrost drobnoustrojów
a) Wykonać posiew wgłębny (1 cm3 zawiesiny E. coli, Bacillus sp. lub
Micrococcaceae). Dokładnie okrężnymi ruchami wymieszać zawiesinę z
podłożem. Odczekać do zestalenia podłoża.
b) Po ok. 10 min. na powierzchni podłoża umieścić 2 krążki bibułowe nasączone
różnymi fitoncydami.
c) Wstawić płytki do termostatu (nie obracać do góry dnem).
d) Po okresie inkubacji odczytać wyniki. Określić wrażliwość drobnoustrojów na
poszczególne fitoncydy poprzez pomiar wielkości strefy zahamowania wzrostu
przy poszczególnych krążkach.
Obserwacje, wyniki i wnioski należy przedstawić w formie sprawozdania