CK-MB

CK-MB
Zestaw odczynnikowy do oznaczania aktywności izoenzymu MB kinazy kreatynowej (CK-MB)
Tylko do diagnostyki in vitro
Nr kat 5026.1
3 x 20 ml
(R1: 3 x 16 ml; R2: 1 x 12 ml)
ZASTOSOWANIE
Zestaw służy do oznaczania aktywności izoenzymu CK-MB kinazy
kreatynowej w surowicy lub osoczu krwi.
ZASADA METODY
Izoenzym MB kinazy kreatynowej zbudowany jest z jednej podjednostki
CK-M i jednej podjednostki CK-B. Przeciwciała przeciwko
podjednostkom CK-M kinazy kreatynowej całkowicie blokują
aktywność izoenzymu CK-MM oraz podjednostki CK-M wchodzącej w
skład izoenzymu CK-MB. W reakcji oznaczania aktywności CK
uczestniczą tylko podjednostki CK-B. Oznaczona aktywność
podjednostek CK-B stanowi połowę aktywności izoenzymu CK-MB;
podwojenie tej wartości daje aktywność CK-MB w badanej próbce.
MATERIAŁ DO BADAŃ
Surowica lub osocze pobrane na EDTA lub heparynian litu zgodnie ze
standardowymi procedurami.
Próbki można przechowywać do 7 dni w temp. 2-8°C.
WARTOŚĆI PRAWIDŁOWE
25°C
30°C
37°C
Dorośli
< 10 U/l
< 15 U/l
< 24 U/l
(< 0,17 µkat/l)
(< 0,25 µkat/l) (< 0,40 µkat/l)
Aktywność CK-MB < 6% aktywności CK
Podane wartości należy traktować jako orientacyjne. Zaleca się, aby
każde laboratorium określiło własne zakresy wartości prawidłowych.
SKŁAD ODCZYNNIKÓW
R1
100 mmol/l
Bufor imidazolowy pH 6,0
EDTA
2 mmol/l
N-Acetylocysteina
25 mmol/l
Octan magnezu
12,5 mmol/l
Glukoza
25 mmol/l
Adenozyno-5'-monofosforan (AMP)
6,25 mmol/l
NADP
2,5 mmol/l
Di-(adenozyno-5)-pentafosforan (AP5A)
12,5 µmol/l
Azydek sodu
13,8 mmol/l
Przeciwciała przeciwko
blokowanie akt. CK-M
podj. CK-M kinazy kreatynowej
do 2000 U/l
R2
400 mmol/l
Bufor glicynowy pH 9,1
EDTA
2 mmol/l
Fosforan kreatyny
150 mmol/l
Adenozyno-5'-difosforan (ADP)
10 mmol/l
Heksokinaza (HK)
> 10 kU/l
Dehydrogenaza glukozo-6-fosforanowa (G-6-P DH)
> 10 kU/l
Azydek sodu
13,8 mmol/l
Niereaktywne stabilizatory i konserwanty.
PRZYGOTOWANIE ODCZYNNIKA ROBOCZEGO
Zmieszać odczynniki R1 i R2 w stosunku 4 + 1. Odczynnik roboczy jest
stabilny przez co najmniej 2 tygodnie w temp. 2-8°C lub 1 dzień w temp.
15-25°C.
PRZECHOWYWANIE ODCZYNNIKÓW
Przechowywać w temp. 2-8°C w oryginalnych, zamkniętych
opakowaniach. Chronić przed kontaminacją i bezpośrednim działaniem
światła. Nie zamrażać.
Po otwarciu odczynniki prawidłowo przechowywane i chronione przed
zanieczyszczeniem są stabilne do daty ważności podanej na
opakowaniu.
CHARAKTERYSTYKA UŻYTKOWA
Limit detekcji: 10 U/l (0,17 ěkat/l)
Czułość: 0,12 ÄmA x l / U x min. (7,27 ÄmA x l / ěkat x min.)
Liniowość: 1000 U/l (16,67 ěkat/l). Dla wyższych aktywności próbkę
należy rozcieńczyć 0,9 % roztworem NaCl w stosunku 1+1; wynik
oznaczenia pomnożyć przez 2.
Powtarzalność (w serii oznaczeń):
poziom
I
18
n
średnia (U/l)
49,8
0,83
średnia (µkat/l)
< 4,00%
% CV
II
18
195,5
3,26
< 2,50%
Odtwarzalność (między seriami oznaczeń):
poziom
I
II
18
n
18
49,5
196,2
średnia (U/l)
0,83
3,27
średnia (µkat/l)
< 5,00 %
< 3,00%
% CV
Korelacja:
Podczas przeprowadzonych badań uzyskano wysoki stopień korelacji
wyników z wynikami uzyskanymi za pomocą odczynników
referencyjnych. Dokładne wyniki badań są dostępne na życzenie.
Interferencje:
Bilirubina do 20 mg/dl nie wpływa na wyniki oznaczeń.
Inne substancje i leki mogą interferować.
