Nr kat. IR526

FLEX
Polyclonal Rabbit
Anti-Human
Carcinoembryonic Antigen
Ready-to-Use
(Link)
Nr kat. IR526
Przeznaczenie
Do badań diagnostycznych in vitro.
Przeciwciała FLEX Polyclonal Rabbit Anti-Human Carcinoembryonic Antigen, Ready-to-Use (Link), są przeznaczone
do stosowania w immunohistochemii w aparatach Autostainer Link. Przeciwciało znakuje komórki wykazujące
ekspresję białek CEA i CEA-podobnych, i moŜe pomóc w określeniu histogenezy nowotworów nabłonka w kilku
kategoriach morfologicznych (1–4). Interpretacja kliniczna wystąpienia lub braku barwienia musi być uzupełniona
przez badania morfologiczne, z wykorzystaniem odpowiednich prób kontrolnych, i powinna być przeprowadzana
przez doświadczonego patologa, z uwzględnieniem historii choroby pacjenta i innych badań diagnostycznych.
Podsumowanie
i wyjaśnienie
Rodzina białek CEA family obejmuje dwie gałęzie określane jako CEACAM (cząsteczka adhezyjna komórek
powiązanych z CEA) i gałąź PSG (glikoproteiny swoiste dla ciąŜy). Członkami rodziny naleŜącymi do gałęzi
CEACAM są (poprzednie nazwy podano w nawiasach): CEACAM1 (glikoproteina Ŝółciowa, BGP1, TM-CEA,
CD66a); CEACAM3 (członek 1 rodziny genu CEA, CGM1, CD66d); CEACAM4 (członek 7 rodziny genu CEA,
CGM7); CEA (antygen karcynoembrionalny, CEA CD66e); CEACAM6 (nieswoisty antygen reagujący krzyŜowo,
NCA, NCA-50/90, CD66c); CEACAM7 (członek 2 rodziny genu CEA, CGM2); CEACAM8 (członek 6 rodziny genu
CEA, CGM6, CD67, CD66b) (5, 6) Podobieństwo immunologiczne pomiędzy białkami CEACAM jest wyraźnie
zaznaczone (6).
Patrz dokument “Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych” firmy Dako lub następujące
części instrukcji do systemu detekcji IHC: 1) Zasady procedury, 2) Niezbędne materiały niedostarczone z zestawem,
3) Przechowywanie, 4) Przygotowanie preparatu, 5) Wykonanie odczynu, 6) Kontrola jakości, 7) Rozwiązywanie
problemów, 8) Interpretacja wyniku odczynu, 9) Ograniczenia metody.
Odczynnik
dostarczony
Gotowe do uŜycia poliklonalne przeciwciało królicze dostarczane w postaci płynnej w buforze zawierającym białko
stabilizujące i azydek sodu o stęŜeniu 0,015 mol/L.
Immunogen
Ludzkie CEA izolowane z przerzutów do wątroby raka gruczołowego jelita grubego.
Swoistość
Przeciwciało reaguje z białkami CEA i CEA-podobnymi, na przykład z CEACAM1 i CEACAM6.
Ślady ilości przeciwciał przeciwko innym białkom osocza ludzkiego usunięto przy uŜyciu absorpcji w fazie stałej.
Absorpcji dokonano takŜe dla antygenów grup krwi A i B.
Przy zadziałaniu 12,5 µL stęŜonego przeciwciała na cm2 Ŝelu na wyciąg z przerzutów do wątroby gruczolaka
okręŜnicy w stęŜonym kwasie nadchlorowym, w immunoelektroforezie krzyŜowej pojawia się tylko osad białek CEA
CEA-podobnych. W przypadku 2 µL normalnego osocza ludzkiego, Ŝadna reakcja nie jest widoczna. Barwnik:
Coomassie Brilliant Blue.
W testach ELISA z antygenem uwięzionym między przeciwciałami (sandwich) nie obserwuje się reakcji z ludzkim
osoczem pozbawionym CEA.
