cobas TaqScreen MPX Test

cobas TaqScreen MPX Test
do uytku z systemem cobas s 201
DO STOSOWANIA W DIAGNOSTYCE IN VITRO.
cobas TaqScreen MPX Test
cobas TaqScreen MPX Control Kit
cobas TaqScreen MPX Wash Reagent
MPX
MPX CTL
TS WR
96 Tests
P/N: 04584244 190
6 Sets
P/N: 04626290 190
5.1 L
P/N: 04404220 190
PRZEZNACZENIE
Test cobas TaqScreen MPX do uŔytku z systemem cobas s 201 jest jakoĎciowym testem in vitro s¸uŔ¶cym do bezpoĎredniego wykrywania RNA
ludzkiego wirusa niedoboru odpornoĎci typu 1 (HIV-1) grupy M, RNA ludzkiego wirusa niedoboru odpornoĎci typu 1 grupy O, RNA ludzkiego wirusa
niedoboru odpornoĎci typu 2 (HIV-2), RNA wirusa zapalenia w¶troby typu C (HCV) i DNA wirusa zapalenia w¶troby typu B (HBV) w ludzkim osoczu.
Test ten zosta ¸ zaprojektowany jako test przesiewowy dla dawc —
w wykrywaj ¶ cy RNA wirus w
— HIV-1 grupy M, HIV-1 grupy O, HIV-2, HCV oraz
DNA wirusa HBV w pr —
b kach osocza od pojedynczych dawc —
w krwi, w tym dawc —
w pe ¸ nej krwi, element w
— krwi i innych Ŕ ywych dawc —
w . Test
ten jest przygotowany tak Ŕ e do badania dawc —
w narz ¶ d —
w i tkanek, kiedy pr b— ki s ¶ uzyskiwane, gdy jeszcze bije serce dawcy.
Osocze od wszystkich dawc —
w mo Ŕ e by ľ badane jako pojedyncze pr b— ki. Dla dawc w
— pe ¸ nej krwi i element w
— krwi pr —
b ki osocza mog ¶ by ľ
badane pojedynczo lub w pulach sk ¸ adaj ¶ cych si z takich samych obj t o Ď ci pojedynczych pr —
b ek w po ¸¶ czeniu z testami serologicznymi
wykrywaj ¶ cymi wirusy HIV, HCV i HBV.
Ten test nie jest przeznaczony do stosowania jako narz d zie diagnostyczne.
PODSUMOWANIE I OBJA Î NIENIE TESTU
G ¸—
w nym problemem w transfuzjach krwi i element —
w krwi jest mo Ŕ liwo Ďľ przeniesienia zaka Ŕ enia wirusowego, szczeg —
l nie ludzkiego wirusa
niedoboru odporno Ď ci typu 1 (HIV-1) i typu 2 (HIV-2), wirusowego zapalenia w ¶ troby typu C (HCV) oraz wirusowego zapalenia w ¶ troby typu B
(HBV). Czynniki te s ¶ przenoszone przede wszystkim przez ekspozycj na zaka Ŕ on ¶ krew lub produkty uzyskiwane z krwi i osocza, ekspozycj
na okre Ď lone tkanki lub p ¸ yny organizmu, przez kontakt seksualny lub od zaka Ŕ onej matki na p ¸—
d .
Wirus HIV-1 jest szeroko rozpowszechniony na ca¸ym Ďwiecie, a iloĎľ os—
b zakaŔonych na Ďwiecie szacuje si na 1,1% (0,56% w Ameryce P—
¸
nocnej i 0,25% w Europie Zachodniej). U os —
b zaka Ŕ onych wirusem HIV-1 mo Ŕ e wyst ¶ pi ľ kr t— ka, pocz ¶ tkowo ostra, grypopodobna choroba
1
w
zwi ¶ zana z wysokimi poziomami wiremii we krwi obwodowej w przeci ¶ gu 3 Đ 6 tygodni od zaka Ŕ enia. Obecnie na Ď wiecie wyst p uj ¶ dwie g ¸—
ne grupy genetyczne wirusa HIV-1: grupa M (g ¸—
w na) i grupa O (poboczna). Grupa M jest wyra Ů nie dominuj ¶ ca i jest podzielona na 10 podtyp —
w
2
, kt r— e wyst p uj ¶ na ca¸ ym Ď wiecie. W przeciwie–s twie do globalnego rozpowszechnienia zaka Ŕenia wirusem HIV-1 zakaŔ enie wirusem HIV2 jest zasadniczo ograniczone do Afryki Zachodniej i do ludnoĎci migruj¶cej z i przez ten rejon.2 Wirus HIV-2 ma mniejsz¶ zdolnoĎľ przenoszenia
si przez kontakty seksualne w por—
w naniu z wirusem HIV-1. MoŔe to byľ spowodowane niŔszymi poziomami wiremii podczas pocz¶tkowego i p
Ů nego etapu zaka Ŕ enia. Tak Ŕ e p —
—
Ů ny etap choroby (okres zwi k szonej wiremii) spowodowanej wirusem HIV-2 rozwija si wolniej ni Ŕ
w przypadku HIV-1. Wszystko to mo Ŕ e cz Ď ciowo wyja Ď nia ľ ograniczone w skali Ď wiatowej rozprzestrzenienie wirusa HIV-2 w por w
— naniu
3
w ny czynnik etiologiczny odpowiedzialny za 90%Đ95% przypadk—
w potransfuzyjnego zapalenia
z wirusem HIV-1. Wirus HCV jest uwaŔany za g¸—
4,5
w ¶ troby typu nie-A i nie-B. Wirus HCV wyst p uje na ca ¸ ym Ď wiecie, ale cz s to Ďľ wyst p owania nie jest znana, poniewa Ŕ zaka Ŕ enie jest na
og —
¸ bezobjawowe. Szacuje si , Ŕ e odsetek os —
b zaka Ŕ onych w Europie Zachodniej waha si od 0,5 do 2,0% w Europie i si g a prawie 20% w
Egipcie. Wirus HBV jest jednym z g ¸—
w nych czynnik —
w etiologicznych ostrego i przewlek ¸ ego zapalenia w ¶ troby, marsko Ď ci w ¶ troby i raka
6,7,8
w¶trobowokom—
r kowego.
Na Ďwiecie jest oko¸o 350 milion—
w przewlek¸ych nosicieli tego wirusa, g¸—
w nie w obszarach o wysokiej czs toĎci
9
wyst p owania choroby. Cz s to Ďľ zaka Ŕ enia wirusem HBV na Ď wiecie waha si od < 2% w Europie Zachodniej i USA do > 8% w krajach Azji
10
i Afryki.
Serologiczne testy przesiewowe w znacz ¶ cy spos —
b zmniejszy ¸ y, ale nie wyeliminowa ¸ y, ryzyko przeniesienia zaka Ŕ e – wirusowych przez
transfuzje krwi i produkt w
— krwiopochodnych. Testowanie pe ¸ nej krwi i osocza dawc —
w na obecno Ďľ wirusa HBV rozpocz t o wraz
z wprowadzeniem test—
w wykrywaj¶cych HBsAg we wczesnych latach siedemdziesi¶tych dwudziestego wieku. Opr—
c z badania na obecnoĎľ HBV
krew i osocze dawc w
— s ¶ rutynowo badane na obecno Ďľ wirus —
w HIV-1, HIV-2 i HCV za pomoc ¶ test w
— immunoenzymatycznych (EIA). ř¶ danie
opinii publicznej wy Ŕ szych standard —
w wykrywania czynnik —
w zaka Ů nych we krwi i produktach krwiotw —
r czych nap d za ¸ o rozw j— technologii
opartej o badania kwas —
w nukleinowych (nucleic acid technology Đ NAT). Badania pokaza ¸ y, Ŕ e wykrywanie wirusowych kwas —
w nukleinowych
(RNA HIV-1,11-13 RNA HCV4,12-15 i DNA HBV 16-19) mo Ŕ e jeszcze bardziej zmniejszy ľ ryzyko przeniesienia tych czynnik w
— w pr b— kach krwi
pobranych w okresie okna serologicznego. Czas trwania tego okna zosta¸ oszacowany dla wirusa HIV-1 na przecit nie 22 dni, ale moŔe trwaľ aŔ
6 miesic y 20. Wraz z wprowadzeniem bada– NAT HIV-1 w mini-pulach okres zakaŮnoĎci zosta¸ w znacz¶cy spos—
b skr—
c ony i aktualne ryzyko
przeniesienia HIV-1 jest oceniane przeci t nie jako 1 przypadek na 2 miliony pobra – .12-14 Podobnie wprowadzenie test —
w NAT wykrywaj ¶ cych
w na 1 milion pobra – .
RNA HCV zmniejszy ¸ o okres okna serologicznego o oko ¸ o 60 dni 12-15; obecnie szacowane ryzyko wynosi 1 Đ 2 przypadk —
Testy przesiewowe wykrywaj ¶ ce HBV DNA NAT nie s ¶ rutynowo stosowane, jednak badania oparte na technologii NAT mog ¸ yby w wi k szym
stopniu zmniejszy ľ ryzyko przeniesienia infekcji HBV.14,18,19,21
W celu zwik szenia wydajnoĎci bada– wielu czynnik—
w etiologicznych rozwinit o technologi multiplex-PCR (MPX) wykrywaj¶c¶ jednoczeĎnie
wiele wirus —
w . W technologii MPX PCR w jednej pr b——
w ce reakcyjnej amplifikacji i detekcji przy u Ŕ yciu licznych par primer —
w i sond podlega wi
c ej ni Ŕ jedna sekwencja docelowa.
r y umoŔliwia jednoczesny skrining i wykrywanie RNA wirusa HIV-1 grup
Test cobas TaqScreen MPX jest jakoĎciowym testem multipleksowym, kt—
w . Test
M i O, RNA wirusa HIV-2, RNA wirusa HCV i DNA wirusa HBV w zakaŔonych zmieszanych i pojedynczych preparatach pobranych od dawc—
cobas TaqScreen MPX wykorzystuje og—
l n¶ technik przygotowywania kwas—
w nukleinowych w urz¶dzeniu COBAS AmpliPrep. RNA wirusa HIV1 grup M i O, RNA wirusa HIV-2, RNA wirusa HCV i DNA wirusa HBV s ¶ amplifikowane i wykrywane przy u Ŕ yciu zautomatyzowanej techniki PCR
czasu rzeczywistego na analizatorze COBAS TaqMan. Procedura wykorzystuje kontrol wewnt rzn¶ (Internal Control) w kaŔdym poszczeg—
l nym
badaniu dla cel w
— monitorowania skuteczno Ď ci testu, jak r w
— nie Ŕ enzym AmpErase dla zmniejszenia potencjalnego zanieczyszczenia uprzednio
zamplifikowanym materia ¸ em (amplikonem). Test cobas TaqScreen MPX nie okre Ď la, kt r— y wirus zosta ¸ wykryty w pr b— ce. Test COBAS
AmpliScreen HBV, test COBAS AmpliScreen HCV v2.0 oraz test COBAS AmpliScreen HIV-1 v1.5 s ¶ dost p nymi testami wykrywaj ¶ cymi konkretne
wirusy HIV-1 grupy M, wirusy HCV i HBV. Testy rozpoznaj ¶ ce wirusy HIV-1 grupy O i HIV-2 nie s ¶ dost p ne w firmie Roche.
ZASADY PROCEDURY
Test cobas TaqScreen MPX dzia ¸ aj ¶ cy na systemie cobas s 201 oparty jest na 4 g ¸—
w nych procesach:
1.
Zautomatyzowane mieszanie i pipetowanie kontroli przy u Ŕ yciu urz ¶ dzenia pipetuj ¶ cego HAMILTON Microlab ¨ STAR IVD
2.
Zautomatyzowane przygotowywanie pr b— ek przy u Ŕ yciu urz ¶ dzenia COBAS AmpliPrep.
3.
Zautomatyzowana amplifikacja kwasu nukleinowego oraz zautomatyzowana detekcja w czasie rzeczywistym produkt —
w reakcji PCR przy
u Ŕ yciu analizatora COBAS TaqMan
4.
Zautomatyzowane zarz ¶ dzanie danymi przy u Ŕ yciu oprogramowania do pulowania i zarz ¶ dzania danymi (PDM)
1
Zautomatyzowane mieszanie pr —
b ek przy u Ŕ yciu urz ¶ dzenia pipetuj ¶ cego HAMILTON Microlab STAR IVD
Urz ¶ dzenie pipetuj ¶ ce HAMILTON Microlab STAR automatyzuje pipetowanie pr —
b ek od pojedynczych dawc —
w i z puli osocza, przenoszenie r w
—
nych obj t o Ď ci do p ¸ ytek archiwalnych oraz pipetowanie odczynnik —
w kontrolnych testu. System cobas s 201 jest u Ŕ ywany do rozdzielania
r pr —
b ek i
dodatnich puli na pojedyncze pr b— ki. System cobas s 201 s ¸ u Ŕ y do przetwarzania pr b— ek w seriach. Seri definiuje si jako zbi —
kontroli, kt r— e s ¶ pipetowane, ekstrahowane, amplifikowane i wykrywane ¸¶ czenie. Po zako –c zeniu pipetowania serii urz ¶ dzeniem pipetuj ¶ cym
HAMILTON STAR Pipettor, ca¸a ramka na pr—
b ki jest przenoszona do urz¶dzenia COBAS AmpliPrep w celu przeprowadzenia nastp nego etapu.
Zautomatyzowane przygotowywanie pr b
— ek przy u Ŕ yciu urz ¶ dzenia COBAS AmpliPrep
Kwasy nukleinowe z cz ¶ steczek docelowych i dodanej kontroli wewn t rznej (internal control Đ IC) (kt r— a s ¸ u Ŕ y jako kontrola proces —
w
przygotowywania pr —
b ek i amplifikacji/detekcji) s ¶ przetwarzane jednocze Ď nie. Test cobas TaqScreen MPX zawiera odczynniki do pi c iu
kolejnych etap —
w przeprowadzanych na pok ¸ adzie urz ¶ dzenia COBAS AmpliPrep. Roztw —
r proteazy trawi bia ¸ ka, co u ¸ atwia liz , inaktywuje
nukleazy i u ¸ atwia uwalnianie RNA i DNA z cz ¶ stek wirusa. Dodanie odczynnika lizuj ¶ cego do pr —
b ki powoduje poprzez denaturacj bia ¸ ek liz
wirusa i inaktywacj nukleazy. RNA i DNA s ¶ uwalniane i jednocze Ď nie chronione przed nukleazami. Uwolnione kwasy nukleinowe ¸¶ cz ¶ si
z silikonow ¶ powierzchni ¶ dodanych szklanych cz ¶ stek o w ¸ a Ď ciwo Ď ciach magnetycznych. Jest to spowodowane g ¸—
w nie sumarycznym
dodatnim ¸ adunkiem na powierzchni szklanej cz ¶ stki i sumarycznym ujemnym ¸ adunkiem kwas —
w nukleinowych w chaotropowym st Ŕ eniu soli i
sile jonowej odczynnika lizuj ¶ cego. Odczynnik p ¸ ucz ¶ cy usuwa niezwi ¶ zane substancje i zanieczyszczenia, takie jak zdenaturowane bia ¸ ka,
fragmenty kom —
r ek i potencjalne inhibitory reakcji PCR (takie jak hemoglobina itp.) oraz zmniejsza st Ŕ enie soli. Oczyszczone kwasy nukleinowe
s ¶ odlaczane do szklanych cz ¶ stek o w ¸ a Ď ciwo Ď ciach magnetycznych w podwy Ŕ szonej temperaturze za pomoc ¶ buforu do elucji.