KONTROLA POPRAWNOŚCI DZIAŁANIA
Do kontroli jakości oznaczeń stosować surowice kontrolne z
wartościami CK-MB zmetrykowanymi dla metody IFCC z
immunoinhibicją.
Nie stosować odczynników, jeżeli absorbancja odczynnika roboczego
mierzona wobec wody przy długości fali 340 nm jest wyższa niż 0,300.
DODATKOWE MATERIAŁY I WYPOSAŻENIE
- Fotometr lub analizator automatyczny z termostatowanym gniazdem
pomiarowym umożliwiający pomiar absorbancji przy ë = 340 nm.
- Standardowe wyposażenie laboratorium diagnostycznego.
WYKONANIE OZNACZENIA
Do kuwety napipetować:
Odczynnik roboczy:
1000 µl
Doprowadzić do temperatury oznaczenia (25°C, 30°C lub 37°C),
następnie dodać:
Próbka:
40 µl
Dokładnie wymieszać; po 3 min. inkubacji w temperaturze oznaczenia
odczytać absorbancję wobec powietrza lub wody przy dł. fali 340 nm.
Powtarzać odczyty absorbancji po dokładnie 1, 2 i 3 minutach.
Wyznaczyć średnią zmianę absorbancji na minutę (∆A/min.).
19-12-2007
OBLICZENIA
Obliczenia prowadzone są w oparciu o następujący wzór:
Vt x 105 x R
aktywność CK-MB [U/l] =--------------- x AA/min.
s x l x Vs
STOSOWANE SYMBOLE GRAFICZNE - OBJAŚNIENIA:
CONT.
zawartość
numer katalogowy
Vt - całkowita objętość mieszaniny reakcyjnej = 1,04 ml
R - współczynnik przeliczający zmierzoną aktywność CK-B na
aktywność CK-MB = 2
s - molowy współczynnik absorbancji NADPH przy długości fali 340
nm = 6,3 xl02 m7mol
1 - długość drogi światła = 1 cm
Vs - objętość próbki = 0,04 ml
przed użyciem zapoznać się z instrukcją
aktywność CK-MB [U/l] = 8254 x AA/min.
aktywność CK-MB [µkat/l] = 137,57 x AA/min
numer serii
INFORMACJE DODATKOWE
1. Odczynniki zawierają śladowe ilości azydku sodu. Przy pracy z
odczynnikami stosować środki ostrożności typowe dla rutynowych
prac laboratoryjnych.
2. Odpady utylizować zgodnie z obowiązującymi przepisami - przez
termiczne przekształcanie lub odpowiednimi metodami obróbki
fizyczno-chemicznej.
3. Aplikacje do analizatorów automatycznych dostarczamy na życzenie
wyrób do diagnostyki in vitro
temperatura przechowywania
producent
data ważności
REFERENCJE
1. Gerhardt W., Waldenstrom J.: Creatine kinase B-subunit activity in
serum after immunoinhibition of M-subunit activity. Clin. Chem.,
25/7, 1274-1280 (1979).
1. Bishop C, Chu T. M., Shihabi Z. K.: Single stable reagent for creatine kinase assay. Clin. Chem., 17/6, 548-550 (1971).
2. Empfehlungen der Deutschen Gesselschaft fur Klinische Chemie.
Standard-Methode zur Bestimmung der AktMtat der Creatin-Kina-se.
J. Clin. Chem. Clin. Biochem., 15/4, 249-254 (1977).
3. Kohl H. H, Telander D. H., Roberts E. C, Elliott H. C: Inhibition of
creatine kinase activity by Ca2+ and reversing effect of
ethylene-diaminetetraacetate. Clin. Chem., 24/1, 177-178 (1978).
4. The Committee on Enzymes of The Scandinavian Society for
Clini-cal Chemistry and Clinical Physiology (SCE): Recommended
metod for the determination of creatine kinase in blood modified by
the inclusion of EDTA. Scand. J. Clin. Lab Invest, 39, 1-5 (1979).
5. Mathieu M., Bretaudiere J. P., Galteau M. M., Guidollet J.,
Lalege-rie P., Bailly M., Buret P., Dorche C, Louisot P., Schiele F.:
Re-commendations for measuring the catalytic concentration of
creatine kinase in human serum at +30°C. Ann. Biol. Clin., 40,
87-164 (1982).
6. International Federation of Clinical Chemistry (IFCC), Scientific
DMsion, Committee on Enzymes: Approved Recommendation on
IFCC methods for the measurement of catalytic concentration of enzymes. Part 7. IFCC method for creatine kinase (ATP: creatine
N-phosphotransferase, EC 2.7.3.2). Eur. J. Clin. Chem. Clin. Biochem., 29/7, 435-456 (1991).
7. IFCC primary reference procedures for the measurement of catalytic
activity concentrations of enzymes. Part 2. Reference procedurę for
the measurement of catalytic concentration of creatine kinase (ATP:
creatine N-phosphotransferase (CK), EC 2.7.7.2). Clin. Chem. Lab.
Med. 40/6, 635-643 (2002).
8. Young D. S.: Effects of drugs on clinical laboratory tests, AACC
Press, 4th ed. (1995).
19-12-2007