Środki ostroŜności
1. Do stosowania przez wyszkolony personel.
2. Produkt zawiera azydek sodu (NaN3), substancję chemiczną silnie toksyczną w czystej postaci. Azydek sodu,
zastosowany w produkcie w stęŜeniu, które nie jest sklasyfikowane jako niebezpieczne, moŜe reagować
elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, powodując nagromadzenie silnie wybuchowych azydków
metali. Po usunięciu spłukać duŜą ilością wody, aby zapobiec nagromadzeniu się azydku metalu w kanalizacji.
3. Podobnie jak w przypadku wszelkich materiałów pochodzących ze źródeł biologicznych, naleŜy stosować
właściwe procedury postępowania.
4. W celu uniknięcia kontaktu z oczami i skórą naleŜy nosić odpowiednie osobiste wyposaŜenie ochronne.
5. Niewykorzystany roztwór utylizować zgodnie z lokalnymi, wojewódzkimi i krajowymi rozporządzeniami.
Przechowywanie
(119442-001)
Dako Denmark A/S
Przechowywać w temperaturze 2–8 °C. Nie stosowa ć po upływie terminu waŜności podanego na fiolce. Jeśli
odczynniki są przechowywane w warunkach innych niŜ podane powyŜej, uŜytkownik musi zweryfikować takie
warunki. Nie ma oczywistych oznak wskazujących na niestabilność produktu. Dlatego jednocześnie z badaniem
próbek pochodzących od pacjenta, naleŜy wykonywać kontrole dodatnie i ujemne. W wypadku nieoczekiwanego
wyniku odczynu, którego nie moŜna wyjaśnić róŜnicami w procedurach laboratoryjnych, gdy podejrzewa się problem
z przeciwciałem, naleŜy skontaktować się z działem wsparcia technicznego firmy Dako.
IR526/PL/SSM/2009.01.20 str. 1/3
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Przygotowanie
próbek
oraz materiały
wymagane, ale
niedostarczane
Przeciwciała mogą być wykorzystane do znakowania utrwalonych formaliną skrawków zatapianych w parafinie.
Preparaty tkankowe naleŜy pociąć na skrawki o wymiarach około 4 µm.
Wymagane jest poddanie cieplnemu odmaskowaniu antygenu (HIER) z uŜyciem Dako PT Link (nr kat.
PT100/PT101). Szczegółowe instrukcje zawiera Instrukcja uŜytkownika aparatu PT Link. Optymalne wyniki uzyskuje
się w wyniku wstępnej obróbki tkanek przy uŜyciu roztworu EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH
(50x) (nr kat. K8000/K8004).
Skrawki zatapiane w parafinie: Do obróbki wstępnej utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków
tkankowych, zalecana jest procedura 3 w 1 z uŜyciem odczynnika Dako PT Link. Postępować według procedury
wstępnej obróbki tkanek, zamieszczonej w ulotce roztworu EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x)
(nr kat. K8000/K8004). Uwaga: Po przeprowadzeniu barwienia skrawki muszą być odwodnione, oczyszczone
zakryte za pomocą środka do trwałego zatapiania.
Odparafinowane skrawki: Do obróbki wstępnej utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków
tkankowych, zalecane jest uŜycie odczynnika Dako PT Link i przeprowadzenie procedury opisane dla skrawków
parafinowych. Po zakończeniu barwienia szkiełka naleŜy zatopić w wodnym lub trwałym środku do zatapiania.
W trakcie przygotowywania oraz podczas procedury znakowania immunohistochemicznego skrawki nie powinny
wyschnąć. W celu uzyskania lepszego przylegania skrawków do szkiełek podstawowych, zaleca się stosowanie
szkiełek FLEX IHC Microscope Slides (nr kat. K8020).
