Monoclonal Mouse Anti-Human CD45R0, Clone UCHL1

Monoclonal Mouse Anti-Human CD45R0, Clone UCHL1
Nr katalogowy F 0800
Nr katalogowy R 0843
Przeznaczenie
znakowane FITC
znakowane RPE
Do diagnostyki in vitro.
F 0800 i R 0843 są przeznaczone do cytometrii przepływowej. Przeciwciało Anti-CD45R0, UCHL1, znakuje
prawidłowe i nowotworowe komórki (1, 2). Interpretacji wyników może dokonywać wykwalifikowany patolog w
oparciu o wywiad kliniczny i inne testy diagnostyczne.
Wprowadzenie
CD45 jest glikoproteiną transbłonową, ulegającą ekspresji na komórkach jądrzastych pochodzenia
hematopoetycznego. CD45, kodowane przez pojedyńczy gen umiejscowiony na chromosomie 1 występuje w
kilku różnych izoformach, w oparciu o alternatywny splicing eksonów 4, 5 i 6. Na ludzkich leukocytach
zidentyfikowano pięć różnych izoform CD45, nazwanych ABC, AB, BC, B i 0. Przeciwciała CD45RC, CD45RB,
CD45RA i CD45R0 rozpoznają te izoformy. Masa cząsteczkowa izoform waha się od 220 000 w przypadku
ABC do 180 000 w przypadku izoformy 0 (3).
Wszystkie izoformy CD45 mają wspólny segment wewnątrzkomórkowy o udowodnionej aktywności fosfatazy
tyrozynowej. Różne leukocyty wykazują ekspresję charakterystycznej izoformy CD45, a limfocyty T wykazują
ekspresję różnych izoform zależnie od etapu dojrzewania i aktywacji (3).
Większość limfocytów B i linii białaczkowych B wykazuje przede wszystkim ekspresję izoformy CD45RA i nie
wykazuje ekspresji CD45R0, podczas gdy tymocyty i wiele białaczkowych linii T wykazuje ekspresję zarówno
CD45R0 i CD45RA (4).
Obwodowe limfocyty T można podzielić z grubsza na dwie populacje: CD45RA-, CD45R0+ “komórki T pamięci”
i CD45+, CD45R0- “naiwne limfocyty T”. Komórki T pamięci odpowiadają na antygen przypominający i pełnią
funkcję komórek pomocniczych w stosunku do limfocytów B, podczas gdy naiwne limfocyty T słabo
odpowiadają na antygen przypominający i nie pełnią funkcji pomocniczej (4).
Odczynnik dostarczony
Znakowane przeciwciała anty CD45, F 0800 and R 0843, zostały wyprodukowane z oczyszczonych
monoklonalnych przeciwciał mysich. Są one dostarczane w postaci płynnej w buforze zawierającym 1%
albuminy z surowicy wołu (BSA) i 15 mmol/L NaN3, o pH 7,2. Każda fiolka zawiera ilość przeciwciała na 100
oznaczeń (10 L przeciwciała na maksymalnie 106 leukocytów z normalnej ludzkiej krwi obwodowej).
Izotyp: IgG2a, kappa. Stężenie koniugatu mg/L: zobacz etykietka na fiolce.
Przeciwciało,
Fluorochrom
Kontrola negatywna,
nr katalogowy
F 0800
FITC (Fluorescein Isothiocyanate
Isomer 1)
X 0933
R 0843
RPE (R-Phycoerythrin)
X 0950
nr katalogowy
Immunogen
Zależna od IL-2 linia komórkowa T, CA1 (5).
Swoistość
Anti-CD45R0, UCHL1, zostało określone jako przeciwciało przeciwko CD45R0 w czasie czwartego (6) i piątego
(4) International Workshops and Conferences on Human Leucocyte Differentiation Antigens. W metodzie
Western blotting z użyciem lizatów z komórek jednojądrzastych krwi obwodowej ustalono, że przeciwciało
reaguje swoiście z prążkiem o masie 180 kDa, odpowiadającym CD45R0. Jeżeli użyto komórek linii
transfekowanej leucocyte common antigen (LCA), wykazujących ekspresję pojedynczej izoformy CD45, to jest
ABC, AB, BC, B lub 0, przeciwciało reagowało tylko z komórkami wykazującymi ekspresję CD45R0 (7).
Anti-CD45R0, UCHL1, znakuje większość tymocytów, subpopulację spoczynkowych komórek T spośród
subpopulacji CD4 i CD8, i dojrzałe aktywowane komórki T. Przeciwciało znakuje także komórki linii
mieloidalnej, podczas gdy większość komórek B i NK jest ujemna (5). Słabe barwienie cytoplazmatyczne
obserwowano w komórkach centroblastycznych i immunoblastycznych chłoniaków (8).
Anti-CD45R0, UCHL1, rozpoznaje swoiście około 50% ludzkich limfocytów T we krwi obwodowej. Przeciwciało
może być przydatne dla immunologów badających aktywację limfocytów T, ponieważ rozpoznaje odróżniającą
się funkcjonalnie subpopulację komórek T pomocniczo-induktorowych. Niepobudzone limfocyty T, w większości
CD45RA dodatnie i UCHL1-ujemne, tracą antygen CD45RA i stopniowo nabywają CD45R0 w czasie aktywacji
PHA lub alloantygenem. Komórki T CD45R0-dodatnie są prawdopodobnie populacją pobudzonych komórek T,
wśród których są również komórki T pamięci (4, 9).
Środki ostrożności
1. Do stosowania przez osoby przygotowane zawodowo.
2. Produkt zawiera azydek sodowy (NaN3), odczynnik chemiczny silnie toksyczny w czystej postaci. W stężeniu
obecnym w produkcie, chociaż nie klasyfikowanym jako niebezpieczne, azydek sodowy może reagować z
elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, tworząc silnie wybuchowe pochodne lub azydki tych metali.