Zautomatyzowana amplifikacja kwasu nukleinowego przy u Ŕ yciu analizatora COBAS TaqMan
Po wyizolowaniu oczyszczonych kwas w
— nukleinowych z ludzkiego osocza podczas zautomatyzowanego przygotowania pr —
b ek, do amplifikacji
i detekcji RNA wirus —
w HIV-1 (grup M i O), HIV-2, HCV, DNA wirusa HBV oraz RNA kontrolnego u Ŕ ywa si odczynnika cobas TaqScreen MPX
Master Mix (MMX). Po zaktywowaniu przez dodanie octanu manganu odczynnik cobas TaqScreen MPX Master Mix umo Ŕ liwia odwrotn ¶
transkrypcj (dla docelowych RNA), a nast p nie amplifikacj PCR wysoce konserwatywnych region w
— RNA wirus w
— HIV-1 (grup M i O), HIV-2
i HCV, DNA wirusa HBV i RNA odczynnika kontrolnego przy u Ŕ yciu specyficznych primer w
—.R—
w noczesnej detekcji zamplifikowanego kwasu
nukleinowego towarzyszy tworzenie sygna ¸—
w fluorescencyjnych z 5'-nukleolitycznej degradacji sond specyficznych dla HIV-1 (grup M i O), HIV-2,
HCV, HBV i kontroli, tak Ŕ e obecnych w odczynniku Master Mix. U Ŕ ywane s ¶ dwa barwniki fluorescencyjne: jednym barwnikiem jest oznakowana
sonda kontrolna, a drugim wszystkie specyficzne dla docelowych wirus —
w sondy pozwalaj ¶ ce na multipleksow ¶ po ¸¶ czon ¶ identyfikacj
docelowych wirus w
— i niezale Ŕ n ¶ identyfikacj kontroli.
Odwrotna transkrypcja oraz amplifikacja PCR
Reakcje odwrotnej transkypcji i amplifikacji przeprowadza si przy u Ŕ yciu termostabilnego rekombinowanego enzymu, polimerazy DNA Z05.
W obecno Ď ci jon —
w manganowych (Mn2+) polimeraza DNA Z05 uzyskuje aktywno Ďľ odwrotnej transkryptazy i polimerazy DNA. Pozwala to na
zachodzenie reakcji odwrotnej transkrypcji i amplifikacji PCR w tej samej mieszaninie reakcyjnej.
Amplifikacji PCR towarzyszy wykorzystanie polimerazy DNA Z05, kt —
r a wyd ¸ u Ŕ a przy ¸¶ czone primery wzd ¸ u Ŕ docelowych matryc, celem
wytworzenia dwuniciowego DNA (amplikonu). Ten proces powtarza si w wielu cyklach, a ka Ŕ dy cykl podwaja ilo Ďľ amplikonu DNA. Amplifikacja
zachodzi jedynie w obszarze docelowego genomu pomi d zy primerami; ca ¸ o Ďľ genomu nie ulega amplifikacji.
Amplifikacja wybi —
r cza
Amplifikacj wybi —
r cz ¶ badanego kwasu nukleinowego z pr —
b ki klinicznej przy u Ŕ yciu testu cobas TaqScreen MPX uzyskuje si dzi k i
zastosowaniu enzymu AmpErase (uracylo-N-glikozylaza) i tr —
j fosforanu dezoksyurydyny (dUTP). Enzym AmpErase rozpoznaje i katalizuje
22
niszczenie nici DNA zawieraj ¶ cych dezoksyurydyn
, ale nie DNA zawieraj¶ cego dezoksytymidyn lub RNA zawieraj¶ cego rybourydyn 23,24.
Dezoksyurydyna nie wyst p uje w naturalnym DNA, ale jest zawsze obecna w amplikonie z uwagi na zastosowanie w odczynniku Master Mix tr j—
fosforanu dezoksyurydyny zamiast tr j— fosforanu tymidyny jako jednego z dNTP; dlatego te Ŕ wy ¸¶ cznie amplikon zawiera deoksyurydyn .
Dezoksyurydyna warunkuje wraŔliwoĎľ zanieczyszczaj¶cego amplikonu na rozk¸ad przez enzym AmpErase przed amplifikacj¶ docelowego DNA.
Enzym AmpErase niszczy tak Ŕ e wszystkie nieswoiste produkty reakcji powsta ¸ e po wst p nej aktywacji odczynnika Master Mix przez jony
manganu. Enzym AmpErase, zawarty w g ¸—
w nym rozcie –c zalniku, katalizuje rozk ¸ ad DNA zawieraj ¶ cego dezoksyurydyn w miejscu reszt
dezoksyurydynowych przez otwarcie pier Ď cienia dezoksyrybozy w pozycji C1. Podczas ogrzewania w pierwszym cyklu termicznym ¸ a –c uch
amplikonu DNA pk a w miejscu, gdzie znajduje si dezoksyurydyna, w ten spos—
b wykluczaj¶c dalsz¶ amplifikacj DNA. Enzym AmpErase staje
si nieaktywny na d ¸ ugi czas, gdy zostanie wystawiony na dzia ¸ anie temperatury powy Ŕ ej 55 űC , dlatego nie niszczy docelowego amplikonu
utworzonego w wyniku reakcji PCR.
Zautomatyzowana detekcja w czasie rzeczywistym produkt —
w reakcji PCR przy u Ŕ yciu analizatora COBAS TaqMan
Podczas amplifikacji PCR wysoka temperatura podczas kolejnych etap —
w reakcji denaturuje docelowy i kontrolny amplikon do jednoniciowego
DNA. Specyficzne wykrywaj ¶ ce sondy oligonukleotydowe hybrydyzuj ¶ z jednoniciow ¶ form ¶ zamplifikowanego DNA. W ten spos —
b amplifikacja,
hybrydyzacja i detekcja zachodz ¶ r w
— nocze Ď nie.
Wykrywanie produkt —
w reakcji PCR25,26
Odczynnik cobas TaqScreen MPX MMX zawiera sondy wykrywaj ¶ ce, kt —
r e s ¶ specyficzne dla kwas w
— nukleinowych HIV-1 (grup M i O), HIV-2,
HCV, HBV lub kontroli wewn t rznej. Ka Ŕ da sonda wykrywaj ¶ ca jest oznaczona: 1) jednym z dw —
c h barwnik w
— fluorescencyjnych, kt —
r y dzia ¸ a
jako barwnik reporterowy; 2) drugim barwnikiem, kt —
r y funkcjonuje jako wygaszacz. Jeden specyficzny barwnik reporterowy jest zwi ¶ zany
z specyficznymi dla wirus —
w sondami i fluorescencj , kt r— ej jest Ů r —
d ¸ em, mierzy si przy okre Ď lonej d ¸ ugo Ď ci fali. Drugi barwnik reporterowy
jest zwi¶zany z sond¶ specyficzn¶ dla kontroli wewnt rznej i fluorescencj , kt—
r ej jest Ůr—
d ¸em, mierzy si przy innej d¸ugoĎci fali. We wszystkich
sondach uŔywa si barwnika wygaszacza tego samego typu. System ten umoŔliwia detekcj wszystkich zamplifikowanych kwas—
w nukleinowych
docelowych wirus —
w przy jednej d ¸ ugo Ď ci fali i r w
— noczesn ¶ detekcj zamplifikowanego kwasu nukleinowego kontroli wewn t rznej przy innej
d ¸ ugo Ď ci fali.
Zanim rozpocznie si amplifikacja PCR sondy s ¶ nienaruszone, a fluorescencja reportera jest wyt ¸ umiona blisko Ď ci ¶ wygaszacza, na zasadzie
efektu przenoszenia energii typu F rš stera. Podczas amplifikacji PCR sondy hybrydyzuj ¶ z specyficznymi jednoniciowymi sekwencjami DNA i s ¶
rozszczepiane przez 5 Ő - i 3'-nukleazow ¶ aktywno Ďľ polimerazy DNA Z05 w tym samym czasie, kiedy wyst p uje amplifikacja. Kiedy barwnik
reporterowy i wygaszacz zostan ¶ rozdzielone przez to rozszczepienie, ujawnia si aktywno Ďľ fluorescencyjna barwnika reporterowego. Z
ka Ŕ dym cyklem PCR generowana jest zwi k szaj ¶ ca si ilo Ďľ rozszczepionych sond i r w
— nocze Ď nie wzrasta sumaryczny sygna ¸ barwnika
reporterowego.
Detekcji w czasie rzeczywistym produkt w
— PCR towarzyszy pomiar fluorescencji uwolnionych barwnik —
w reporterowych reprezentuj ¶ cych
docelowe wirusy i niezale Ŕ nie kontrole wewn t rzne.
Zautomatyzowane zarz ¶ dzanie danymi przy u Ŕ yciu programu PDM
Roche PDM Data Manager pozwala u Ŕ ytkownikowi przegl ¶ da ľ i zarz ¶ dza ľ wynikami. Roche PDM Data Manager kwalifikuje wyniki testu dla
wszystkich oznacze– jako niereaktywne, reaktywne lub b¸d ne. Opr—
c z odbierania i analizowania wynik—
w PCR oprogramowanie Roche PDM Data
Manager pozwala u Ŕ ytkownikowi drukowa ľ raporty, odszukiwa ľ wyniki, akceptowa ľ wyniki dawc w
— i, opcjonalnie, przesy ¸ a ľ dane do LIS.
2
MATERIA Ł Y DOSTARCZONE PRZEZ FIRM ROCHE
Do wykrywania RNA HIV-1 (grup M i O), HIV-2 i HCV oraz DNA HBV w pr b— kach osocza wymagane i dostarczane s ¶ trzy zestawy: 1) Test cobas
TaqScreen MPX, 2) zestaw kontrolny cobas TaqScreen MPX i 3) odczynnik p ¸ ucz ¶ cy cobas TaqScreen. Karty charakterystyki substancji
niebezpiecznych (Material Safety Data Sheets Đ MSDS) s ¶ dost p ne na Ŕ¶ danie w miejscowym biurze firmy Roche.
cobas TaqScreen MPX Test
MPX
(P/N: 04584244 190)
MPX CS1
(Kaseta odczynnikowa z cz ¶ steczkami magnetycznymi do oznacze – MPX)
MPX CS2
(Kaseta z odczynnikiem lizuj ¶ cym do oznacze – MPX)
MPX CS3
(Kaseta wieloodczynnikowa do oznacze – MPX)
MPX CS4
(Kaseta odczynnik w
— swoistych dla testu do oznacze – MPX)
cobas TaqScreen MPX Control Kit
MPX CTL
Zestaw kontrolny cobas TaqScreen MPX
(P/N: 04626290 190)
HIV-1 M (+) C
(Pr —
b a kontrolna HIV-1 dodatnia)
HIV-1 O (+) C
(Pr —
b a kontrolna HIV-1 O dodatnia)
HIV-2 (+) C
(Pr —
b a kontrolna HIV-2 dodatnia)
HCV (+) C
(Pr —
b a kontrolna HCV dodatnia)
HBV (+) C
(Pr —
b a kontrolna HBV dodatnia)
TS ( Đ ) C
[Ujemna pr —
b a kontrolna cobas TaqScreen (osocze ludzkie)]
cobas TaqScreen Wash Reagent
TS WR
Odczynnik p ¸ ucz ¶ cy cobas TaqScreen
(P/N: 04404220 190)
TS WR
(Odczynnik p ¸ ucz ¶ cy cobas TaqScreen)
96 test w
—
6 zestaw w
—
5,1 l
POZOSTA ¸ E MATERIA Ł Y WYMAGANE, ALE SPRZEDAWANE ODDZIELNIE
(DO NABYCIA W FIRMIE ROCHE)
Ten test musi by ľ przeprowadzany na systemie cobas s 201. System cobas s 201 musi by ľ zainstalowany i u Ŕ ywany jako pe ¸ na konfiguracja
w
systemu. Pojedynczych element—
w cobas s 201 nie moŔna uŔywaľ jako samodzielnych urz¶dze–, nie moŔna teŔ zastp owaľ innych element—
. System cobas s 201 wykorzystuje elementy wymienione poni Ŕ ej.