Procedura barwienia
oraz materiały
wymagane, ale
niedostarczane
Zalecanym systemem wizualizacji jest EnVision FLEX, High pH (Link) (nr kat. K8000). W systemie Autostainer Link
wstępnie zaprogramowano etapy odczynu i czasy inkubacji. Zalecana objętość uŜytego odczynika to 1 x 200 µL lub
2 x 150 µL na preparat. Szczegółowe informacje dotyczące wkładania szkiełek mikroskopowych i odczynników
przedstawiono w Instrukcji uŜytkownika aparatu Autostainer Link. Jeśli protokoły nie są dostępne w uŜywanym
systemie Autostainer, naleŜy skontaktować się z działem wsparcia technicznego firmy Dako. Wszystkie procedury
inkubacji naleŜy równieŜ przeprowadzać w temperaturze pokojowej.
Optymalne warunki mogą się zmieniać w zaleŜności od rodzaju materiału i sposobów jego przygotowania, i powinny
być określone indywidualnie w kaŜdym laboratorium. JeŜeli patolog oceniający preparat Ŝyczy sobie wybarwienia
innym natęŜeniu, czasy inkubacji oraz uŜycie szablonów wizualizacji EnVision FLEX/EnVision FLEX+ mogą
zostać zmienione. W celu uzyskania informacji dotyczącej zmiany programowania protokołu, naleŜy skontaktować
się z działem obsługi/obsługą techniczną firmy Dako. NaleŜy upewnić się, Ŝe działanie zmodyfikowanego protokołu
jest prawidłowe – w tym celu naleŜy ocenić, czy odczyn jest taki jak opisany w części „Charakterystyka
wydajnościowa”.
Zalecane jest barwienie kontrastowe hematoksyliną przy uŜyciu EnVision FLEX Hematoxylin, (Link) (nr kat.
K8008). Zaleca się stosowanie niewodnego, trwałego środka do zatapiania.
Równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów, naleŜy wykonywać dodatnie i ujemne próby
kontrolne z uŜyciem identycznego protokołu. Dodatnia kontrola tkankowa powinna obejmować wątrobę i trzustkę,
natomiast we wszystkich dodatnich preparatach komórki/struktury powinny wskazywać odczyn reakcji taki, jak
opisany dla tej tkanki w części „Charakterystyka wydajnościowa”. Zalecana kontrola ujemna to FLEX Negative
Control, Rabbit, (Link) (nr kat. IR600).
Interpretacja
wybarwienia
Komórki znakowane przeciwciałem wykazują odczyn błonowy i/lub cytoplazmatyczny.
Charakterystyka
działania
Tkanki normalne: W wątrobie kanaliki Ŝółciowe wykazują odczyn z zakresu od umiarkowanego do silnego. Trzustce
przewody komórek zrazikowych wykazują odczyn z zakresu od słabego do umiarkowanego. Przeciwciała dają
odczyn z komórkami nabłonka okręŜnicy, nabłonka oskrzeli i pęcherzyków płucnych oraz makrofagami pęcherzyków
płucnych, leukocytami polimorfonuklearnymi i makrofagami w śledzionie oraz powierzchowną warstwą komórek
nabłonka i komórkami okładzinowymi Ŝołądka (7).
Tkanki patologiczne: Spośród gruczolakoraków przewodu pokarmowego, trzustki i dróg Ŝółciowych, przeciwciało
dawało odczyn w 10/10 przypadków gruczolaków z przełyku i Ŝołądka, 13/13 przypadków gruczolaków jelita
grubego, 2/3 przypadków gruczolaków trzustki i 5/6 przypadków gruczolaków dróg Ŝółciowych. Spośród
gruczolakoraków innych niŜ z przewodu pokarmowego, odczyn dodatni dawało 7/7 przypadków gruczolaków płuc,
0/5 przypadków gruczolaków jajnika (surowiczych), 2/2 przypadków gruczolaków jajnika (śluzowych), 0/11
przypadków gruczolaków pęcherza (z komórek przejściowych) i 1/1 przypadek gruczolaka pęcherza (gruczolakorak).
