Monoclonal Mouse

FLEX
Monoclonal Mouse
Anti-Human CD56
Klon 123C3
Ready-to-Use
(Dako Autostainer/Autostainer Plus)
Nr kat. IS628
Przeznaczenie
Do stosowania w diagnostyce in vitro.
Przeciwciało FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human CD56, klon 123C3, Ready-to-Use, (Dako Autostainer/Autostainer
Plus), jest przeznaczone do stosowania w immunohistochemii w aparatach Dako Autostainer/Autostainer Plus. Są
one przydatne do identyfikacji komórek NK (natural killer), limfocytów cytotoksycznych T, tkanki nerwowej/
neuroendokrynnej i pokrewnych nowotworów (1). Interpretacja kliniczna dodatniego lub ujemnego odczynu musi być
uzupełniona przez ocenę morfologiczną, wykonanie odpowiednich prób kontrolnych i interpretowana przez
doświadczonego patologa w kontekście historii choroby pacjenta i innych badań diagnostycznych.
Synonimy antygenu
Leu19, cząsteczka adhezyjna komórek nerwowych N-CAM (ang. neural cell adhesion molecule) i NKH1 (2).
Streszczenie
i informacje ogólne
CD56 to glikoproteina błonowa, która posiada wiele izoform generowanych przez alternatywny splicing
z pojedynczego genu znajdującego się na chromosomie 11 (3). Rdzenny polipeptyd jest to izoforma o masie
cząsteczkowej 140 kDa, która może być w różny sposób glikozylowana tworząc dojrzałe cząsteczki. Główną
izoformą występującą w komórkach NK i limfocytach T jest białko zakotwiczone przezbłonowo o masie
cząsteczkowej 140 kDa. W tkankach antygen CD56 znajdowany jest w móżdżku oraz korze mózgu i w miejscach
połączeń nerwowo-mięśniowych. Cząsteczka ta jest identyczna z izoformą cząsteczki NCAM o masie cząsteczkowej
140 kDa (2, 4).
Dodatkowo antygen CD56 występuje również w niektórych białaczkach z dużych ziarnistych limfocytów,
w drobnokomórkowych rakach płuc, nowotworach wywodzących się z tkanki nerwowej, szpiczakach oraz
w białaczkach szpikowych (2).
Zobacz dokument Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych firmy Dako lub następujące
części instrukcji do systemu detekcji IHC: 1) Zasada przeprowadzenia odczynu, 2) Niezbędne materiały
niedostarczone z zestawem, 3) Przechowywanie, 4) Przygotowanie preparatu, 5) Wykonanie barwienia, 6) Kontrola
jakości, 7) Rozwiązywanie problemów, 8) Interpretacja wyniku barwienia, 9) Ograniczenia metody.
Dostarczany
odczynnik
Gotowe do użycia mysie przeciwciała monoklonalne są dostarczane w postaci ciekłej w buforze zawierającym białko
stabilizujące i roztwór NaN3 o stężeniu 0,015 mol/L.
Klon: 123C3 (5). Izotyp: IgG1, kappa.
Immunogen
Preparat z błon komórkowych drobnokomórkowego raka płuc (small cell lung carcinoma, SCLC) (5).
Swoistość
W rozdziale techniką Western blot homogenatów SCLC i niezróżnicowanego mięsaka wrzecionowatokomórkowego,
w środowisku redukującym przeciwciało wchodzi w reakcję z prążkiem 29 kDa. W środowisku nie redukującym
prążek 29 kDa przechodzi w prążek 150 kDa, co sugeruje, że przeciwciało rozpoznaje białko składające się
z co najmniej dwóch podjednostek (5).
Środki ostrożności
1. Odczynniki przeznaczone dla przeszkolonych Użytkowników.
2. Opisywany produkt zawiera silnie toksyczny związek — azydek sodu (NaN3), w czystej postaci. Stężenie NaN3
występujące w produkcie nie jest klasyfikowane jako niebezpieczne. Jednak w wyniku reakcji NaN3 z ołowiem lub
miedzią, wchodzącymi w skład instalacji kanalizacyjnych, mogą powstawać silnie wybuchowe azydki metali.
Przy usuwaniu resztek odczynnika używać dużych ilości wody do przepłukiwania, aby uniknąć gromadzenia się
azydków w instalacji kanalizacyjnej.
3. Podobnie jak w przypadku każdego produktu otrzymywanego z materiału biologicznego, należy stosować
odpowiednie procedury postępowania.
4. Należy stosować właściwe wyposażenie ochronne, zabezpieczające przed kontaktem odczynnika ze skórą
bądź oczami.
5. Niewykorzystany odczynnik należy usuwać zgodnie ze stosownymi przepisami lokalnymi i krajowymi.
Przechowywanie
(116892-001)
Przechowywać w temperaturze 2–8 °C. Nie stosować po upływie terminu ważności podanego na opakowaniu.