Przyrz ¶ dy i oprogramowanie dla systemu cobas s 201
Ą
Urz ¶ dzenie pipetuj ¶ ce HAMILTON Microlab STAR IVD, stacja robocza i oprogramowanie Pooling Manager
Ą
Urz ¶ dzenie COBAS AmpliPrep
Ą
Analizator COBAS TaqMan
Ą
Stacja danych z oprogramowaniem AMPLILINK
Ą
Serwer Roche PDM Data Manager, stacja robocza i oprogramowanie Data Manager
Ramki i materia ¸ y jednorazowe
Ą
Ramki na pr b— ki COBAS AmpliPrep (SK24) (P/N: 28122172001)
Ą
Ramki SPU COBAS AmpliPrep (P/N: 28122806001)
Ą
Ramki na odczynniki COBAS AmpliPrep (P/N: 28122199001)
Ą
Jednostki przetwarzania pr b— ki (SPU): (P/N: 03755525001)
Ą
Prob w
— ki wej Ď ciowe na pr —
b ki (S-tubes) z klipsami z kodem kreskowym (P/N: 03137040001)
Ą
Statywy z ko –c —
w kami K-tips (P/N: 03287343001)
Ą
Pude ¸ ko z prob w
— kami K 12x96 (P/N: 03137082001)
Ą
Zasobnik COBAS TaqMan K-carrier (P/N: 28150397001)
Ą
Ko –c w
— ki CO-RE o du Ŕ ej pojemno Ď ci (1000 µ l) z filtrem (P/N: 04639642001)
Ą
P ¸ ytki archiwalne z etykietami z kodami kreskowymi (P/N: 04639634001)
Ą
Maty zamykaj ¶ ce p ¸ ytki archiwalne (P/N: 04789288001)
Ą
No Ď nik na pr —
b ki na 24 prob w
— ki testowe (P/N: 04639502001)
Ą
No Ď nik na pr —
b ki na 32 prob w
— ki testowe (P/N: 04639529001)
Ą
Zasobnik na ko –c —
w ki (P/N: 04639545001)
Ą
No Ď nik do p ¸ ytek archiwalnych (P/N: 04639553001)
Ą
No Ď nik na ramki SK24 (P/N: 04639600001)
Ą
Aerozol dezynfekuj ¶ cy Microcide SQ Ş lub HAMILTON (P/N: 04864425001)
Ą
R k awice jednorazowe bezpudrowe
3
ODCZYNNIKI
cobas TaqScreen MPX Test
(P/N: 04584244 190)
MPX CS1
MGP
(Szklane cz ¶ stki o w ¸ a Ď ciwo Ď ciach magnetycznych)
Szklane cz ¶ stki o w ¸ a Ď ciwo Ď ciach magnetycznych
93% izopropanol
Xi
93% (wagowo) izopropanol
MPX
96 test w
—
2 x 48 test w
—
2 x 7,0 ml
+
F
Produkt dra Ŕ ni ¶ cy
93% (wagowo) izopropanol
Produkt wysoce ¸ atwopalny
MPX CS2
LYS
(Odczynnik lityczny)
Cytrynian sodu dwuwodny
42,5% tiocyjanian guanidyny
< 14% polidokanol
0,9% ditiotreitol
Xn
42,5% (wagowo) tiocyjanian guanidyny
2 x 48 test —
w
2 x 78 ml
+
Produkt szkodliwy
MPX CS3
Pase
(Roztw —
r proteinazy)
Bufor TRIS
< 0,05% EDTA
Chlorek wapnia
Octan wapnia
≤ 7,8% proteinaza
Glicerol
Xn
7,8% (wagowo) proteinaza
2 x 48 test —
w
2 x 3,8 ml
+
Produkt szkodliwy
EB
(Bufor do elucji)
Bufor TRIS base
0,2% metyloparaben
2 x 7,0 ml
MPX CS4
MPX MMX-R1
(Odczynnik 1 MPX Master Mix)
Bufor TRIS
Octan potasu
Octan manganu
Glicerol
Betaina
0,08% azydek sodu
2 x 48 test w
—
2 x 3,0 ml
MPX MMX-R2
(Odczynnik 2 MPX Master Mix)
Bufor Tricine
Chlorek potasu
Wodorotlenek potasu
< 21% dimetylosulfotlenek
Glicerol
EDTA
Tween 20
Igepal CA630
< 0,09% dATP, dCTP, dGTP, dUTP, dTTP
< 0,01% roztw r— primer w
— sensownych i antysensownych dla wirus w
— HIV-1 grupa M, HIV-1 grupa O, HIV-2, HCV, HBV
< 0,01% roztw r— znakowanych barwnikiem fluorescencyjnym sond dla HIV-1, HIV-2, HCV, HBV
< 0,01% roztw r— znakowanej barwnikiem fluorescencyjnym sondy dla kontroli wewn t rznej
< 0,01% aptamer oligonukleotydowy
< 0,07% polimeraza DNA Z05 (bakteryjna)
< 0,4% enzym AmpErase [uracylo-N-glikozylaza] (bakteryjny)
0,08% azydek sodu
4
2 x 2,5 ml
MPX IC
(MPX kontrola wewn t rzna)
Bufor TRIS
≤ 0,002% Poly rA RNA (syntetyczny)
EDTA
0,05% azydek sodu
< 0,001% niezaka Ů ny, syntetyczny RNA dla kontroli wewn t
bakteriofaga MS2
2 x 15 ml
rznej op ¸ aszczony bia ¸ kiem kapsydowym
cobas TaqScreen MPX Control Kit
MPX CTL
Zestaw kontrolny cobas TaqScreen MPX
(P/N: 04626290 190)
HIV-1 M (+) C
(Pr —
b a kontrolna HIV-1 M dodatnia)
< 0,001% niezakaŮny, syntetyczny RNA wirusa HIV-1 grupy M op¸aszczony bia¸kiem kapsydowym bakteriofaga
MS2
Ujemne osocze ludzkie niereaktywne w testach na obecno Ďľ przeciwcia ¸ przeciwko HCV, przeciwcia ¸ przeciwko
HIV-1/2 oraz antygenu HBsAg; RNA HIV-1, RNA HIV-2, RNA HCV oraz DNA HBV niewykrywalny przy u Ŕ yciu
metod PCR
0,1% ProClin 300
Xi
(3:1) mieszanina 5-chloro-2-metylo-2H-izotiazolo-3-onu i 2-metyl-2H-izotiazol-3-onu
6 zestaw —
w
6 x 1,6 ml
++
Produkt dra Ŕ ni ¶ cy
R43: Mo Ŕ e powodowa ľ uczulenie w kontakcie ze sk —
r ¶
HIV-1 O (+) C
(Pr —
b a kontrolna HIV-1 O dodatnia)
< 0,001% niezakaŮny, syntetyczny RNA wirusa HIV-1 grupy O op¸aszczony bia¸kiem kapsydowym bakteriofaga
MS2
Ujemne osocze ludzkie niereaktywne w testach na obecno Ďľ przeciwcia ¸ przeciwko HCV, przeciwcia ¸ przeciwko
HIV-1/2 oraz antygenu HBsAg; RNA HIV-1, RNA HIV-2, RNA HCV oraz DNA HBV niewykrywalny przy u Ŕ yciu
metod PCR
0,1% ProClin 300
Xi
(3:1) mieszanina 5-chloro-2-metylo-2H-izotiazolo-3-onu i 2-metyl-2H-izotiazol-3-onu
6 x 1,6 ml
+
Produkt dra Ŕ ni ¶ cy
R43: Mo Ŕ e powodowa ľ uczulenie w kontakcie ze sk —
r ¶
HIV-2 (+) C
(Pr —
b a kontrolna HIV-2 dodatnia)
< 0,001% niezaka Ů ny, syntetyczny RNA HIV-2 dla kontroli wewn t rznej op ¸ aszczony bia ¸ kiem kapsydowym
bakteriofaga MS2
Ujemne osocze ludzkie niereaktywne w testach na obecno Ďľ przeciwcia ¸ przeciwko HCV, przeciwcia ¸ przeciwko
HIV-1/2 oraz antygenu HBsAg; RNA HIV-1, RNA HIV-2, RNA HCV oraz DNA HBV niewykrywalny przy u Ŕ yciu
metod PCR
0,1% ProClin 300
Xi
(3:1) mieszanina 5-chloro-2-metylo-2H-izotiazolo-3-onu i 2-metyl-2H-izotiazol-3-onu
6 x 1,6 ml
++
Produkt dra Ŕ ni ¶ cy
R43: Mo Ŕ e powodowa ľ uczulenie w kontakcie ze sk —
r ¶
HCV (+) C
(Pr —
b a kontrolna HCV dodatnia)
< 0,001% niezaka Ů ny, syntetyczny RNA HCV dla kontroli wewn t rznej op ¸ aszczony bia ¸ kiem kapsydowym
bakteriofaga MS2
Ujemne osocze ludzkie niereaktywne w testach na obecno Ďľ przeciwcia ¸ przeciwko HCV, przeciwcia ¸ przeciwko
HIV-1/2 oraz antygenu HBsAg; RNA HIV-1, RNA HIV-2, RNA HCV oraz DNA HBV niewykrywalny przy u Ŕ yciu
metod PCR
0,1% ProClin 300
Xi
(3:1) mieszanina 5-chloro-2-metylo-2H-izotiazolo-3-onu i 2-metyl-2H-izotiazol-3-onu
6 x 1,6 ml
++
Produkt dra Ŕ ni ¶ cy
R43: Mo Ŕ e powodowa ľ uczulenie w kontakcie ze sk —
r ¶
HBV (+) C
(Pr —
b a kontrolna HBV dodatnia)
< 0,001% niezaka Ů ny, syntetyczny DNA HBV dla kontroli wewn t rznej op ¸ aszczony bia ¸ kiem kapsydowym
bakteriofaga Lambda
Ujemne osocze ludzkie niereaktywne w testach na obecno Ďľ przeciwcia ¸ przeciwko HCV, przeciwcia ¸ przeciwko
HIV-1/2 oraz antygenu HBsAg; RNA HIV-1, RNA HIV-2, RNA HCV oraz DNA HBV niewykrywalny przy u Ŕ yciu
metod PCR
0,1% ProClin 300
Xi
(3:1) mieszanina 5-chloro-2-metylo-2H-izotiazolo-3-onu i 2-metyl-2H-izotiazol-3-onu
+
Produkt dra Ŕ ni ¶ cy
R43: Mo Ŕ e powodowa ľ uczulenie w kontakcie ze sk —
r ¶
5
6 x 1,6 ml
TS ( Đ ) C
(Pr —
b a kontrolna ujemna cobas TaqScreen)
Ujemne osocze ludzkie niereaktywne w testach na obecno Ďľ przeciwcia ¸ przeciwko HCV, przeciwcia ¸ przeciwko
HIV-1/2 oraz antygenu HBsAg; RNA HIV-1, RNA HIV-2, RNA HCV oraz DNA HBV niewykrywalny przy u Ŕ yciu
metod PCR
0,1% ProClin 300
Xi
(3:1) mieszanina 5-chloro-2-metylo-2H-izotiazolo-3-onu i 2-metyl-2H-izotiazol-3-onu
6 x 1,6 ml
+
Produkt dra Ŕ ni ¶ cy
R43: Mo Ŕ e powodowa ľ uczulenie w kontakcie ze sk —
r ¶
cobas TaqScreen Wash Reagent
Odczynnik p ¸ ucz ¶ cy cobas TaqScreen
(P/N: 04404220 190)
TS WR
(Odczynnik p ¸ ucz ¶ cy cobas TaqScreen)
Cytrynian sodu dwuwodny
0,1% metyloparaben
TS WR
5,1 l
WYMAGANIA DOTYCZ ´ CE PRZECHOWYWANIA I U řY TKOWANIA
A.
Przez temperatur pokojow ¶ rozumie si temp. od 15 űC do 30 űC .
B.
Nie zamra Ŕ a ľ odczynnik —
w ani kontroli.
C.
Przechowywaľ MPX CS1, MPX CS2, MPX CS3 i MPX CS4 w temperaturze od 2űC do 8űC . Odczynniki te, jeĎli s¶ nieuŔywane, s¶ stabilne
a Ŕ do up ¸ yni c ia wskazanej daty wa Ŕ no Ď ci.
D.
Po pierwszym uŔyciu odczynniki zachowuj¶ stabilnoĎľ przez 30 dni w temperaturze 28űC lub do up¸ywu daty waŔnoĎci, zaleŔnie od tego,
co nast ¶ pi wcze Ď niej.
E.
Odczynnik w
— mo Ŕ na u Ŕ ywa ľ w nie wi c ej ni Ŕ 6 cyklach pracy urz ¶ dzenia, w sumie przez maks. 30 godzin pracy urz ¶ dzenia COBAS
AmpliPrep. Pomi d zy kolejnymi cyklami pracy odczynniki nale Ŕ y przechowywa ľ w temp. od 2 űC do 8 űC .
F.
Odczynniki s ¶ stabilne przez ¸¶ cznie 24 godziny ci ¶ g ¸ ej pracy na urz ¶ dzeniu COBAS AmpliPrep.
G.
Przechowywa ľ HIV-1 M (+) C, HIV-1 O (+) C, HIV-2 (+) C, HCV (+) C, HBV (+) C i TS ( Đ ) C w temp. od 2 űC do 8 űC . Odczynniki kontrolne
s¶ stabilne aŔ do up¸ynic ia wskazanej daty waŔnoĎci. Po otwarciu opakowania niewykorzystane do badania odczynniki naleŔy wyrzuciľ.
H.
Przechowywa ľ TS WR w temp. od 15 űC do 30 űC . Nieotwarty odczynnik TS WR pozostaje stabilny a Ŕ do up ¸ yni c ia wskazanej daty
wa Ŕ no Ď ci. Po otwarciu odczynnik zachowuje stabilno Ďľ przez 30 dni w temperaturze od 15 űC do 30 űC lub do up ¸ ywu daty wa Ŕ no Ď ci,
zale Ŕ nie od tego, co nast ¶ pi wcze Ď niej.
Î RODKI OSTRO řN O Î CI
DO STOSOWANIA W DIAGNOSTYCE IN VITRO.
A.
B.
C.
D.
E.
F.
G.
H.
I.
J.
K.
L.
M.
N.
O.
Pr—
b ki mog¶ byľ zakaŮne. Przy wykonywaniu badania naleŔy przestrzegaľ og—
l nych Ďrodk—
w ostroŔnoĎci.27,28 Procedur t powinien
wykonywa ľ tylko personel bieg ¸ y w stosowaniu systemu testowego cobas TaqScreen MPX i przeszkolony w post p owaniu z materia ¸ em
zaka Ů nym. Dok ¸ adnie oczy Ď ci ľ i odkazi ľ wszystkie laboratoryjne powierzchnie robocze Ď wie Ŕ o przygotowanym roztworem 0,5%
podchlorynu sodu w wodzie dejonizowanej lub destylowanej. Nast p nie przetrze ľ powierzchni 70% etanolem.
PRZESTROGA: HIV-1 M (+) C, HIV-1 O (+) C, HIV-2 (+) C, HCV (+) C, HBV (+) C i TS ( Đ ) C zawieraj ¶ ludzkie osocze pozyskane
z ludzkiej krwi. r d
—¸ owy materia ¸ by ¸ testowany i nie wykazywa ¸ obecno Ď ci przeciwcia ¸ przeciwko HIV-1/2, HCV i obecno Ď ci
antygenu HBsAg. Materia¸ Ůr—
d ¸owy by¸ testowany przy uŔyciu testu cobas TaqScreen MPX. Badanie ujemnego osocza ludzkiego
(Negative Human Plasma) przy zastosowaniu metod PCR nie wykaza ¸ o obecno Ď ci RNA wirusa HIV-1 (grup M i O), RNA wirusa
HIV-2, RNA wirusa HCV ani DNA wirusa HBV. řa dna ze znanych metod badania nie mo Ŕ e zaoferowa ľ ca ¸ kowitej pewno Ď ci, Ŕ e
produkty otrzymane z ludzkiej krwi nie b d ¶ przenosi ľ czynnik —
w zaka Ů nych. Wszystkie materia ¸ y pochodz ¶ ce z krwi ludzkiej
naleŔy uwaŔaľ za potencjalnie zakaŮne i postp owaľ z nimi z zastosowaniem uniwersalnych Ďrodk—
w ostroŔnoĎci. W przypadku
wylania materia ¸ u, natychmiast zdezynfekowa ľ Ď wie Ŕ o przygotowanym roztworem 0,5% podchlorynu sodu (rozcie –c zony roztw r—
wybielacza) lub post p owa ľ zgodnie z procedurami danej instytucji.
Stosowa ľ rutynowe laboratoryjne Ď rodki ostro Ŕ no Ď ci. Nie pipetowa ľ za pomoc ¶ ust. Nie je Ďľ , nie pi ľ ani nie pali ľ w obszarach roboczych.
Podczas obchodzenia si z pr —
b kami i odczynnikami zestawu nale Ŕ y nosi ľ ochronne, jednorazowe r k awice, fartuchy laboratoryjne oraz
os ¸ on oczu. Po zako –c zeniu pracy z pr —
b kami i odczynnikami testowymi nale Ŕ y dok ¸ adnie umy ľ r c e.
