materiały

Ćwiczenie 12
Analiza mikrobiologiczna wybranych preparatów farmaceutycznych zawierających
probiotyki
Cel ćwiczenia: określenie tempa wzrostu bakterii probiotycznych otrzymanych z różnych
źródeł: preparatów farmaceutycznych i fermentowanych produktów spożywczych.
Materiał: dostępne komercyjnie preparaty farmaceutyczne zawierające szczepy bakterii
probiotycznych oraz produkty spożywcze:
Badane preparaty probiotyczne (nazwa – skład):
1. ………………………………………………………………………………………
2. ………………………………………………………………………………………
3. ………………………………………………………………………………………
Badane produkty spożywcze:
1. ………………………………………………………………………………………
2. ………………………………………………………………………………………
3. ………………………………………………………………………………………
Podłoża:
Podłoże MRS (De Man, Rogosa, Sharpe; 1960 r.):
pepton kazeinowy
10,0 g
ekstrakt mięsny
8,0 g
ekstrakt drożdżowy
4,0 g
glukoza
20,0 g
K2HPO4
2,0 g
tween 80
1,0 g
cytrynian di-amonu
2,0 g
octan sodu
5,0 g
MgSO4
0,2 g
MnSO4
0,04 g
agar
14,0 g
woda
do 1000 ml
Podłoże AOAC (Association of Official Agricultural Chemists), zmodyfikowane:
mleko odtłuszczone w proszku
15,0 g
ekstrakt drożdżowy
5,0 g
glukoza
10,0 g
przefiltrowany sok pomidorowy
200 ml
KH2PO4
2,0 g
tween 80
1,0 g
agar
15,0 g
woda
do 1000 ml
Agar bulionowy z mlekiem i glukozą:
bulion suchy mięsny
13,8 g
glukoza
1g
1
mleko odtłuszczone
agar
woda
2g
15 g
do 1000 ml
Ocena wzrostu bakterii probiotycznych z różnych źródeł:
1. Z badanych preparatów pobrać po 1 kapsułce, przesypać do probówki z 10 ml jałowej soli
fizjologicznej, dokładnie zmieszać i inkubować przez 15-20 minut w temperaturze 37°C.
2. Wykonać posiew mazany na płytkach z zestalonymi podłożami: nanieść po 5 µl każdego
z preparatów. Zaszczepione płytki umieścić w inkubatorze w temperaturze 37°C.
3. Po tygodniowej inkubacji opisać wzrost bakterii (określenie liczby kolonii) z badanych
preparatów. Porównać wzrost szczepów z różnych preparatów, wzrost tych samych
szczepów na płytkach z różnym podłożem oraz wzrost w odniesieniu do hodowli
porównawczych (preparaty spożywcze – kiszone ogórki, kapusta, przetwory mleczne).
Dołączyć rysunki badanych hodowli.
Wyniki:
Tabela. Liczba kolonii wyrosłych na poszczególnych podłożach
Preparaty / produkty fermentowane
MRS
AOAC
agar z mlekiem
i glukozą
Obserwacja mikroskopowa mikroorganizmów probiotycznych:
Wykonać bezpośredni preparat utrwalony i wybarwiony fioletem krystalicznym. Obserwować
pod imersją. Opisać morfologię obserwowanych komórek, wykonać rysunki.
2
Tabela. Obserwacje mikroskopowe preparatów
…………
…………
…………
…………
…………
…………
Wnioski:
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
3