spec model-II

Monoclonal Mouse Anti-Human CD90/FITC, Clone 5E10
Monoclonal Mouse Anti-Human CD90/RPE, Clone 5E10
Przeznaczenie
Nr kat. F7274
Nr kat. R7275
Do stosowania w diagnostyce in vitro.
Odczynniki F7274 i R7275 są przeznaczone do stosowania w cytometrii przepływowej. Anti-CD90, 5E10
przeznaczony jest do wykrywania komórek, w których zachodzi ekspresja CD90. W cytometrii przepływowej
Anti-CD90 jest użytecznym narzędziem do analiz podzbiorów komórek macierzystych i do
immunofenotypowania białaczek pochodzenia szpikowego (1, 2). Interpretacji wyniku — z uwzględnieniem
kontekstu klinicznego oraz wyników innych metod diagnostycznych — powinien dokonać wykwalifikowany
patolog.
Synonimy antygenu
Thy-1 (3).
Wprowadzenie
Białko CD90, znane także jako antygen Thy-1, to powierzchniowe białko o masie 25–35 kDa z grupą
glikozylową, związane z fosfatydyloinozytolem (2), należące do rodziny supergenów dla immunoglobulin (4).
Ekspresja białka CD90 występuje w pierwotnych macierzystych komórkach krwiotwórczych prawidłowego
szpiku kostnego, krwi pępowinowej i komórkach wątroby płodu. W prawidłowym szpiku kostnym ekspresja
białka CD90 występuje w 10–40% komórek CD34-dodatnich oraz w małej podpopulacji (< 1%) limfocytów
CD3-dodatnich/CD4-dodatnich w krwi obwodowej (3).
W ostrej białaczce szpikowej (AML) i ostrej białaczce limfoblastycznej (ALL) ekspresja białka CD90 nie zależy
od linii komórkowej ani nie ogranicza się do komórek CD34-dodatnich (5). Ekspresja tego białka może być
jednak uważana za indykator złośliwości, choć sama ekspresja CD90 nie wystarczy do rozróżnienia między
komórkami łagodnymi i złośliwymi (1).
Badania nad przywracaniem funkcji krwiotwórczej po autologicznych przeszczepach komórek macierzystych
krwi obwodowej i po allogenicznych przeszczepach szpiku kostnego u pacjentów cierpiących na rozmaite
złośliwe nowotwory krwi wykazały, że podzbiory komórek macierzystych należących do fenotypu
CD34+/CD90+/Lin- są najliczniej odtwarzaną grupą komórek po przeszczepie (6).
Dostarczany odczynnik
Koniugaty Anti-CD90, F7274 i R7275 wyprodukowane zostały z oczyszczonych mysich przeciwciał
monoklonalnych. Koniugaty dostarczane są w postaci ciekłej w buforze zawierającym 1% albuminy surowicy
wołowej (BSA) oraz 15 mmol/L NaN3, pH 7,2. Każda fiolka zawiera materiał na 100 testów (10 µL koniugatu,
maksymalnie 106 komórek KE-37).
Izotyp: IgG1, kappa. Stężenie koniugatów (mg/L): patrz etykieta na fiolce.
Nr kat.
przeciwciała
Fluorochrom
Nr kat. izotypu
kontrolnego
F7274
FITC (izomer 1 izotiocyjanianu fluoresceiny)
X0927
R7275
RPE (R-fikoerytryna)
X0928
Immunogen
Komórki z linii komórkowej ludzkiej białaczki erytrocytarnej (HEL) (7).
Swoistość
Przeciwciała Anti-CD90, 5E10, opisano podczas warsztatów Fifth and Sixth International Workshops and
Conferences on Human Leucocyte Differentiation Antigens (Piąte i szóste międzynarodowe warsztaty i
konferencja na temat antygenów różnicujących ludzkie leukocyty), a ich reaktywność z CD90 została
potwierdzona przez wiele laboratoriów (3, 4). Przeciwciało reaguje z białkiem CD90 w wielu różnych liniach
komórek chłoniaków i białaczek, w liniach komórkowych HEL, THP-1, DHL4, HUT-78 i Jurkat (3).