Odczynniki MPX MMX-R1, MPX MMX-R2 i MPX IC zawieraj ¶ jako Ď rodek konserwuj ¶ cy azydek sodu. Nie stosowa ľ metalowych rurek do
transferu odczynnika. JeĎli roztwory zawieraj¶ce zwi¶zki azydkowe s¶ usuwane do kanalizacji, naleŔy je rozcie–c zyľ i sp¸ukaľ obfit¶ iloĎci¶
bie Ŕ¶ cej wody. Te Ď rodki ostro Ŕ no Ď ci s ¶ zalecane dla unikni c ia odk ¸ adania si z ¸ og —
w w metalowych rurach, co mo Ŕ e spowodowa ľ
zagro Ŕ enie wybuchem.
Wykazano, Ŕ e heparyna hamuje PCR. Nie nale Ŕ y stosowa ľ osocza heparynizowanego do tej procedury.
Zaleca si u Ŕ ywanie ja ¸ owych jednorazowych pipet oraz ko –c —
w ek pipet wolnych od nukleazy. Je Ŕ eli w trakcie obchodzenia si
i przygotowywania pr —
b ek nie jest mo Ŕ liwa odpowiednia kontroli kontaminacji mi d zy pr —
b kami, mo Ŕ e doj Ďľ do wyst ¶ pienia wynik —
w
fa ¸ szywie dodatnich.
Aby uzyskaľ optymaln¶ skutecznoĎľ testu, naleŔy stosowaľ tylko dostarczone lub wymienione potrzebne materia¸y jednorazowego uŔytku.
Aby unikn¶ľ krzyŔowego zanieczyszczenia pr—
b ek lub kontroli, z wszystkimi materia¸ami zawieraj¶cymi pr—
b ki lub kontrole naleŔy postp
owa ľ zgodnie z zasadami dobrej praktyki laboratoryjnej.
Przed uŔyciem naleŔy oceniľ wzrokowo kaŔd¶ kaset z odczynnikami, prob—
w k z kontrol¶ i odczynnik p¸ucz¶cy, aby upewniľ si , Ŕe nie
ma cho ľ by najmniejszego wycieku. W przypadku wyst ¶ pienia wycieku, nie wolno u Ŕ ywa ľ tego materia ¸ u do testowania.
Wyrzuca ľ wszystkie materia ¸ y, kt r— e przypadkowo wesz ¸ y w kontakt z pr b— kami i odczynnikami zgodnie z krajowymi, federalnymi,
stanowymi i lokalnymi przepisami.
Nie u Ŕ ywa ľ zestawu testowego cobas TaqScreen MPX, zestawu testowego cobas TaqScreen MPX ani odczynnika p ¸ ucz ¶ cego cobas
TaqScreen po up ¸ ywie daty wa Ŕ no Ď ci. Nie zamienia ľ , miesza ľ ani nie ¸¶ czy ľ odczynnik —
w z rŔ
— nych zestaw w
— lub z r —
Ŕ nych serii. Nie
umieszcza ľ mieszanych serii odczynnik w
— w urz ¶ dzeniu COBAS AmpliPrep.
Karty charakterystyki substancji niebezpiecznych (Material Safety Data Sheets Đ MSDS) s ¶ dost p ne na Ŕ¶ danie w miejscowym biurze
firmy Roche.
Unikaľ kontaktu odczynnik—
w ze sk—
r ¶, oczami i b¸onami Ďluzowymi. JeŔeli dojdzie do kontaktu, natychmiast sp¸ukaľ duŔ¶ objt oĎci¶
wody, w przeciwnym razie mog ¶ powsta ľ oparzenia. Je Ŕ eli dojdzie do rozlania wymienionych odczynnik —
w , przed wytarciem nale Ŕ y
rozcie –c zy ľ je wod ¶ . Nie wolno dopu Ď ci ľ do kontaktu odczynnika LYS zawieraj ¶ cego tiocyjanian guanidyny z roztworem
podchlorynu sodu (wybielacz). Po ¸¶ czenie to mo Ŕ e skutkowa ľ wytworzeniem silnie truj ¶ cego gazu.
ÎciĎle przestrzegaľ podanych procedur i wytycznych w celu zapewnienia prawid¸owego wykonania testu. Wszelkie odchylenia od procedur i
wytycznych mog ¶ mie ľ wp ¸ yw na optymaln ¶ skuteczno Ďľ testu.
Nale Ŕ y unika ľ u Ŕ ycia nadmiernie zhemolizowanych pr —
b ek.
6
P.
Q.
Ska Ŕ enie pr —
b ek osocza czerwonymi krwinkami (> 2,5%) mo Ŕ e zahamowa ľ test cobas TaqScreen MPX.
Na Ŕ adnym etapie wykonywania testu nie u Ŕ ywa ľ sk ¸ adnik —
w z uszkodzonymi etykietami z kodem kreskowym.
PRZYGOTOWANIE ODCZYNNIK w
—
A.
Ogrzewaľ zestaw kontrolny cobas TaqScreen MPX do temperatury pokojowej przez 30 minut przed uŔyciem. Ogrzewaľ odczynniki do testu
cobas TaqScreen MPX w urz ¶ dzeniu COBAS AmpliPrep przez 30 minut przed u Ŕ yciem.
POBIERANIE, PRZECHOWYWANIE I MIESZANIE PR B
î EK
Uwaga:Ze wszystkimi pr b
— kami nale Ŕ y obchodzi ľ si jak z czynnikami zaka Ů nymi.
A.
Z testem cobas TaqScreen MPX mo Ŕ na u Ŕ ywa ľ pr —
b ek osocza pobranych na EDTA, CPD, CPDA1, CP2D, ACDA i 4% cytrynianu sodu.
Nale Ŕ y przestrzega ľ instrukcji producenta prob —
w ek testowych.
B.
Krew pobran ¶ na EDTA mo Ŕ na przechowywa ľ w temp. 2 Đ 30 űC do 72 godzin od momentu pobrania oraz przez nast p ne 2 dni w temp. 2 Đ 8
űC . Aby przechowywaľ krew d¸uŔej niŔ piľ dni, naleŔy oddzieliľ osocze od czerwonych krwinek przez wirowanie z prd koĎci¶ 800Đ1600 x
g przez 20 minut. Po oddzieleniu osocze mo Ŕ na przechowywa ľ w temp. 2 Đ 8 űC przez dodatkowe 7 dni. Alternatywnie osocze mo Ŕ na
przechowywa ľ w temp. ≤ Đ 20 űC przez d ¸ u Ŕ szy czas.
Temperatura ( űC)
2 Đ 30 ű
C
30
Antykoagulant EDTA
20
10
2Đ8ű
C
Pe ¸ na
krew
Osocze
0
0
C.
1
2
3
4
5
6
7
8
9 10
Dni po pobraniu
13
14
15
2 Đ 30 ű
C
Temperatura ( űC)
Antykoagulant CPD, CPDA1 lub CPD2D
20
10
2Đ8ű
C
Pe ¸ na
krew
Osocze
0
0
E.
12
Krew pobran ¶ na CPD, CPDA1 lub CP2D mo Ŕ na przechowywa ľ do 72 godzin w temp. 2 Đ 30 űC przed oddzieleniem osocza. Po
odwirowaniu pr —
b ek pobranych na CPD, CPDA1 lub CP2D z pr d ko Ď ci ¶ 800 Đ 1600 x g przez 20 minut, osocze mo Ŕ na przechowywa ľ w
temp. 2Đ 8 űC przez dodatkowe siedem dni. Alternatywnie osocze oddzielone od czerwonych krwinek moŔ na przechowywaľ w temp. ≤ Đ 20
űC przez d ¸ u Ŕ szy czas.
30
D.
11
1
2
3
4
5
6
7
8
9 10
Dni po pobraniu
11
12
13
14
15
Osocze z aferezy pobrane na antykoagulanty: ACDA lub 4% cytrynian sodu moŔna przechowywaľ do 72 godzin od czasu pobrania w temp.
2 Đ 30 űC . Osocze z aferezy mo Ŕ na przechowywa ľ przez d ¸ u Ŕ szy czas w temp. ≤ Đ 20 űC .
Nast p uj ¶ ce wskaz —
w ki dotycz ¶ ce obj t o Ď ci osocza oparte s ¶ na pipetowaniu ze szklanych lub plastikowych prob —
w ek 13 x 100 mm od
dawc—
w na urz¶dzeniu pipetuj¶cym HAMILTON STAR. Wymienione objt oĎci dotycz¶ osocza powyŔej upakowanych czerwonych krwinek
i s ¶ u Ŕ ywane podczas pracy z testem cobas TaqScreen MPX.
Minimalna
obj t o Ďľ osocza
Typ puli
Pula g ¸—
w na z 6 *
3 ml
Pula g ¸—
w na z 1 *
3 ml
Powt r— zona pula z prob —
w ki
1,5 ml
Pula do rozdzia ¸ u z prob —
w ki
2 ml
Powt r— zenie dodatniej
3 ml
*Zawiera tworzenie p ¸ ytki archiwalnej
F.
G.
H.
I.
J.
K.
L.
Nie zamra Ŕ a ľ krwi pe ¸ nej.
Wykazano, Ŕ e heparyna hamuje reakcj PCR. Stosowanie pr —
b ek heparynizowanych jest niewskazane.
Zakryte p ¸ ytki archiwalne mo Ŕ na przechowywa ľ w temp. 2 Đ 8 űC do siedmiu dni od daty oddzielenia osocza od krwinek czerwonych.
Nie obserwowano ujemnego wp ¸ ywu na skuteczno Ďľ testu, gdy pr b— ki osocza poddawano cyklicznemu zamra Ŕ aniu i rozmra Ŕ aniu.
Przed u Ŕ yciem ogrza ľ pul pr b— ek lub pr —
b ki od pojedynczych dawc —
w do temperatury pokojowej.
Inne warunki pobierania i przechowywania musi zweryfikowaľ uŔytkownik. JeĎli pr—
b ki maj¶ byľ przesy¸ane, naleŔy je opakowaľ i oznaczyľ
zgodnie z odpowiednimi federalnymi i mi d zynarodowymi przepisami dotycz ¶ cymi transportu pr b— ek i czynnik —
w etiologicznych.29
Je Ŕ eli w trakcie obchodzenia si i przygotowywania pr —
b ek nie jest mo Ŕ liwa odpowiednia kontrola kontaminacji mi d zy pr b
—
kami, mo Ŕ e doj Ďľ do wyst ¶ pienia wynik w
— fa ¸ szywie dodatnich.
7
M.
MIESZANIE I PIPETOWANIE PR îB EK
1. System cobas s 201 wykorzystuje wszystkie moŔliwoĎci pipetowania i mieszania urz¶dzenia pipetuj¶cego HAMILTON Microlab STAR
IVD. Urz ¶ dzenie HAMILTON STAR przeprowadza skanowanie kod —
w kreskowych i zabiegi zlewania z takich samych obj t o Ď ci celem
wytworzenia puli.
b ki dodatnie, urz ¶ dzenie pipetuj ¶ ce HAMILTON STAR zostaje u Ŕ yte do pipetowania
2. Je Ď li test cobas TaqScreen MPX wykryje pr —
pojedynczych pr —
b ek albo z p ¸ ytki archiwalnej albo z oryginalnych prob w
— ek z pr —
b kami do bada – weryfikacyjnych.
UWAGI PROCEDURALNE
A.
Wyposa Ŕ enie
1. Przygotowa ľ system cobas s 201 do u Ŕ ytku zgodnie z instrukcjami w Podr c zniku u Ŕ ytkownika.
2. Aby zapewni ľ prawid ¸ owe dzia ¸ anie urz ¶ dzenia, nale Ŕ y wykonywa ľ zalecane czynno Ď ci konserwacyjne.
B.
Odczynniki
1. Odczynniki do testu cobas TaqScreen MPX naleŔy ogrzewaľ przez 30 minut przed uŔyciem w urz¶dzeniu COBAS AmpliPrep. Zestaw
kontrolny cobas TaqScreen MPX i odczynnik p ¸ ucz ¶ cy cobas TaqScreen musz ¶ przed u Ŕ yciem mie ľ temperatur pokojow ¶ .
Informacje na temat warunk w
— przechowywania mo Ŕ na znale Ůľ w rozdziale Wymagania dotycz ¶ ce przechowywania i u Ŕ ytkowania.
w .
2. Ka Ŕ dy zestaw testowy cobas TaqScreen MPX Test Kit zawiera wystarczaj ¶ c ¶ ilo Ďľ materia ¸ u do przeprowadzenia 96 test —
3. Wszystkie odczynniki kontrolne s ¸ u Ŕ¶ do jednorazowego u Ŕ ytku.
w zrŔ
— nych serii, odczynnik w
— , kt r— e przekroczy ¸ y dozwolon ¶ liczb cykli pracy lub godzin
4. System zapobiegnie u Ŕ yciu odczynnik —
w urz¶dzeniu, odczynnik—
w , kt—
r ych data waŔnoĎci up¸yn¸ a lub zmieszanych kaset z zestawu czterech kaset poprzednio uŔywanych
w systemie.
C.
Przetwarzanie pr b— ek
b kami i odczynnikami kontrolnymi nale Ŕ y unika ľ ska Ŕ enia r k awiczek.
1. Podczas pracy z pr —
2. Nale Ŕ y uwa Ŕ a ľ , aby unika ľ ska Ŕ enia pr —
b ek i odczynnika kontrolnego TS ( Đ ) dodatnimi odczynnikami kontrolnymi.
D.
Test identyfikuj ¶ cy
1. Przed identyfikacj ¶ wirusa pr b— ka musi zosta ľ zidentyfikowana w wa Ŕ nej puli i mie ľ wa Ŕ ny indywidualny wynik uzyskany przy pomocy
b k dodatni ¶ mo Ŕ na zbada ľ przy u Ŕ yciu test w
— identyfikuj ¶ cych: testu COBAS
testu cobas TaqScreen MPX. T indywidualna pr —
AmpliScreen HBV, testu COBAS AmpliScreen HCV v2.0 i testu COBAS AmpliScreen HIV-1 v1.5. Do identyfikacji HIV-1 grupy O i HIV-2
mog ¶ by ľ wymagane dodatkowe testy. Firma Roche nie dostarcza test w
— identyfikacyjnych dla HIV-1 grupy O i HIV-2.
2. Procedury tych test—
w identyfikacyjnych moŔna znaleŮľ w ulotkach do¸¶czonych do opakowania testu COBAS AmpliScreen HBV, testu
COBAS AmpliScreen HCV v2.0 i testu COBAS AmpliScreen HIV-1 v1.5.
SPOS B
î U řY CIA
System cobas s 201 obejmuje cztery g ¸—
w ne procesy: Pipetowanie pr b— ek i kontroli na urz ¶ dzeniu pipetuj ¶ cym HAMILTON STAR,
przygotowywanie pr b— ek w urz ¶ dzeniu COBAS AmpliPrep przy u Ŕ yciu testu cobas TaqScreen Multiplex (MPX), amplifikacj /detekcj na
analizatorze COBAS TaqMan.