Jeżeli odczynniki są przechowywane w warunkach innych niż podane na ulotce dołączanej do opakowania,
użytkownik powinien je zweryfikować. Nie ma jednoznacznych oznak świadczących o niestabilności produktu. Z tego
względu jednocześnie z badaniem próbek pochodzących od pacjentów, należy wykonywać dodatnie i ujemne próby
kontrolne. W wypadku nieoczekiwanego wyniku odczynu, którego nie można wyjaśnić różnicami w procedurach
laboratoryjnych, gdy podejrzewa się problem z przeciwciałem, należy się skontaktować z działem wsparcia
technicznego firmy Dako.
IS628/PL/LPF/09.10.07 s. 1/3
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Przygotowanie
próbek oraz materiały
wymagane, ale
niedostarczane
Przeciwciała mogą być wykorzystane do znakowania utrwalonych formaliną skrawków zatapianych w parafinie.
Preparaty tkankowe należy pociąć na skrawki o wymiarach ok. 4 µm.
Wymagane jest poddanie preparatów tkankowych cieplnemu odmaskowaniu antygenu (HIER). Optymalne wyniki
uzyskuje się po wstępnej obróbce tkanek przy użyciu roztworu EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH
(10x), (Dako Autostainer/Autostainer Plus) (nr kat. K8012/K8014).
Odparafinowane skrawki: Zaleca się wstępną obróbkę utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków
tkankowych przy użyciu Dako PT Link (nr kat. PT100/PT101). Szczegółowe instrukcje zawiera Instrukcja
użytkownika aparatu PT Link.
Postępować według procedury wstępnej obróbki zamieszczonej w ulotce roztworu EnVision FLEX Target Retrieval
Solution, High pH (10x), (Dako Autostainer/Autostainer Plus) (nr kat. K8012/K8014). Dla aparatów PT Link należy
stosować następujące parametry: temperatura wstępnego ogrzewania: 65 °C; temperatura i czas odmaskowania
antygenu: 97 °C przez 20 (±1) minut; ochłodzić do 65 °C. Przepłukać skrawki rozcieńczonym buforem
o temperaturze pokojowej EnVision FLEX Wash Buffer (10x), (Dako Autostainer/Autostainer Plus) (nr kat. K8012).
Skrawki zatapiane w parafinie: W celu odmiennego przygotowania próbek zarówno odparafinowanie, jak
i odmaskowanie można wykonać w aparacie PT Link z zastosowaniem zmienionej procedury. Informacje można
znaleźć w Instrukcji użytkownika aparatu PT Link. Po zakończeniu wykonywania odczynu skrawki tkankowe należy
poddać odwodnieniu, oczyszczeniu i nakryć za pomocą środka do trwałego zatapiania.
W trakcie przygotowywania i procedury znakowania immunohistochemicznego skrawki nie powinny wyschnąć.
W celu uzyskania lepszego przylegania skrawków do szkiełek podstawowych zaleca się stosowanie szkiełek Dako
Silanized Slides (nr kat. S3003).
Wykonanie odczynu
oraz materiały
wymagane, ale
niedostarczane
Zalecanym systemem wizualizacji jest EnVision FLEX+, Mouse, High pH, (Dako Autostainer/Autostainer Plus)
(nr kat. K8012). Oprogramowanie aparatów Dako Autostainer/Autostainer Plus zawiera wstępnie zaprogramowane
etapy odczynu i czas barwienia, które są aktywne podczas korzystania z następujących protokołów:
Protokół wzorcowy: FLEXRTU2 (dawka odczynnika 200 µL) lub FLEXRTU3 (dawka odczynnika 300 µL)
Autoprogram: CD56 (bez barwienia kontrastowego) lub CD56H (z barwieniem kontrastowym)
Dla etapu „Auxiliary” należy ustawić opcję „rinse buffer” w programach barwienia ≤10 szkiełek. Przy programach
z więcej niż 10 szkiełkami, etap „auxiliary” należy ustawić na „none”. Zapewnia to porównywalne czasy płukania.
Wszystkie procedury inkubacji należy również przeprowadzać w temperaturze pokojowej. Szczegółowe informacje
zawiera instrukcja obsługi odpowiedniego aparatu. Jeśli protokoły nie są dostępne w używanym aparacie
Autostainer, należy skontaktować się z działem wsparcia technicznego firmy Dako.
Optymalne warunki mogą się zmieniać w zależności od rodzaju materiału i sposobu jego przygotowania i powinny
być określone indywidualnie w każdym laboratorium. Aby możliwe było wykonanie oceny przez patologów z różnym
nasileniem odczynu preparatów, należy skontaktować się z działem obsługi/obsługą techniczną firmy Dako
w celu uzyskania informacji dotyczącej zmiany programowania protokołu. Należy upewnić się, że działanie
zmodyfikowanego protokołu jest prawidłowe — w tym celu należy ocenić, czy odczyn jest taki jak opisany w części
„Charakterystyka wydajnościowa”.
Zalecane jest barwienie kontrastowe hematoksyliną za pomocą EnVision FLEX Hematoxylin, (Dako
Autostainer/Autostainer Plus) (nr kat. K8018). Zaleca się stosowanie bezwodnego, trwałego środka do zatapiania.
Równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów należy wykonywać dodatnie i ujemne próby
kontrolne z użyciem identycznego protokołu. Dodatnia kontrola tkankowa powinna obejmować okrężnicę i migdałki,
natomiast we wszystkich dodatnich preparatach komórki/struktury powinny wskazywać odczyn reakcji taki jak
opisany dla tej tkanki w części „Charakterystyka wydajnościowa”. Zalecana kontrola ujemna to FLEX Negative
Control, Mouse, (Dako Autostainer/Autostainer Plus) (nr kat. IS750).
Interpretacja odczynu
Komórki znakowane przeciwciałem wykazują odczyn błonowy i/lub cytoplazmatyczny.
Charakterystyka
wydajnościowa
Tkanki prawidłowe: Przeciwciało znakuje rzadkie komórki limfoidalne w prawidłowych i reaktywnych węzłach
chłonnych, błonie śluzowej nosowej/nosowo-gardłowej, migdałkach, grasicy i wyrostku robaczkowym (1).
Przeciwciało znakuje także elementy neuroendokrynne przysadki i nadnerczy, nabłonek pęcherzykowy i komórki
okołopęcherzykowe tarczycy, wyspy Langerhansa, komórki satelitarne i komórki Schwanna włókien
niemielinowanych, komórki Schwanna mielinowanych włókien nerwowych, dające zazwyczaj odczyn w węzłach
Ranviera i szparach Schmidta-Lantermana, komórki główne i okładzinowe żołądka, żyły płucne, błonę mięśniową
właściwą przełyku, mięśniówkę jelita cienkiego i jelita grubego, niektóre komórki przewodów trzustkowych, pętle
Henlego w nerkach, przewody gruczołu krokowego, komórki endokrynne jąder, powierzchnię postawno-boczną
komórek sieci jądra , komórki Leydiga i tkankę graniczną jądra, zręb jajnika, część komórek w płatach gruczołowych
i kanalikach piersi. Niektóre komórki zwojów nerwowych oraz mięśni gładkich oskrzeli i oskrzelików dawały słaby
odczyn, a komórki mięśniowe odczyn o zmiennej intensywności (5). W okrężnicy, komórkach zwojowych i aksonach
splotu Auerbacha zaobserwowano odczyn umiarkowany do silnego. W migdałkach, izolowanych komórkach T
(komórki NK) w obszarach międzygrudkowych wystąpił odczyn słaby do umiarkowanego.
Tkanki nieprawidłowe: Przeciwciało znakowało 32 przypadki chłoniaków CD56+ z limfocytów T/NK, w tym
22 przypadki chłoniaków nosowych/nosowogardłowych i 10 przypadków chłoniaków pozanosowych. Przeciwciało
dało dodatni odczyn w jednym przypadku chłoniaka limfoblastycznego z limfocytów B NKH1+. Nie zaobserwowano
barwienia w 24 przypadkach CD56- chłoniaków z limfocytów T/NK i w 50 przypadkach chłoniaków z limfocytów B (1).
(116892-001)
IS628/PL/LPF/09.10.07 s. 2/3
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Piśmiennictwo
1.
Tsang WY, Chan JKC, Ng CS, Pau MY. Utility of a paraffin section-reactive CD56 antibody (123C3) for
characterization and diagnosis of lymphomas. Am J Surg Pathol 1996; 20:202-10.
2.
Poggi A. CD Guide. CD56. In: Kishimoto T, Kikutani H, von dem Borne AEG, Goyert SM, Mason DY, Miyasaka
M, et al., editors. Leucocyte typing VI. White cell differentiation antigens. Proceedings of the 6th International
Workshop and Conference; 1996 Nov 10-14; Kobe, Japan. New York, London: Garland Publishing Inc.; 1997.
p. 1155–6.
3.
Costa P. NK4. CD56 workshop panel report In: Kishimoto T, Kikutani H, von dem Borne AEG, Goyert SM,
Mason DY, Miyasaka M, et al., editors. Leucocyte typing VI. White cell differentiation antigens. Proceedings of
the 6th International Workshop and Conference; 1996 Nov 10-14; Kobe, Japan. New York, London: Garland
Publishing Inc.; 1997. p. 271–2.
4.
Leong AS-Y, Copper K, Leong FJW-M. Manual of diagnostic antibodies for immunohistology. London: Oxford
University Press; 1999. p. 101-2.
5.
Schol DJ, Mooi WJ, van der Gugten AA, Wagenaar S Sc, Hilgers J. Monoclonal antibody 123C3, identifying
small cell carcinoma phenotype in lung tomours, recognizes mainly, but not exclusively, endocrine and neuronsupporting normal tissues. Int J Cancer 1988;Supplement 2:34-40.
Objaśnienie symboli
(116892-001)
Numer katalogowy
Temperatura przechowywania
Zużyć przed
Wyrób medyczny do
diagnostyki in vitro
Zawartość wystarcza na <n>
testów
Producent
Sprawdzić w instrukcji
stosowania
Numer serii
IS628/PL/LPF/09.10.07 s. 3/3
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17