Proteinaza K

Proteinaza K
Zawartość
RP100B RP101B RP102B
Proteinaza K (>30 U/mg)
100 mg
250 mg
1000 mg
RP105B
1 ml
(20 mg/ml)
Dodatkowe informacje
Kontrola jakości
Brak endo-, egzodeoksyrybonukleaz oraz rybonukleaz potwierdzono przy
wykorzystaniu stosownych testów.
Definicja jednostki
Jedna jednostka enzymu uwalnia reszty aminokwasowe i peptydy pozytywne
w teście Folina, odpowiadające absorbancji wykazywanej przez 1 µmol tyrozyny, po
1 min inkubacji w temp. 37°C, gdzie substratem jest zdenaturowana hemoglobina.
Aktywność mierzy się w buforze o składzie: 80 mM bufor fosforanowo-potasowy
(pH 7,5), 5 M mocznik, 4 mM NaCl, 3 mM CaCl2 oraz 16,7 mg/ml hemoglobiny.
Warunki przechowywania
Proteinazę K w postaci zliofilizowanej lub w roztworze (50 mM Tris-HCl,
5 mM CaCl2, 50% glicerol) przechowuje się w temp. -20°C. Enzym przechowywany
w temp. 2 – 8°C w buforze reakcyjnym (50 mM Tris-HCl, 5 mM CaCl2) zachowuje
swoją aktywność do 8 tygodni.
Warunki transportu
Transport w temp. pokojowej.
do badań naukowych
Data zakupu
Gwarancja
12 miesięcy od daty zakupu
DNA-Gdańsk
[email protected] | www.dnagdansk.com
RP101B, RP102B
Proteinaza K
RP101B, RP102B
Proteinaza K
Zmutowana, rekombinowana proteinaza K z Tritirachium album należąca do grupy
proteinaz serynowych, ekspremowana w Pichia pastoris. Endopeptydaza o niskiej
specyficzności substratowej i bardzo wysokiej aktywności właściwej. Proteinaza
K jest najczęściej stosowana do trawienia białek, w tym DNaz i RNaz podczas
izolacji kwasów nukleinowych. Jest aktywna w szerokim zakresie warunków reakcji.
Proteinaza K dostępna jest w formie proszku (liofilizat) oraz w gotowym do użycia
roztworze (20 mg/ml).
Właściwości i zalety
pp
pp
pp
pp
pp
pp
pp
Preparat białkowy o wysokiej czystości
Aktywność specyficzna: >30 U/mg
Wolna od aktywności DNaz i RNaz
Wykazuje stabilność w szerokim zakresie pH = 4 – 12 i temperatury 4 – 65°C;
optimum aktywności przy pH = 7,5-8,0 i w temp. 37°C.
Nie ulega inaktywacji pod wpływem działania związków chelatujących
(np. EDTA), soli chaotropowych, detergentów (np. SDS, mocznik)
lub inhibitorów specyficznych dla trypsyny .
Aktywność enzymu jest stymulowana przez 0,2 – 1% SDS lub 14 M mocznik.
Wykazuje długotrwałą stabilność wynikająca z obecności jonów wapnia
(Ca2+), które zabezpieczają enzym przed autoproteolizą.
Zastosowania
pp Usuwanie DNaz i RNaz podczas izolacji DNA lub RNA
pp Usuwanie zanieczyszczeń białkowych
pp Określanie lokalizacji enzymów
pp Zwiększenie wydajności klonowania produktów PCR
DNA-Gdańsk | [email protected] | www.dnagdansk.com
Stosowanie
Podczas izolacji kwasów nukleinowych Proteinaza K jest zwykle używana
w stężeniu 50 – 200 µg/ml przy pH 7,5 – 8,5 i temp. 37 – 55°C. Czasy inkubacji wahają
się od 30 minut do 18 godzin.
Dodatkowe informacje
pp The Proteinase K cleaves proteins preferably behind hydrophobic amino acids.
The smallest peptide to be hydrolyzed is a tetrapeptide.
pp Working pH range is 4.0 – 12.0 with optimum activity at pH 7.5 – 8.5. Full activity
is maintained over several hours over a pH range of 6.5 – 10.0.
pp Working temperature range is 20 – 65°C with optimum activity at 50 – 56°C.
pp The enzyme is stimulated by addition of denaturing agents 0.2 – 1% SDS or
1 – 4M urea. It exhibits prolonged stability due to the presence of Ca2+ (1 – 6 mM),
which protects enzyme from autolysis and increases its thermal stability.
pp The enzyme is not inactivated by chelating agents (e.g. EDTA), chaotropic salts,
detergents (e.g. 1% SDS, 14 M urea), metal ions, thiol reagents or trypsinspecific inhibitors.
pp Proteinase K is usually denatured by subsequent phenol extractions. It can be
also inactivated by heating above 65°C or using inhibitors such as PMSF or DIFP.
Bufor do przechowywania
pp
pp
50 mM Tris-HCl (pH 8,0), 5 mM CaCl2 do przechowywania w temp. 2 – 8°C
50 mM Tris-HCl (pH 8,0), 5 mM CaCl2, 50% glicerol (v/v) do przechowywania
w temp. -20°C.