Ka Ŕ dy zestaw testowy cobas TaqScreen MPX zawiera osiem kaset: dwie kasety MPX CS1 ze szklanymi cz ¶ stkami o w ¸ a Ď ciwo Ď ciach
magnetycznych, dwie kasety MPX CS2 z odczynnikiem litycznym, dwie kasety MPX CS3 z proteaz ¶ i buforem do elucji i dwie kasety MPX CS4
z wewnt rzn¶ kontrol¶, odczynnikiem 1 MMX i 2 MMX. Ten zestaw testowy jest uŔywany ¸¶cznie z zestawem kontrolnym cobas TaqScreen MPX
i odczynnikiem p ¸ ucz ¶ cym cobas TaqScreen MPX.
Nie nale Ŕ y otwiera ľ kaset. Nie ¸¶ czy ľ odczynnik —
w zrŔ
— nych serii ani z r —
Ŕ nych butelek z tej samej serii. Nie miesza ľ ze sob ¶ odczynnik —
w (w
tym r w
— nie Ŕ kaset) pochodz ¶ cych z r —
Ŕ nych zestaw —
w . Nie umieszcza ľ mieszanych serii odczynnik —
w w urz ¶ dzeniu COBAS AmpliPrep. Nie
oddziela ľ prob w
— ek kontrolnych od adapter w
—.
Nale Ŕ y wykonywa ľ wszystkie wymagane czynno Ď ci, zgodnie z opisem w Podr c zniku u Ŕ ytkownika.
Dok ¸ adne instrukcje u Ŕ ytkowania mo Ŕ na znale Ůľ w Podr c zniku u Ŕ ytkownika systemu cobas s 201.
A.
Pipetowanie odczynnik w
— kontrolnych i pr b
— ek przy pomocy urz ¶ dzenia pipetuj ¶ cego HAMILTON STAR
Uwaga: Podczas przygotowywania pr b
— ek i kontroli unikaj ska Ŕ enia r k awic.
Uwaga: Nie wytrz ¶ saj odczynnik —
w kontrolnych na mieszadle wibracyjnym.
1. Wykonaj procedury startowe na urz ¶ dzeniu pipetuj ¶ cym HAMILTON Microlab STAR IVD, a nast p nie uruchom zgodnie z instrukcjami
na ekranie program Roche PDM Pooling Wizard.
2. Uwa Ŕ aj, aby nie uszkodzi ľ identyfikacyjnego kodu kreskowego na pr b— kach i odczynnikach kontrolnych.
3. W¸—
Ŕ pr—
b ki, materia¸y eksploatacyjne i odczynniki kontrolne do urz¶dzenie pipetuj¶cego HAMILTON Microlab STAR IVD. Po w¸oŔeniu
pr —
b ek, materia ¸—
w eksploatacyjnych i odczynnik w
— kontrolnych urz ¶ dzenie przenosi odczynniki kontrolne i pr b— ki do prob —
w ek S.
4. Po zako –c zeniu pipetowania przejrzyj alarmy i wydrukuj raport(y) pulowania. Zbadaj pule i do ¸ ki na p ¸ ytki archiwalne. Uniewa Ŕ nij pule
i/lub do ¸ ki, je Ď li zaobserwujesz zabrudzenie czerwonymi krwinkami lub je Ď li obj t o Ď ci s ¶ r —
Ŕ ne.
w ki S i przenie Ď ramk (ramki) SK24 do urz ¶ dzenia COBAS AmpliPrep celem wykonania ekstrakcji kwas —
w
5. Zamknij zatyczkami prob —
nukleinowych.
6. Zamknij i przechowaj p ¸ ytki archiwalne (je Ď li p ¸ ytki zosta ¸ y utworzone podczas pipetowania).
7. Usu – i przechowaj prob w
— ki od dawc —
w . Warunki znajdziesz w rozdziale ăP obieranie, przechowywanie i mieszanie pr b— ek Ó .
8. Usu– i wyrzuľ prob—
w ki z odczynnikami kontrolnymi. (Prob—
w ki z odczynnikami kontrolnymi s¸uŔ¶ wy¸¶cznie do jednorazowego uŔytku.)
B.
Przygotowywanie i wk ¸ adanie odczynnik w
— do testu cobas TaqScreen MPX
Uwaga: Uwa Ŕ aj, aby nie uszkodzi ľ etykiet kaset. Czytnik kod w
— kreskowych na urz ¶ dzeniu COBAS AmpliPrep automatycznie
odczytuje kod kreskowy na etykiecie ka Ŕ dej z kaset, kiedy ramki z odczynnikami s ¶ w ¸ o Ŕ one do urz ¶ dzenia.
1. Ogrzewaj odczynniki przez 30 minut w urz¶dzeniu COBAS AmpliPrep przed opracowaniem pierwszej pr—
b ki. Nie jest wymagane Ŕadne
inne przygotowywanie odczynnik w
—.
2. Przed rozpocz c iem nale Ŕ y w ¸ o Ŕ y ľ odpowiedni ¶ liczb kaset, aby dostosowa ľ ich liczb do ca ¸ kowitej liczby pr —
b ek, kt r— e b d ¶
przetwarzane podczas ci ¶ g ¸ ej pracy urz ¶ dzenia COBAS AmpliPrep. Ka Ŕ da kaseta zawiera ilo Ďľ odczynnik —
w wystarczaj ¶ c ¶ do
przeprowadzenia 48 test—
w . Informacje na temat wk¸adania odczynnik—
w do pracy ci¶g¸ej moŔna znaleŮľ w Podrc zniku uŔytkownika
systemu cobas s 201.
3. Umie Ďľ kaset MPX CS1 w ramce na odczynniki, upewniaj ¶ c si , Ŕ e kod kreskowy kasety znajduje si w jednej linii z kodem
kreskowym ramki po ¸ o Ŕ onym po prawej stronie ramki. Kasety MPX CS1 nale Ŕ y w ¸ o Ŕ y ľ razem na osobnej ramce na odczynniki
oddzielnie od innych kaset.
4. W¸—
Ŕ ramk na odczynniki zawieraj¶c¶ kasety MPX CS1 w miejsce A na ramki, wsuwaj¶c w g—
r do ko¸ka blokuj¶cego na urz¶dzeniu
COBAS AmpliPrep, a nast p nie zaczekaj, a Ŕ dioda ramki na odczynniki stanie si zielona i dopiero wtedy wsu – ramk na ty ¸
urz ¶ dzenia na w ¸ a Ď ciwe miejsce. Nie wk ¸ adaj pomieszanych serii odczynnik w
— do urz ¶ dzenia.
5. Umie Ďľ po jednym zestawie kaset MPX CS2, MPX CS3 i MPX CS4 na ka Ŕ d ¶ kaset MPX CS1 do ramki na odczynnik(i) upewniaj ¶ c
si , Ŕ e kody kreskowe kasety s ¶ w jednej linii z kodem kreskowym ramki umieszczonymi po prawej stronie ramki.
8
6. W¸—
Ŕ ramk (ramki) na odczynniki w miejsca B, C, D, E wsuwaj¶c aŔ do ko¸ka na urz¶dzeniu COBAS AmpliPrep, a nastp nie zaczekaj,
a Ŕ dioda ramki na odczynniki stanie si zielona i dopiero wtedy wsu – ramk na ty ¸ urz ¶ dzenia na w ¸ a Ď ciwe miejsce.
7. Diody na pasku stanu urz¶dzenia COBAS AmpliPrep stan¶ si zielone, gdy wszystkie wymagane sk¸adniki zestawu zostan¶ w¸oŔone
i rozpoznane przez system.
C.
Ekstrakcja kwas w
— nukleinowych z pipetowanych pr b
— ek i pr b
— ek kontrolnych
Uwaga: Przeprowad Ů nast p uj ¶ ce etapy na czystej powierzchni sto ¸ u.
1. Usu – opakowanie celofanowe z pakietu jednostek przetwarzaj ¶ cych pr —
b ki (SPU), pozostawiaj ¶ c nietkni t ¶ niebiesk ¶ ta Ď m .
2. Umie Ďľ jednostki przetwarzaj ¶ ce pr b— ki (SPU) w najdalszej pozycji po prawej stronie ramki SPU tak, aby symbol firmy ROCHE by ¸
skierowany w kierunku przodu ramki.
¸ i ca ¸ kowicie osadzone w ramce. Uniesione SPU mog ¶
3. Usu – niebiesk ¶ ta Ď m i upewnij si , Ŕ e wszystkie SPU s ¶ wci Ď ni t e w d —
spowodowa ľ uszkodzenie urz ¶ dzenia. Nie naciskaj na ko –c —
w k S w SPU.
4. Wsu – w ¸ o Ŕ one ramki SPU do urz ¶ dzenia SPU COBAS AmpliPrep w pozycje I, J i K, a Ŕ zostan ¶ do ko –c a wsuni t e na pok ¸ ad
i rozpoznane. Jednocze Ď nie w urz ¶ dzeniu mo Ŕ e znajdowa ľ si do 72 SPU. W ¸—
Ŕ wymagan ¶ do testu liczb SPU lub, je Ď li to
potrzebne, w ¸—
Ŕ ich wi c ej.
5. Usu– opakowanie celofanowe z zapakowanych przez producenta ramek na prob—
w ki K i ko–c —
w ki K, uwaŔaj¶c przy tym, aby nie przewr
c i ľ ramek. Upewnij si , Ŕ e wszystkie s ¶ prawid ¸ owo osadzone.
—
6. Wsu – ramki na prob w
— ki K i ko –c —
w ki K w obszary na ramki wymienione w Podr c zniku u Ŕ ytkownika.
7. Utw —
r z polecenia u Ŕ ywaj ¶ c na stacji roboczej oprogramowania AMPLILINK.
8. W¸—
Ŕ ramki SK24 zawieraj¶ce pipetowane za pomoc¶ urz¶dzenia pipetuj¶cego HAMILTON Microlab STAR pr—
b ki i odczynniki kontrolne
do urz ¶ dzenia COBAS AmpliPrep w pozycje F, G i H. Wsu – ramk , a Ŕ si zablokuje. Sprawd Ů okno stanu systemu Sample, aby
upewni ľ si , Ŕ e wszystkie pr —
b ki w ka Ŕ dej ramce zosta ¸ y rozpoznane.
9. SprawdŮ oprogramowanie AMPLILINK, aby upewni ľ si , Ŕe do wymaganego przygotowania pr—
b ek w¸oŔone s¶ odpowiednie iloĎci
odczynnik —
w i materia ¸—
w eksploatacyjnych.
10. Naci Ď nij Start w oprogramowaniu AMPLILINK, aby rozpocz ¶ľ procedur przygotowania pr b— ek przez urz ¶ dzenie COBAS AmpliPrep.
— ki K i prob —
w ki K pozostan ¶ zamkni t e w urz ¶ dzeniu COBAS AmpliPrep Instrument do u Ŕ ycia w nast
11. Wszystkie nieu Ŕ ywane ko –c w
p nym przebiegu.
D.
Amplifikacja i detekcja
1. Przenie Ď ramk SK24 zawieraj ¶ c ¶ przetworzone pr —
b ki do analizatora COBAS TaqMan w ci ¶ gu 1 godziny po zako –c zeniu
przygotowania pr —
b ek na tej ramce. Analizator COBAS TaqMan automatycznie rozpocznie amplifikacj i detekcj . Wyniki z ramek
nieprzeniesionych w ci ¶ gu 1 godziny b d ¶ niewa Ŕ ne.
2. Po zako –c zeniu amplifikacji i detekcji na analizatorze COBAS TaqMan, analizowane pr —
b ki s ¶ automatycznie wyrzucane do pojemnika
na odpady.
3. Zaakceptuj wyniki na stacji roboczej AMPLILINK.
4. Wyniki s ¶ automatycznie przenoszone do oprogramowania PDM.
E.
Przegl ¶ danie i drukowanie wynik w
—
1. Uruchom stacj robocz ¶ Roche PDM.
2. Odzyskaj niesklasyfikowane partie w zak ¸ adce ăR eview Batches Ó w stacji roboczej Data Manager.
3. Przejrzyj alarmy pod Ď wietlaj ¶ c parti , a nast p nie klikaj ¶ c ăN ext Ó .
4. Przejrzyj wyniki odczynnik w
— kontrolnych w zak ¸ adce ăC ontrols Review Ó . Kryteria wa Ŕ no Ď ci kontroli mo Ŕ na znale Ůľ w rozdziale ăK
ontrola jako Ď ci Ó .
5. Przejrzyj wyniki puli w zak¸ adce ăA larms ReviewÓ dla wybranej partii. JeĎ li to konieczne, uŔytkownik moŔ e r c znie uniewaŔ niľ pule
ujemne. Pr b— ki od dawc —
w z niewa Ŕ nych pul nale Ŕ y przebada ľ ponownie.
6. Przejrzyj i wydrukuj dawc w
— w zak ¸ adce ăD onor Review Ó dla wybranej partii.
KONTROLA JAKO Ď CI
1. Z ka Ŕ d ¶ parti ¶ musi by ľ przetwarzana jedna kopia kontroli ujemnej [TS ( Đ ) C] i po jednej kopi ka Ŕ dej z pi c iu kontroli dodatnich
[HIV-1 M (+) C, HIV-1 O (+) C, HIV-2 (+) C, HCV (+) C i HBV (+) C].
2. Stan partii: Stan partii jest opisany jako ăC omplete, ValidÓ, gdy kontrole partii s¶ waŔne. JeĎli kontrole w partii s¶ niewaŔne, ca¸a partia
jest niewa Ŕ na.
a. Kontrola ujemna
Aby kontrola ujemna [TS ( Đ ) C] by ¸ a wa Ŕ na, interpretowany wynik musi by ľ ujemny, a do ¸¶ czona kontrola wewn t rzna musi by ľ
wa Ŕ na. Je Ď li kontrola wewn t rzna jest niewa Ŕ na, interpretowany wynik dla kontroli ujemnej jest r —
w nie Ŕ niewa Ŕ ny. Je Ď li
interpretowany wynik dla kontroli ujemnej jest niewa Ŕ ny, ca ¸ a partia jest niewa Ŕ na i nale Ŕ y j ¶ powt —
r zy ľ .
b. Kontrole dodatnie
Aby 5 kontroli dodatnich (HIV-1 M (+) C, HIV-1 O (+) C, HIV-2 (+) C, HCV (+) C i HBV (+) C) by ¸ o wa Ŕ nych, interpretowany wynik musi
by ľ dodatni, a do ¸¶ czona kontrola wewn t rzna musi by ľ wa Ŕ na. Je Ď li kontrola wewn t rzna jest niewa Ŕ na, interpretowany wynik dla
kontroli dodatniej jest r —
w nie Ŕ niewa Ŕ ny. Je Ď li interpretowany wynik dla kontroli dodatniej jest niewa Ŕ ny, ca ¸ a partia jest niewa Ŕ na
i nale Ŕ y j ¶ powt r— zy ľ .