Analiza SDS-PAGE immunoprecypitatów wytwarzanych w reakcji między lizatami komórek DHL4 a przeciwciałem
wykazuje, że precypitat jest polipeptydem o masie 25–35 kDa (7).
Środki ostrożności
1. Odczynniki są przeznaczone dla przeszkolonych Użytkowników.
2. Opisywany produkt zawiera silnie toksyczny związek — azydek sodu (NaN3), w czystej postaci. Stężenie
NaN3 występujące w produkcie nie jest klasyfikowane jako niebezpieczne. Jednak w wyniku reakcji NaN 3
z ołowiem lub miedzią, wchodzącymi w skład instalacji kanalizacyjnych, mogą powstawać silnie wybuchowe
azydki metali. Przy usuwaniu resztek odczynnika używać dużych ilości wody do przepłukiwania, aby uniknąć
gromadzenia się azydków w instalacji kanalizacyjnej.
3. Podobnie jak w przypadku każdego produktu otrzymywanego z materiału biologicznego, należy stosować
odpowiednie procedury postępowania.
Przechowywanie
Przechowywać w ciemności, w temperaturze 2–8°C. Nie stosować po upływie terminu ważności podanego na
opakowaniu. Jeżeli odczynniki są przechowywane w warunkach innych niż podane na wkładce informacyjnej do
opakowania, Użytkownik powinien je zweryfikować. Nie ma jednoznacznych oznak świadczących
o niestabilności tego produktu. Dlatego równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów,
należy wykonywać dodatnie i ujemne próby kontrolne. W wypadku nieoczekiwanego wyniku odczynu, którego
nie można wyjaśnić różnicami w procedurach laboratoryjnych, gdy podejrzewa się problem z przeciwciałem,
należy się skontaktować z naszym działem wsparcia technicznego.
Wykonanie odczynu
1.
(111722-002)
Przenieść 100 L krwi z dodatkiem środka przeciwzakrzepowego (EDTA) do probówki polistyrenowej
o wymiarach 12 mm x 75 mm.
F7274/R7275/PL/MTH/29.10.04 s. 1/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
Dodać 10 µL Anti-CD90 sprzężonego z fluorochromem i wymieszać ostrożnie mieszadłem wibracyjnym.
Podana objętość 10 µL jest szacunkowa, laboratorium powinno indywidualnie dobrać optymalną objętość.
Jako kontroli użyć przeciwciała monoklonalnego tego samego izotypu sprzężonego z tym samym
fluorochromem (patrz tabela).
Inkubować w ciemności przez 30 minut w temperaturze 2–8°C lub przez 15–30 minut w temperaturze
pokojowej (20–25°C).
Dodać 100 µL odczynnika A Dako Uti-Lyse™ (nr kat. S3325 lub S3350) do każdej z próbek
i ostrożnie wymieszać mieszadłem wibracyjnym. Inkubować przez 10 minut w temperaturze pokojowej,
w ciemnym pomieszczeniu.
Do każdej z próbek dodać 1 mL odczynnika B Dako Uti-Lyse™ i ostrożnie wymieszać mieszadłem
wibracyjnym. Inkubować przez 10 minut w temperaturze pokojowej, w ciemnym pomieszczeniu. Jeśli w
krokach 5 i 6 używa się innego odczynnika do lizy, należy zastosować się do instrukcji jego użycia.
Odwirować próbkę przy obrotach 300 x g przez 5 minut. Delikatnie odciągnąć supernatant i odrzucić go,
pozostawiając około 50 µL cieczy.
Dodać 2 mL 0,01 mol/L PBS zawierającego 2% albuminy surowicy wołowej i zawiesić komórki przez
mieszanie mieszadłem wibracyjnym.
Powtórzyć krok 7.
Zawiesić osad w odpowiednim płynie do cytometrii przepływowej, np. 0,3 mL PBS. Jeśli próbki nie będą
analizowane tego samego dnia, PBS powinien zawierać 1% paraformaldehydu (utrwalacz).