Ponadto, przeciwciało dawało odczyn dodatni w 33/42 przypadków gruczolakoraka sutka, 6/14 stercza, 1/6
rakowiaków i 6/12 wątrobiaków (1). W badaniu nowotworów złośliwych wątroby, opisywane przeciwciało wraz z
przeciwciałem Anti-Hepatocyte, klon OCH1E5 i przeciwciałem Anti-Epithelial-Related Antigen, klon MOC-31,
prawidłowo sklasyfikowało 99/100 przypadków, obejmujących 25 przypadków raka z komórek wątrobowych i 75
przypadków raka z komórek kanalików Ŝółciowych i grzuczolakoraków metastatycznych (2). Określone zostały
profile immunologiczne wysoce swoiste dla gruczolakoraka szyjki macicy oraz endometrium, co obejmuje
znakowanie z uŜyciem przeciwciała skierowanego przeciwko antygenowi karcynoembrionalnemu. JednakŜe,
większość nowotworów wykazywała pośredni, nieswoisty immunofenotyp (3). W przypadku czerniaka złośliwego,
plamiste, głównie błonowe odczyny dodatnie z przeciwciałem, zaobserwowano w około 70% przypadków (4).
(119442-001)
Dako Denmark A/S
IR526/PL/SSM/2009.01.20 str. 2/3
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Piśmiennictwo
1.
Sheahan K, O'Brien MJ, Burke B, Dervan PA, O'Keane JC, Gottlieb LS, et al. Differential reactivities of
carcinoembryonic antigen (CEA) and CEA-related monoclonal and polyclonal antibodies in common epithelial
malignancies. Am J Clin Pathol 1990;94:157-64.
2.
Morrison C, Marsh W, Frankel WL. A comparison of CD10 to pCEA, MOC-31, and hepatocyte for the distinction
of malignant tumors in the liver. Mod Pathol 2002;15:1279-87.
3.
Alkushi A, Irving J, Hsu F, Dupuis B, Liu CL, Rijn M, et al. Immunoprofile of cervical and endometrial
adenocarcinomas using a tissue array. Virchows Arch 2003;442:271-7.
4.
Sanders DSA, Evans AT, Allen CA, Bryant FJ, Johnson GD, Hopkins J, et al. Classification of CEA-related
positivity in primary and metastatic malignant melanoma. J Pathol 1994;172:343-8.
5.
Beauchemin N, Draber P, Dveksler G, Gold P, Gray-Owen S, Grunert F, et al. Nomenclature announcement.
Redefined nomenclature for members of carcinoembryonic antigen family. Exp Cell Res 1999;252:243-9.
6.
Skubitz KM, Micklem K, van der Schoot E. M14. CD66 and CD67 cluster workshop report. In: Knapp W, Dörken
B, Gilks WR, Rieber EP, Schmidt RE, Stein H, et al., editors. Leucocyte typing IV. White cell differentiation
antigens. Proceedings of the 4th International Workshop and Conference; 1989 Feb 21-25; Vienna, Austria.
Oxford, New York, Tokyo: Oxford University Press; 1989. Volume1 p. 889-99.
7.
Nap M, Hoor KAT, Fleuren GJ. Cross-reactivity with normal antigens in commercial anti-CEA sera, used for
immunohistology. The need for tissue controls and absorptions. Am J Clin Pathol 1983;79:25-31.
Objaśnienie symboli
N ume r ka ta log owy
Tempe ratura
prze chow ywan ia
Zu Ŝyć p rzed
Wyró b medyczny do
d ia gno styki in vi tro
Zawa rto ść w ysta rcza na
<n> testów
Produ cent
S prawd zić w instrukcj i
sto sowa nia
Nu mer serii
(119442-001)
Dako Denmark A/S
IR526/PL/SSM/2009.01.20 str. 3/3
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17