Podsumowanie kryteri w
— akceptacji kontroli
Wynik materia ¸ u
docelowego
Wynik kontroli
wewn t rznej
Kontrola ujemna
Wa Ŕ ne ( Đ )
Wa Ŕ ne (warto Ďľ Ct)
Wa Ŕ ne
Kontrole dodatnie
Wa Ŕ ne (warto Ďľ Ct)
Wa Ŕ ne (warto Ďľ Ct)
Wa Ŕ ne
Wynik pr b
— ki
3. Kontrola wewn t rzna dla pr b— ek od dawc —
w
b ka od dawcy mia¸a waŔny ujemny (Đ) wynik testu, do¸¶czona kontrola wewnt rzna musi byľ waŔna; w innym przypadku
a. Aby pr—
ujemny wynik jest niewa Ŕ ny, a ca ¸¶ procedur testow ¶ nale Ŕ y powt —
r zy ľ .
b. Aby pr b— ka od dawcy mia ¸ a wa Ŕ ny dodatni (warto Ďľ Ct) wynik testu, do ¸¶ czona kontrola wewn t rzna musi by ľ albo wa Ŕ na, albo
niewa Ŕ na.
9
WYNIKI
1.
Wyniki pr—
b ek s¶ waŔne tylko w—
w czas, jeĎli zawieraj¶ca je partia jest waŔna. Kryteria kontroli jakoĎci moŔna znaleŮľ w rozdziale Kontrola
jako Ď ci. Dla ka Ŕ dej pr —
b ki mierzone s ¶ dwa parametry, jeden dla docelowych wirus —
w , drugi dla kontroli wewn t rznej.
2.
Ostateczne wyniki testu cobas TaqScreen MPX dla dawcy s ¶ przedstawiane przez oprogramowanie PDM nast p uj ¶ co:
3.
4.
Stan
Znaczenie
Complete Non-Reactive
Dawca jest ujemny dla badanego parametru (parametr —
w ).
Complete Reactive
Dawca jest dodatni dla badanego parametru (parametr —
w ).
Complete Unresolved
Termin wa Ŕ no Ď ci up ¸ yn ¶¸ zanim dawcy przypisano stan dodatni lub ujemny. Dla
tego dawcy na tym systemie nie mo Ŕ na przeprowadzi ľ Ŕ adnych dodatkowych test
w .
—
Dawcy, kt—
r zy wymagaj¶ dodatkowych bada–: Prob—
w ki dawc—
w , kt—
r ych stan puli jest niewaŔny, maj¶ przypisany stan ăR epeat NeededÓ,
a prob w
— ki dawc —
w zawarte w puli dodatniej maj ¶ przypisany stan ăR esolution Needed Ó .
Wymagana powt —
r zenie
Prob w
— ki dawc —
w ze stanem puli ăi nvalid Ó wymagaj ¶ powt —
r nego badania jako cz Ď ľ powtarzanej puli b ¶ d Ů pojedynczo.
Badanie puli Đ Resolution Needed
Kiedy przy badaniu puli system cobas s 201 podaje, Ŕ e jest ona dodatnia, dawcom z puli przypisany zostaje stan ăR esolution needed Ó ,
a urz ¶ dzenie HAMILTON STAR zostaje u Ŕ yte do odpipetowania pojedynczych pr b— ek dawc —
w , albo z p ¸ ytek archiwalnych, albo
oryginalnych prob —
w ek dawc —
w celem przeprowadzenia badania dochodzeniowego. Do identyfikacji pojedynczych dodatnich pr b— ek
uŔywany jest test cobas TaqScreen MPX przy wykorzystaniu tych samych metod (testowanych pojedynczo), co dla pr—
b ek w puli. Wszystkie
pojedyncze pr —
b ki, kt r— e okaza ¸ y si dodatnie mo Ŕ na bada ľ przy u Ŕ yciu test w
— COBAS AmpliScreen celem okre Ď lenia rodzaju wirusa.
Je Ď li jedna lub wi c ej pojedynczych pr b— ek ma wynik dodatni, dodatnia pr b— ka (pr —
b ki) s ¶ zg ¸ aszane jako ăC omplete, reactive Ó , a
pozosta ¸ e ujemne pr b— ki z dodatniej puli jako ăC omplete, Non-reactive Ó . Wszystkie pojedyncze pr b— ki od dawc —
w w puli ujemnej s ¶
zg ¸ aszane jako ăC omplete, non-reactive Ó .
Uwaga: Jako cz Ď ľ og l— nego programu kontroli jako Ď ci u Ŕ ytkownik mo Ŕ e chcie ľ przeprowadzi ľ dodatkowe badanie, aby
stwierdzi ľ przyczyn pocz ¶ tkowego dodatniego wyniku dla puli.
Badanie pojedynczych pr b
— ek Đ powtarzanie test —
w
Je Ď li dawca pocz ¶ tkowo badany na tym systemie pojedynczo ma wynik dodatni, u Ŕ ytkownik mo Ŕ e:
Ą
przeprowadzi ľ powt —
r ne badanie dla tej pr b— ki od dawcy w dw —
c h kopiach lub
zg ¸ osi ľ dawc jako dodatniego.
Ą
Je Ď li u Ŕ ytkownik wybiera ponowne zbadanie dawcy, urz ¶ dzenie pipetuj ¶ ce HAMILTON STAR zostaje u Ŕ yte do odpipetowania pr —
b ek
dawcy z oryginalnych prob —
w ek dawcy do powt —
r zenia testu. Je Ď li obie kopie pr —
b ek s ¶ ujemne, pr —
b ka jest zg ¸ aszana jako ăC omplete,
Non-reactive Ó ; je Ď li jedna lub obie kopie s ¶ dodatnie, pr —
b ka jest zg ¸ aszana jako ăC omplete, Reactive Ó . Ka Ŕ d ¶ pojedyncz ¶ pr —
b k , kt
r a uzyska ¸ a wynik dodatni mo Ŕ na dalej bada ľ za pomoc ¶ test w
—
— COBAS AmpliScreen Assays w celu okre Ď lenia rodzaju wirusa.
Uwaga: JeĎli obie kopie w powt—
r zonym badaniu s¶ ujemne, uŔytkownik moŔe chcieľ , jako czĎ ľ og—
l nego programu kontroli,
przeprowadzi ľ dodatkowe badanie, aby stwierdzi ľ przyczyn pocz ¶ tkowego dodatniego wyniku dla pr b
— ki.
Test identyfikuj ¶ cy
KaŔd¶ pr—
b k dodatni¶ w teĎcie cobas TaqScreen MPX moŔna dalej badaľ celem okreĎlenia, kt—
r y wirus (wirusy) zosta¸y wykryte: HIV1, HBV lub HCV. Procedury test —
w identyfikuj ¶ cych wirusy HIV-1 grupy M, HCV i HBV mo Ŕ na znale Ůľ w ulotkach do ¸¶ czonych do
opakowa – odpowiednio testu COBAS AmpliScreen HIV-1 Test, v1.5, testu COBAS AmpliScreen HCV v2.0 i COBAS AmpliScreen HBV. W
firmie Roche nie s ¶ dost p ne testy identyfikuj ¶ ce wirusy HIV-1 grupy O i HIV-2.
Je Ď li pojedyncza pr —
b ka dodatnia w te Ď cie cobas TaqScreen MPX jest ujemna we wszystkich trzech testach COBAS AmpliScreen,
u Ŕ ytkownik mo Ŕ e chcie ľ przeprowadzi ľ dodatkowe badania przy u Ŕ yciu test w
— badaj ¶ cych kwasy nukleinowe (NAT) lub test —
w
serologicznych lub mo Ŕ e wezwa ľ dawc w celu przeprowadzenia dalszych test —
w . U Ŕ ytkownicy powinni przestrzega ľ swoich w ¸ asnych
strategii/procedur w przypadku dalszej obserwacji dawcy i mo Ŕ liwego ponownego zakwalifikowania dawcy do oddawania krwi.
OGRANICZENIA METODY
1.
Test ten zosta ¸ zaprojektowany wy ¸¶ cznie do u Ŕ ytku z zestawem kontrolnym cobas TaqScreen MPX, odczynnikiem p ¸ ucz ¶ cym cobas
TaqScreen MPX i systemem cobas s 201.
Wykazano, Ŕ e heparyna hamuje reakcj PCR. Nie nale Ŕ y stosowa ľ osocza heparynizowanego do tej procedury.
2.
3.
Wiarygodne wyniki zale Ŕ ne s ¶ od zachowania odpowiednich procedur pobierania pr b— ek oraz transportu.
4.
Detekcja RNA HIV-1 grupy M, RNA HIV-1 grupy O, RNA HIV-2, RNA HCV i DNA HBV zale Ŕ y od liczby cz ¶ steczek wirusa obecnych w pr
b ce, i mog ¶ na ni ¶ mie ľ wp ¸ yw metody pobierania pr —
—
b ek, czynniki zwi ¶ zane z pacjentem (tj. wiek, obecno Ďľ objaw —
w ), i/lub faza
zaka Ŕ enia oraz wielko Ďľ puli.
5.
Do zautomatyzowanego przygotowywania pul osocza do testu cobas TaqScreen MPX wolno u Ŕ ywa ľ wy ¸¶ cznie urz ¶ dzenia pipetuj ¶ cego
HAMILTON Microlab STAR. Instrukcje sprzt owe i Ďrodki ostroŔnoĎci dotycz¶ce urz¶dzenia HAMILTON Microlab STAR moŔna znaleŮľ
w Podr c zniku u Ŕ ytkownika cobas s 201 i Podr c zniku u Ŕ ytkownika tego urz ¶ dzenia.
CHARAKTERYSTYKA WYDAJNO Ď CI
Powtarzalno Ďľ
PowtarzalnoĎľ testu cobas TaqScreen MPX Test z wykorzystaniem systemu cobas s 201 zosta¸a okreĎlona przez testowanie 12-elementowych
losowo dobieranych, paneli sk ¸ adaj ¶ cych si z dw —
c h ujemnych pr b— ek osocza i dw c— h dodatnich pr —
b ek osocza w ka Ŕ dym dla HIV-1 grupy
M, HIV-1 grupy O, HIV-2, HCV i HBV w st Ŕ eniach ok. 0,54 x i 3 x granica wykrywalno Ď ci (limit of detection Đ LOD) testu cobas TaqScreen MPX
dla ka Ŕ dego wirusa.
Badanie by¸o przeprowadzone w 3 oĎrodkach z 1 operatorem w kaŔdym oĎrodku z uŔyciem 3 serii zestawu testowego cobas TaqScreen MPX
— , co daje
i 1 systemu cobas s 201. W kaŔdym oĎrodku badano przez 5 dni 4 panele i 4 zestawy kontrolne z ka Ŕd ¶ z 3 serii zestawu odczynnik w
w sumie 180 test —
w na ka Ŕ d ¶ pr —
b k w panelu (w sumie 2160 test —
w ).
Wszystkie wa Ŕ ne powtarzalne wyniki zosta ¸ y ocenione przez obliczenie procentu dodatnich wynik —
w testu dla ka Ŕ dego elementu panelu. Dane
by ¸ y analizowane wg serii zestaw w
— i o Ď rodku/operatora.
Badanie to pokaza ¸ o sp —
j ne dzia ¸ anie testu cobas TaqScreen MPX niezale Ŕ nie od serii zestaw w
— i o Ď rodka/operatora.
10
Tabela 1: Test cobas TaqScreen MPX Test Đ wyniki powtarzalno Ď ci
Wirus
St Ŕ enie
Ujemny
0
HIV-1 grupa M
HIV-1 grupa O
HIV-2
HCV
HBV
HIV-1 grupa M
HIV-1 grupa O
HIV-2
HCV
HBV
0,54 x LOD*
0,54 x LOD*
0,54 x LOD*
0,54 x LOD*
0,54 x LOD*
3 x LOD*
3 x LOD*
3 x LOD*
3 x LOD*
3 x LOD*
Seria
zestawu
Wyniki dodatnie
wg serii
odczynnika
Test
O Ď rodek/operator
Wyniki dodatnie
wed ¸ ug testu
O Ď rodek/operator
A
0,0% (0/120)
1
0,0% (0/120)
B
0,0% (0/120)
2
0,0% (0/120)
C
0,0% (0/120)
3
0,0% (0/120)
A
75,0% (45/60)
1
75,0% (45/60)
B
80,0% (48/60)
2
71,7% (43/60)
C
75,0% (45/60)
3
83,3% (50/60)
A
96,7% (58/60)
1
100,0% (60/60)
B
98,3% (59/60)
2
95,0% (57/60)
C
98,3% (59/60)
3
98,3% (59/60)
A
83,3% (50/60)
1
73,3% (44/60)
B
81,7% (49/60)
2
80,0% (48/60)
C
73,3% (44/60)
3
85,0% (51/60)
A
81,4% (48/59)
1
71,7% (43/60)
B
78,3% (47/60)
2
71,2% (42/59)
C
61,7% (37/60)
3
78,3% (47/60)
A
98,3% (58/59)
1
96,7% (58/60)
B
98,3% (59/60)
2
98,3% (58/59)
C
95,0% (57/60)
3
96,7% (58/60)
A
100,0% (60/60)
1
98,3% (59/60)
B
98,3% (59/60)
2
100,0% (60/60)
C
100,0% (60/60)
3
100,0% (60/60)
A
100,0% (60/60)
1
100,0% (60/60)
B
100,0% (60/60)
2
100,0% (60/60)
C
100,0% (60/60)
3
100,0% (60/60)
A
100,0% (59/59)
1
100,0% (60/60)
B
100,0% (60/60)
2
100,0% (60/60)
C
100,0% (60/60)
3
100,0% (59/59)
A
100,0% (60/60)
1
100,0% (60/60)
B
100,0% (60/60)
2
100,0% (60/60)
C
100,0% (60/60)
3
100,0% (60/60)
A
100,0% (60/60)
1
100,0% (60/60)
B
100,0% (60/60)
2
100,0% (60/60)
C
100,0% (60/60)
3
100,0% (60/60)
* LOD Đ granica wykrywalno Ď ci
Czu ¸ o Ďľ analityczna Đ mi d zynarodowe standardy WHO/standardy firmy Roche
Granice wykrywalno Ď ci testu cobas TaqScreen MPX dla wirus —
w HIV-1 grupa M, HIV-1 grupa O, HIV-2, HCV i HBV okre Ď lono przy u Ŕ yciu nast
p uj ¶ cych standard —
w : Mi d zynarodowy Standard WHO dla HBV (kod NIBSC 97/746), Drugi Mi d zynarodowy Standard WHO dla HCV (kod
NIBSC 96/798) i standardy firmy Roche dla HIV-1 grupa M, HIV-1 grupa O i HIV-2. Standard firmy Roche dla HIV-1 grupa M jest dost p nym na
rynku roztworem hodowli wirusa (HIV-1 LAV 8E5, PN 227, Boston Biomedica, Inc.) skalibrowanym do Mi d zynarodowego Standardu WHO dla
RNA HIV-1 (kod NIBSC 97/656) przy uŔyciu testu COBAS TaqMan HIV-1 do stosowania w systemie High Pure. Nie s¶ aktualnie dostp ne Ŕadne
mi d zynarodowe standardy dla HIV-1 grupy O i HIV-2. Standardy firmy Roche dla HIV-1 grupy O i HIV-2 s ¶ dost p nymi na rynku roztworami
hodowli wirusa, PN 242O (Boston Biomedica, Inc.) i nr kat. 10-127-000 (Advanced Biotechnologies, Inc.). St Ŕ enia roztwor —
w wirus —
w HIV-1 grupy
O i HIV-2 zosta ¸ y podane przez producenta i s ¶ oparte na liczeniu wirion w
— w mikroskopie elektronowym.