Poddać analizie w cytometrze przepływowym lub przechowywać do analizy w ciemności i temperaturze
2–8°C. Próbki nadają się do badania przez okres do 24 godzin po wykonaniu lizy.
Zaleca się dołączenie do każdego pomiaru odpowiednich dodatnich i ujemnych próbek kontrolnych w celu
weryfikacji odczynnika i przygotowania próbek. Należy pamiętać, że koniugaty fluorochromowe są wrażliwe na
światło, w związku z czym w trakcie wykonywania odczynu i do czasu wykonania analizy próbki powinny być
chronione przed światłem.
W przypadku niektórych chorób można oczekiwać nieprawidłowej ilości komórek, w których zachodzi ekspresja
antygenów docelowych, lub nieprawidłowego poziomu ekspresji antygenów. Może to wywołać zmianę wzorca
odczynu. Do przeprowadzenia właściwej analizy konieczna jest znajomość prawidłowego wzorca ekspresji
antygenów oraz ich związków z ekspresją innych istotnych antygenów.
Odczynniki wielobarwne umożliwiają bardziej wszechstronną analizę komórek nowotworowych białaczki
i chłoniaków niż badanie jednobarwne.
Piśmiennictwo
1.
Brendel C, Mohr B, Schimmelpfennig C, Müller J, Bornhäuser M, Schmidt M, et al. Detection of
cytogenetic aberrations both in CD90 (Thy-1)-positive and (Thy-1)-negative stem cell (CD34) subfractions
of patients with acute and chronic myeloid leukemias. Leukemia 1999;13:1770-5.
2.
Buccisano F, Rossi MF, Venditti A, Del Poeta G, Cox MC, Abbruzzese E, et al. CD90/Thy-1 is
preferentially expressed on blast cells of high risk acute myeloid leukaemias. Br J Haematol
2004;125:203-12.
3.
Lansdorp PM. CDw90 cluster workshop report. In: Schlossman SF, Boumsell L, Gilks W, Harlan JM,
Kishimoto T, Morimoto C, et al., editors. Leucocyte typing V. White cell differentiation antigens.
Proceedings of the 5th Onternational Workshop and Conference; 1993 Nov 3-7; Boston, USA. Oxford,
New York, Tokyo: Oxford University Press; 1995 Volume 1. p. 967-8.
4.
Clark RA and Springer TA. AS24. CD90 workshop panel report. In: Kishimoto T, Kikutani H, von dem
Borne AEG, Goyert SM, Mason DY, Miyasaka M, et al., editors. Leucocyte typing VI. White cell
differentiation antigens. Proceedings of the 6th International Workshop and Conference; 1996 Nov 10-14;
Kobe, Japan. New York, London: Garland Publishing Inc.; 1997. p. 425-7.
5.
Wuchter C, Ratei R, Spahn G, Schoch C, Harbott J, SchnittgerS, et al. Impact of CD133 (AC133) and
CD90 expression analysis for acute leukemia immunophenotyping. Haematol 2001;86:154-61.
6.
Sumikuma T, Shimazaki C, Inaba T, Ochiai N, Okano A, Hatsuse M, et al. CD34+/CD90+ cells infused
best predict late haematopoietic reconstitution following autologous peripheral blood stem cell
transplantation. Br J Haematol 2002;117:238-44.
7.
Craig W, Kay R, Cutler RL, Lansdorp PM. Expression of Thy-1 on human hematopoietic progenitor cells.
J Exp Med 1993;177:1331-42.
Objaśnienie symboli
Numer katalogowy
W
y
d
i
a
r
g
ó
b
n
m
o
s
e
t
d
y
k
y
i
c
i
n
z
n
v
y
i
t
d
r
Temperatura przechowywania
o
o
Chronić przed słońcem (patrz
s
e
k
c
j
a
n
t
.
p
r
z
e
c
h
o
w
y
w
a
n
i
a
Zużyć przed
Producent
)
Sprawdzić w instrukcji
N
s
(111722-002)
t
o
s
o
w
a
n
i
u
m
e
r
s
e
r
i
i
a
F7274/R7275/PL/MTH/29.10.04 s. 2/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17