Przy usuwaniu odpadów przepłukać spływ dużą ilością wody, aby uniknąć tworzenia się azydków.
3. Jak w przypadku każdego materiału biologicznego należy stosować odpowiednie procedury.
(108347-002)
F 0800/R 0843/PL/KIM/01.07.02 str. 1/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17
Przechowywanie
Przechowywać w temp. 2-8oC. Nie używać po upływie daty ważności wskazanej na opakowaniu. Jeśli produkt
był przechowywany w warunkach innych niż wskazane, użytkownik musi sprawdzić jakość produktu. Ponieważ
nie ma wyraźnych oznak wskazujących na zmianę trwałości produktu, zawsze należy badać dodatnią i ujemną
kontrolę równolegle z próbką badaną. Jeżeli pojawia się nieswoiste barwienie bez zmiany procedur
laboratoryjnych i można podejrzewać, że dzieje się to z winy przeciwciała, należy skontaktować się z serwisem
technicznym firmy Dako.
Procedura barwienia
1.
Pobrać krew żylną do probówki z antykoagulantem.
2.
Wyizolować komórki jednojądrzaste przez wirowanie na gradiencie gęstośći lub zlizować erytrocyty po
punkcie 6.
3.
Dwukrotnie przepłukać komórki jednojądrzaste RPMI 1640 lub PBS, o pH 7,2-7,4.
4.
Zmieszać 100 L zawiesiny komórek z 10 L Anti-CD45R0 znakowanego odpowiednim fluorochromem.
5.
Użyć niereagującego przeciwciała o tym samym izotypie i znakowanego tym samym fluorochromem jako
kontroli ujemnej (patrz tabela).
6.
Inkubować w ciemnościach w temp. 4 C przez 30 minut.
7.
Dwukrotnie przepłukać PBS zawierającym 2% BSA. Zawiesić komórki w płynie odpowiednim do pomiarów
cytometrycznych,np. 0,3 mL roztworu zawierającego 1% paraformaldehyd jako utrwalacz w 0,01 mol/L PBS,
o pH 7,4.
8.
Zanalizować w cytometrze przepływowym.
Zaleca się użyć odpowiedniej kontroli dodatniej i ujemnej przy każdym pomiarze dla sprawdzenia odczynnika
i przygotowania próbki. Proszę zwrócić uwagę, że odczynniki znakowane z fluorochromami są wrażliwe
na światło i próbki powinny być przed nim chronione podczas barwienia aż do czasu analizy.
Literatura
1.
Norton AJ, Ramsay AD, Smith SH, Beverley PCL, Isaacson PG. Monoclonal antibody (UCHL1) that
recognises normal and neoplastic T cells in routinely fixed tissues. J Clin Pathol 1986;39:399-405.
2.
Davey FR, Elghetany MT, Kurec AS. Immunophenotyping of hematologic neoplasms in paraffinembedded tissue sections. Am J Clin Pathol 1990;93 Suppl 1:S17-S26.
3.
Sewell WA, Cooley MA, Hegen M. NL6. CD45 workshop panel report. In: Kishimoto T, Kikutani H, von
dem Borne AEG, Goyert SM, Mason DY, Miyasaka M, et al., editors. Leucocyte typing VI. White cell
differentiation antigens. Proceedings of the 6th International Workshop and Conference; 1996 Nov 10-14;
Kobe, Japan. New York, London: Garland Publishing Inc.; 1997. p. 499-502.
4.
Morimoto C. T18. CD45 cluster report. In: Schlossman SF, Boumsell L, Gilks W, Harlan JM, Kishimoto
T, Morimoto C, et al., editors. Leukocyte typing V. White cell differentiation antigens. Proceedings of the
5th International Workshop and Conference; 1993 Nov 3-7; Boston, USA. Oxford, New York, Tokyo:
Oxford University Press; 1995. p. 386-9.
5.
Smith SH, Brown MH, Rowe D, Callard RE, Beverley PCL. Functional subsets of human helper-inducer
cells defined by a new monoclonal antibody, UCHL1. Immunology 1986;58:63-70.
6.
Schmidt RE. Non-lineage/natural killer section report: new and previously defined clusters. In: Knapp W,
Dörken B, Gilks WR, Rieber EP, Schmidt RE, Stein H, et al., editors. Leukocyte typing IV. White cell
differentiation antigens. Proceedings of the 4th International Workshop and Conference; 1989 Feb 21-25;
Vienna, Austria. Oxford, New York, Tokyo: Oxford University Press; 1989. p. 517-42.
7.
Poppema S, Lai R, Visser L. Monoclonal antibody OPD4 is reactive with CD45R0, but differs from
UCHL1 by the absence of monocyte reactivity. Am J Pathol 1991;139:725-9.
8.
Hall PA, D’Ardenne AJ, Butler MG, Habeshaw JR, Stansfeld AG. New marker of B lymphocytes, MB2:
comparison with other lymphocyte subset markers in conventionally processed tissue sections. J Clin
Pathol 1987;40:151-6.
9.
Akbar AN, Terry L, Timms A, Beverley PCL, Janossy G. Loss of CD45R and gain of UCHL1 reactivity is
a feature of primed T cells. J Immunol 1988;140:2171-8.
Objaśnienia symboli
(108347-002)
Numer katalogowy
Temperatura przechowywania
Zużyć przed
Wyrób medyczny do
diagnostyki in vitro
Chronić przed światłem
(sprawdź w rozdz.
przechowywanie)
Producent
Sprawdź w instrukcji
stosowania
Numer serii
F 0800/R 0843/PL/KIM/01.07.02 str. 2/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17