Trzy niezaleŔne serie rozcie–c ze– kaŔdego standardu wirusowego zosta¸y przygotowane w, ujemnym pod wzgld em obecnoĎci wirus—
w ludzkim
osoczu. Wszystkie serie rozcie–c ze– badano przy uŔyciu trzech r—
Ŕ nych serii zestawu testowego cobas TaqScreen MPX z 22 kopiami na seri ,
co daje w sumie 198 kopii na dane st Ŕ enie. Do oszacowania 95% granicy wykrywalno Ď ci (Limit of Detection Đ LOD) i dwustronnego 95%
przedzia¸u ufnoĎci (tabela 2) zosta¸a uŔyta analiza PROBIT ¸¶cznych danych ze wszystkich kopii badanych dla kaŔdego wirusa. Tabele od 3 do
7 podsumowuj ¶ ca ¸ kowite wyniki badania czu ¸ o Ď ci analitycznej.
11
Tabela 2: Analiza probitowa przewidywanego st Ŕ enia dla 95% odsetka trafie –
Jednostki
Î redni 95% LOD
95% dolny zakres
przedzia ¸ u
ufno Ď ci
95% g —
r ny
zakres przedzia¸u
ufno Ď ci
HIV-1 grupa M
IU/ml
49,0
42,4
58,1
HIV-1 grupa O
kopii/ml
154
97
371
HIV-2
kopii/ml
2,2
1,9
2,6
HCV
IU/ml
10,7
7,0
21,7
HBV
IU/ml
3,7
3,3
4,4
Oznaczany
sk ¸ adnik
Tabela 3: Podsumowanie testu rozcie c
– zenia z drugim standardem firmy Roche dla HIV-1 grupa M Đ
¸¶ czne warto Ď ci wej Ď ciowe z 95% przedzia ¸ ami ufno Ď ci (jednostronnymi)
RNA HIV-1
grupa M
St Ŕ enie
(IU/ml)
Liczba wynik
w dodatnich
—
Liczba bada –
190
196
196
100%
98,5%
60
193
197
98,0%
95,4%
50
187
195
95,9%
92,7%
40
180
195
92,3%
88,4%
20
143
196
73,0%
67,2%
6
72
196
36,7%
31,0%
%
Wyniki dodatnie
Poziom dolnego
zakresu ufno Ď ci
95% (jednostronny)
Tabela 4: Podsumowanie testu rozcie c
– zenia z pierwszym standardem firmy Roche dla HIV-1 grupa O Đ
¸¶ czne warto Ď ci wej Ď ciowe z 95% przedzia ¸ ami ufno Ď ci (jednostronnymi)
RNA HIV-1
grupa O
St Ŕ enie
(kopii/ml)
Liczba wynik —
w
dodatnich
Liczba bada –
%
Wyniki
dodatnie
Poziom dolnego
zakresu ufno Ď ci
95% (jednostronny)
500
194
194
100%
98,5%
250
198
198
100%
98,5%
200
196
198
99,0%
96,9%
160
193
200
96,5%
93,5%
50
96
195
49,2%
43.1%
16
46
189
24,3%
19,3%
Tabela 5: Podsumowanie testu rozcie –
c zenia z pierwszym standardem firmy Roche dla HIV-2 Đ
¸¶ czne warto Ď ci wej Ď ciowe z 95% przedzia ¸ ami ufno Ď ci (jednostronnymi)
RNA HIV-2
St Ŕ enie
(kopii/ml)
Liczba wynik w
—
dodatnich
Liczba bada –
%
Wyniki
dodatnie
Poziom dolnego
zakresu ufno Ď ci
95% (jednostronny)
12,0
194
194
100,0%
98,5%
4,0
194
195
99,5%
97,6%
3.1
186
189
98,4%
95,9%
2,3
188
195
96,4%
93,4%
1,3
154
192
80,2%
74,9%
0,4
79
194
40,7%
34,8%
12
Tabela 6: Podsumowanie testu rozcie –
c zenia z Mi d zynarodowym Standardem WHO dla HCV (96/798) Đ
¸¶ czne warto Ď ci wej Ď ciowe z 95% przedzia ¸ ami ufno Ď ci (jednostronnymi)
HCV RNA
St Ŕ enie
(IU/ml)
Liczba wynik w
—
dodatnich
Liczba bada –
% wynik w
—
dodatnich
Poziom dolnego
zakresu ufno Ď ci
95% (jednostronny)
30,0
188
192
97,9%
95,3%
15,4
183
184
99,5%
97,4%
11,3
183
186
98,4%
95,9%
10,0
180
193
93,3%
89,5%
3,0
128
192
66,7%
60,6%
1,0
67
192
34,9%
29,2%
Tabela 7: Podsumowanie testu rozcie –
c zenia z Mi d zynarodowym Standardem WHO dla HBV (97/746) Đ
¸¶ czne warto Ď ci wej Ď ciowe z 95% przedzia ¸ ami ufno Ď ci (jednostronnymi)
Poziom dolnego
zakresu ufno Ď ci
95% (jednostronny)
HBV DNA
St Ŕ enie
(IU/ml)
Liczba wynik w
—
dodatnich
Liczba bada –
% wynik w
—
dodatnich
12,0
189
189
100,0%
98,4%
5,0
194
197
98,5%
96.1%
4,0
182
189
96,3%
93,2%
3,6
186
197
94,4%
90,9%
1,3
129
200
64,5%
58,5%
0,4
47
191
24,6%
19,5%
Czu ¸ o Ďľ i wy ¸¶ czno Ďľ wzgl d em genotypu/podtypu
Dzia ¸ anie testu cobas TaqScreen MPX zosta ¸ o okre Ď lone na podtypach HIV-1 grupa M, HIV-1 grupa O, HIV-1 grupa N oraz HIV-2 i na
genotypach HCV i HBV.
HIV-1 grupa M
TrzydzieĎci siedem klinicznych pr—
b ek HIV-1 Grupy M i 25 hodowli izolat—
w o znanym podtypie (7 podtyp A, 7 rekombinanty podtyp—
w AE, 12 podtyp
B, 9 podtyp C, 7 podtyp D, 5 podtyp E, 4 podtyp F, 8 podtyp G, 2 podtyp H i 1 podtyp J) zosta ¸ o oznaczonych ilo Ď ciowo testem COBAS AMPLICOR
HIV-1 MONITOR, v1.5, nast p nie rozcie c– zonych prawid ¸ owym, ujemnym na obecno Ďľ wirus —
w ludzkim osoczem do st Ŕ enia 3 x i 1 x granica
wykrywalno Ď ci (LOD) testu cobas TaqScreen MPX dla HIV-1 grupa M, a nast p nie zbadanych za pomoc ¶ testu cobas TaqScreen MPX.
Wszystkie 37 pr b— ek klinicznych i 25 izolat —
w hodowlanych by ¸ o dodatnich przy obu st Ŕ eniach (3 x i 1 x LOD).
Tabela 8: Pr b
— ki i hodowle izolat w
— HIV-1 grupa M
Podtyp
Pr —
b ki
kliniczne
Supernatanty
hodowli
Pe ¸ ne
izolaty
Dodatni przy
st Ŕ eniu
3 x LOD
Dodatni przy
st Ŕ eniu
1 x LOD
100% (7/7)
A
3
4
7
100% (7/7)
AE
7
0
7
100% (7/7)
100% (7/7)
B
10
2
12
100% (12/12)
100% (12/12)
C
7
2
9
100% (9/9)
100% (9/9)
D
2
5
7
100% (7/7)
100% (7/7)
E
0
5
5
100% (5/5)
100% (5/5)
F
1
3
4
100% (4/4)
100% (4/4)
G
4
4
8
100% (8/8)
100% (8/8)
H
2
0
2
100% (2/2)
100% (2/2)
J
1
0
1
100% (1/1)
100% (1/1)
HIV-1 grupa O i HIV-1 grupa N
Przebadano osiem wyhodowanych izolat —
w wirusa HIV-1 grupy O i jeden wyhodowany izolat wirusa HIV-1 grupy N. Poniewa Ŕ nie by ¸ a dost p na
Ŕ adna molekularna metoda oznaczenia izolat w
— wirusa HIV-1 grupy O i grupy N, roztwory z podstawowych kultur zosta ¸ y przygotowane
w normalnym osoczu ludzkim wolnym od wirusa i ka Ŕ dy roztw r— by ¸ sprawdzany za pomoc ¶ testu cobas TaqScreen MPX.
Wszystkie 8 izolat w
— wirusa HIV-1 grupy O zosta ¸ o wykrytych za pomoc ¶ testu cobas TaqScreen MPX we wszystkich rozcie –c zeniach od 1 x 10-7
do 1 x 10-8. Izolat wirusa HIV-1 grupy N zosta ¸ wykryty we wszystkich rozcie –c zeniach a Ŕ do 3,3 x 10 Đ 10.
HIV-2
Przebadano dziewi ľ wyhodowanych izolat —
w wirusa HIV-2 (5 podtyp w
— A, 1 podtyp A/B, podtyp B i 2 o nieznanym podtypie) oraz 11 pr —
b ek
klinicznych wirusa HIV-2 (nieznany podtyp). Poniewa Ŕ nie by¸a dostp na Ŕadna molekularna metoda oznaczenia izolat—
w wirusa HIV-2, roztwory
z podstawowych kultur zosta ¸ y przygotowane w normalnym osoczu ludzkim wolnym od wirusa i ka Ŕ dy roztw —
r by ¸ sprawdzany za pomoc ¶
testucobas TaqScreen MPX.
13
5 wyhodowanych izolat —
w podtypu A wirusa HIV-2 zosta ¸ o wykrytych za pomoc ¶ testu cobas TaqScreen MPX we wszystkich rozcie –c zeniach od
1 x 10-8 do 3,3 x 10-9. Izolat podtypu A/B wirusa HIV-2 zosta ¸ wykryty w rozcie c– zeniach a Ŕ do 1 x 10-9. Izolat podtypu B wirusa HIV-2 zosta ¸
wykryty w rozcie c– zeniach a Ŕ do 3,3 x 10-9. 2 wyhodowane izolaty wirusa HIV-2 o nieznanych podtypach zosta ¸ y wykryte w rozcie c– zeniach a Ŕ
do 3,3 x 10-9. Wszystkie 11 pr —
b ek klinicznych wirusa HIV-2 (nieznany podtyp) zosta ¸ o wykrytych za pomoc ¶ testu cobas TaqScreen MPX we
wszystkich rozcie –c zeniach a Ŕ do 1:100 (2 pr b— ki), 1:30 (3 pr b— ki), 1:10 (2 pr b— ki), 1:3 (3 pr b— ki) oraz nierozcie –c zona (1 pr —
b ka).
HCV
Siedemdziesi ¶ t cztery pr —
b ki kliniczne wirusa HCV (8 o genotypie 1a, 13 o genotypie 1b, 1o genotypie 2, 7 o genotypie 2a, 1 o genotypie 2a/c, 9
o genotypie 2b, 8 o genotypie 3a, 1 o genotypie 3a/b, 6 o genotypie 4, 1 o genotypie 4a, 1 o genotypie 4b/4c, 1 o genotypie 4h, 2 o genotypie 5, 9
o genotypie 5a, 2 o genotypie 6 i 4 o genotypie 6a) zosta¸y oszacowane za pomoc¶ testu COBAS AMPLICOR HCV MONITOR, v2.0, rozcie–c zone
z normalnym, pozbawionym wirusa ludzkim osoczem do st Ŕ enia 3 x i 1 x pr —
g wykrywalno Ď ci (LOD) w te Ď cie cobas TaqScreen MPX dla HCV,
i przebadane za pomoc ¶ testu cobas TaqScreen MPX.
Wszystkie siedemdziesi ¶ t cztery izolaty by ¸ y reaktywne w st Ŕ eniu 3 x LOD. W st Ŕ eniu 1x LOD 73 izolaty spo Ď r —
d 74 by ¸ y reaktywne. Jeden
izolat o genotypie 1 b by ¸ niereaktywny w st Ŕ eniu 1 x LOD, ale wykazywa ¸ reaktywno Ďľ w st Ŕ eniu 3 x LOD.
Tabela 9: Pr b
— ki z HCV
Genotyp
Reaktywne w st Ŕ
eniu 3 x LOD
Pr b
— ki kliniczne
Reaktywne w st Ŕ
eniu 1 x LOD
1a
8
100% (8/8)
100% (8/8)
1b
13
100% (13/13)*
92% (12/13)*
2
1
100% (1/1)
100% (1/1)
2a
7
100% (7/7)
100% (7/7)
2a/c
1
100% (1/1)
100% (1/1)
2b
9
100% (9/9)
100% (9/9)
3a
8
100% (8/8)
100% (8/8)
3a/b
1
100% (1/1)
100% (1/1)
4
6
100% (6/6)
100% (6/6)
4a
1
100% (1/1)
100% (1/1)
4b/4c
1
100% (1/1)
100% (1/1)
4h
1
100% (1/1)
100% (1/1)
5
2
100% (2/2)
100% (2/2)
5a
9
100% (9/9)
100% (9/9)
6
2
100% (2/2)
100% (2/2)
6a
4
100% (4/4)
100% (4/4)
* Jeden izolat o genotypie 1b by ¸ reaktywny w st Ŕ eniu 3 x LOD, ale niereaktywny w st Ŕ eniu 1 x
LOD.
HBV
SzeĎľdziesi¶t cztery pr—
b ki kliniczne z wirusem HBV i jeden klon molekularny o znanym genotypie (13 o genotypie A, 9 o genotypie B, 10 o genotypie
C, 9 o genotypie D, 14 o genotypie E, 6 o genotypie F, 2 o genotypie G i 2 o genotypie H) zosta¸y oszacowane przy pomocy testu COBAS AMPLICOR
HBV MONITOR, rozcie –c zone normalnym ludzkim osoczem pozbawionym wirusa do st Ŕ enia 3 x i 1 x LOD w te Ď cie cobas TaqScreen MPX dla
HBV, i przebadane za pomoc ¶ testu cobas TaqScreen MPX.
Wszystkie 65 pr b— ki by ¸ y reaktywne zar w
— no w st Ŕ eniu 3 x, jak i 1 x LOD.
Tabela 10: Pr —
b ki z HBV
Pr —
b ki kliniczne
Reaktywne w st Ŕ
eniu 3 x LOD
Reaktywne w st Ŕ
eniu 1 x LOD
A
13
100% (13/13)
100% (13/13)
B
9
100% (9/9)
100% (9/9)
C
10
100% (10/10)
100% (10/10)
Genotyp
D
9
100% (9/9)
100% (9/9)
E
14
100% (14/14)
100% (14/14)
F
6
100% (6/6)
100% (6/6)
G
2*
100% (2/2)
100% (2/2)
H
2
100% (1/1)**
100% (2/2)
*Jedna probka z genotypem G by ¸ a raczej plazmidem DNA ni Ŕ pr b— k ¶ kliniczn ¶ .
**Jeden izolat o genotypie H nie by ¸ testowany w st Ŕ eniu 3 x LOD z powodu niewystarczaj ¶ cej
ilo Ď ci.
14
Panele serokonwersji
Dzia ¸ anie testu cobas TaqScreen MPX w czasie serokonwersji zosta ¸ o okre Ď lone dla wirusa HIV-1 grupy M, HCV i HBV przy u Ŕ yciu 60 dost p
nych na rynku paneli serokonwersji. Niedost p ne s ¶ panele serokonwersji dla wirusa HIV-1 grupy O oraz wirusa HIV-2.
Panele serokonwersji dla wirusa HIV-1.
Dwadzie Ď cia dost p nych na rynku paneli serokonwersji otrzymanych od dawc —
w poddanych plazmaferezie, kt —
r zy przeszli serokonwersj
z wytworzeniem przeciwcia ¸ przeciwko HIV przetestowano za pomoc ¶ testu cobas TaqScreen MPX. Ka Ŕ da pr —
b k testowano w stanie
niezmienionym (nierozcie –c zonym) i rozcie c– zon ¶ w proporcji 1:6, aby symulowa ľ badanie w puli 6 dawc —
w . Wyniki testu cobas TaqScreen MPX
por —
w nano z wynikami otrzymanymi za pomoc ¶ oznacze – Abbott PRISM HIV O Plus i Abbott HIVAB HIV-1/HIV-2 EIA.
Test cobas TaqScreen MPX w pr b— kach w stanie niezmienionym (nierozcie c– zonych) wykry ¸ RNA wirusa HIV przed wykryciem przeciwcia ¸
b
przeciwko HIV z oznaczeniem Abbott PRISM HIV O Plus lub Abbott HIVAB HIV-1/HIV-2 EIA w 20 z 20 paneli. Test cobas TaqScreen MPX w pr —
kach czystych wykry¸ RNA wirusa HIV przed wykryciem przeciwcia¸ przeciwko HIV za pomoc¶ oznacze– Abbott PRISM HIV O Plus Assay i Abbott
HIVAB HIV-1/HIV-2 EIA Ď rednio w czasie 14 dni.
b kach 6-krotnie rozcie–c zonych wykry¸ RNA wirusa HIV przed wykryciem przeciwcia¸ przeciwko HIV za pomoc¶
Test cobas TaqScreen MPX w pr—
b kach 6-krotnie
oznacze– Abbott PRISM HIV O Plus Assay lub Abbott HIVAB HIV-1/HIV-2 EIA w 20 z 20 paneli. Test cobas TaqScreen MPX w pr—
rozcie –c zonych wykry ¸ RNA wirusa HIV przed wykryciem przeciwcia ¸ przeciwko HIV za pomoc ¶ oznacze – Abbott PRISM HIV O Plus i Abbott
HIVAB HIV-1/HIV-2 EIA Ď rednio w czasie 13 dni.
r e by ¸ y niereaktywne w testach
Panele reaktywne w te Ď cie cobas TaqScreen MPX podczas pierwszego pobrania krwi, panele, kt —
serologicznych dla wszystkich pobra – i panele z przerwami wi k szymi ni Ŕ 21 dni pomi d zy pierwszym reaktywnym pobraniem i wcze Ď niejszym
pobraniem zosta ¸ y wykluczone z ostatecznych oblicze – dla minimalnej, Ď redniej i maksymalnej liczby dni wcze Ď niejszego wykrycia ni Ŕ
przeciwcia ¸ a przeciwko HIV-1/2.
Tabela 11: Dzia ¸ anie testu cobas TaqScreen MPX w panelach serokonwersji dla wirusa HIV.
Dni wykrycia wczeĎniejszego niŔ przeciwcia¸a przeciwko HIV-1/2
za pomoc ¶
HIV Panel
serokonwersji
Uwagi
Abbott HIVAB HIV-1/HIV-2 EIA
Abbott PRISM HIV O Plus
Test cobas TaqScreen MPX
Bez rozcie –c
zenia
B.
C.
D.
E.
Bez rozcie c–
zenia
1:6
1
A
15
15
15
15
2
C
14
14
14
14
3
A
18
18
18
18
4
B, C
5
5
5
5
5
9
9
14
14
6
10
10
10
10
7
17
11
17
11
8
7
7
10
10
9
A.
1:6
10
10
10
10
10
B, D
13
13
13
13
11
19
19
19
19
12
25
25
25
25
13
19
14
19
14
14
7
7
7
7
15
19
19
19
19
16
E
89
89
9
9
17
B, C
7
7
7
7
18
B
11
14
11
14
19
11
7
11
7
20
15
15
15
15
Minimalnie
7
7
7
7
Î rednio
14
13
14
13
Maksymalnie
25
25
25
25
Wynik testu cobas TaqScreen MPX by ¸ reaktywny podczas pierwszego pobrania z serii nierozcie –c zonych i rozcie c– zonych w proporcji
1:6 pr —
b ek; pomini t y z oblicze – ko –c owych.
Bez serokonwersji do przeciwcia ¸ HIV za pomoc ¶ Abbott HIVAB HIV-1/HIV-2 EIA; pomini t e z ko –c owych oblicze – dla Abbott HIVAB
HIV-1/HIV-2 EIA.
Bez serokonwersji do przeciwcia¸ przeciwko HIV za pomoc¶ Abbott PRISM HIV O Plus; pominit y z oblicze– ko–c owych dla Abbott PRISM
HIV O Plus.
Pomini t e z oblicze – ko –c owych z powodu d ¸ ugiej przerwy (40 dni) pomi d zy pierwszym reaktywnym pobraniem badanym testem cobas
TaqScreen MPX a wcze Ď niejszym pobraniem.
Pominit e z oblicze– ko–c owych dla Abbott HIVAB HIV-1/HIV-2 EIA z powodu d¸ ugiej przerwy (80 dni) pomid zy pierwszym serologicznie
reaktywnym krwawieniem a wcze Ď niejszym krwawieniem.
15
Panele serokonwersji dla HCV
Dwadzie Ď cia dost p nych na rynku paneli serokonwersji otrzymanych od dawc —
w poddanych plazmaferezie, kt —
r zy przeszli serokonwersj
z wytworzeniem przeciwcia ¸ przeciwko HCV przetestowano za pomoc ¶ testu cobas TaqScreen MPX. Ka Ŕ d ¶ pr —
b k testowano w stanie
niezmienionym (bez rozcie –c zenia) i rozcie c– zon ¶ w proporcji 1:6, aby symulowa ľ badanie w puli 6 dawc —
w . Wyniki testu cobas TaqScreen MPX
por —
w nano z wynikami otrzymanymi za pomoc ¶ Abbott PRISM HCV Assay i ORTHO HCV Version 3.0 ELISA Test System.
Test cobas TaqScreen MPX w nierozcie c– zonych pr b— kach wykry ¸ RNA wirusa HCV przed wykryciem przeciwcia ¸ przeciwko HCV za pomoc ¶
oznacze – Abbott PRISM HCV oraz ORTHO HCV Version 3.0 ELISA Test System w 19 spo Ď r —
d 20 paneli, a tego samego dnia co wykrycie
b kach wykry¸ RNA wirusa HCV przed
przeciwcia¸ przeciwko HCV Đ w 1 spoĎr—
d 20 paneli. Test cobas TaqScreen MPX w nierozcie–c zonych pr—
wykryciem przeciwcia ¸ przeciwko HCV za pomoc ¶ oznacze – Abbott PRISM HCV oraz ORTHO HCV Version 3.0 ELISA Test System Ď rednio
w czasie odpowiednio 24 i 25 dni.
Test cobas TaqScreen MPX w 6-krotnie rozcie c– zonych pr b— kach wykry ¸ RNA wirusa HCV przed wykryciem przeciwcia ¸ przeciwko HCV za
pomoc ¶ oznacze – Abbott PRISM HCV Assay oraz ORTHO HCV Version 3.0 ELISA Test System w 19 spo Ď r —
d 20 paneli, a tego samego dnia co
wykrycie przeciwcia ¸ przeciwko HCV Đ w 1 spo Ď r —
d 20 paneli. Test cobas TaqScreen MPX w 6-krotnie rozcie c– zonych pr b— kach wykry ¸ RNA
wirusa HCV przed wykryciem przeciwcia ¸ przeciwko HCV za pomoc ¶ oznacze – Abbott PRISM HCV oraz ORTHO HCV Version 3.0 ELISA Test
System Ď rednio w czasie odpowiednio 23 i 24 dni.
Panele, kt —
r e reagowa ¸ y w te Ď cie cobas TaqScreen MPX podczas pierwszego pobrania, panele, kt —
r e by ¸ y niereaktywne w testach serologicznych
podczas wszystkich krwawie – oraz panele z przerwami wi k szymi ni Ŕ 21 dni pomi d zy pierwszym reaktywnym pobraniem a wcze Ď niejszym
pobraniem zosta ¸ y wykluczone z ostatecznych oblicze– dla minimalnej, Ď redniej i maksymalnej liczby dni wcze Ď niejszego wykrycia ni Ŕ przeciwcia ¸ a
HCV.
Tabela 12: Dzia ¸ anie testu cobas TaqScreen MPX w panelach serokonwersji dla wirusa HCV.
Wcze Ď niejsze wykrycie ni Ŕ przeciwcia ¸ a HCV
HCV Panel
serokonwersji
Uwagi
ORTHO HCV Version 3.0 ELISA
Abbott PRISM HCV Plus
Test cobas TaqScreen MPX
Bez rozcie –c
zenia
1:6
Bez rozcie c–
zenia
1:6
1
A
97
97
97
97
2
A
85
85
85
85
3
A
16
16
13
13
4
A
7
7
7
7
7
7
3
3
5
6
A, B
27
27
24
24
7
A
19
19
13
13
8
A
8
8
8
8
9
A
14
14
14
14
10
A, B
9
9
7
7
11
A
23
23
16
16
12
A
21
21
18
18
13
A
39
39
37
37
32
32
32
32
31
31
28
28
16
23
23
23
23
17
39
33
39
33
14
15
A
18
C
32
32
32
32
19
C
38
38
38
38
20
D
0
0
0
0
Minimalnie
7
7
3
3
Î rednio
25
24
24
23
Maksymalnie
39
33
39
33
A.
Wynik testu cobas TaqScreen MPX by ¸ reaktywny podczas pierwszego pobrania z serii nierozcie –c zonych i rozcie c– zonych w proporcji
1:6 pr —
b ek; pomini t y w obliczeniach ko –c owych.
B.
Bez serokonwersji do przeciwcia ¸ przeciwko HCV zgodnie z ORTHO HCV Version 3.0 ELISA; pomini t y w obliczeniach ko –c owych dla
ORTHO HCV Version 3.0 ELISA.
C.
Pomini t y w obliczeniach ko c– owych z powodu d ¸ ugiej przerwy (28 dni, panel 18; 31 dni, panel 19) pomi d zy pierwszym serologicznie
reaktywnym pobraniem a wcze Ď niejszym pobraniem.
D.
Pomini t y w obliczeniach ko –c owych z powodu d ¸ ugiej przerwy (69 dni) pomi d zy pierwszym pobraniem, kt —
r e by ¸ o niereaktywne we
wszystkich metodach a drugim pobraniem, kt —
r e by ¸ o reaktywne we wszystkich metodach.
Panele serokonwersji dla wirusa HBV
Dwadzie Ď cia dost p nych na rynku paneli serokonwersji otrzymanych od dawc —
w poddanych plazmaferezie, kt —
r zy przeszli serokonwersj
z wytworzeniem przeciwcia ¸ przeciwko HBsAg przetestowano za pomoc ¶ testu cobas TaqScreen MPX. Ka Ŕ d ¶ pr —
b k testowano w stanie
niezmienionym (nierozcie –c zonym) i rozcie c– zon ¶ w proporcji 1:6, aby symulowa ľ badanie w puli 6 dawc —
w . Wyniki testu cobas TaqScreen MPX
por —
w nano z wynikami otrzymanymi za pomoc ¶ oznacze – Abbott PRISM ¨ HBsAg Assay oraz ORTHO ¨ HBsAg ELISA Test System 3.
Test cobas TaqScreen MPX w nierozcie c– zonych pr b— kach wykry ¸ DNA wirusa HBV przed wykryciem HBsAg za pomoc ¶ oznaczenia Abbott
PRISM HBsAg w 17 spo Ď r —
d 20 paneli, w tym samym dniu co wykrycie HBsAg Đ w 2 spo Ď r —
d 20 paneli, i po wykryciu HBsAg Đ w 1 spo Ď r —
d
20 paneli. W por w
— naniu z oznaczeniem ORTHO HBsAg ELISA Test System 3, test cobas TaqScreen MPX wykry ¸ w nierozcie c– zonych pr b—
kach DNA wirusa HBV przed wykryciem HBsAg w 19 spo Ď r —
d 20 paneli i po wykryciu HBsAg Đ w 1 spo Ď r —
d 20 paneli. Test cobas TaqScreen
16
MPX w nierozcie –c zonych pr b— kach wykry ¸ DNA wirusa HBV przed wykryciem HBsAg za pomoc ¶ oznaczenia Abbott PRISM HBsAg Assay oraz
ORTHO HBsAg ELISA Test System 3 Ď rednio w czasie odpowiednio 19 i 24 dni.
Test cobas TaqScreen MPX w 6-krotnie rozcie c– zonych pr b— kach wykry ¸ DNA wirusa HBV przed wykryciem HBsAg za pomoc ¶ oznaczenia
Abbott PRISM HBsAg w 15 spoĎr—
d 20 paneli, w tym samym dniu co wykrycie HBsAg Đ w 3 spoĎr—
d 20 paneli, i po wykryciu HBsAg Đ w 2 spoĎr
d 20 paneli. W por w
—
— naniu z oznaczeniem ORTHO HBsAg ELISA Test System 3, test cobas TaqScreen MPX w 6-krotnie rozcie c– zonych pr b—
kach wykry ¸ DNA wirusa HBV przed wykryciem HBsAg w 17 spo Ď r —
d 20 paneli, w tym samym dniu co wykrycie HBsAg Đ w 2 spo Ď r —
d 20 paneli,
i po wykryciu HBsAg Đ w 1 spo Ď r —
d 20 paneli Test cobas TaqScreen MPX w sze Ď ciokrotnie rozcie –c zonych pr b— kach wykry ¸ DNA wirusa HBV
przed wykryciem HBsAg za pomoc ¶ oznacze – Abbott PRISM HBsAg Assay oraz ORTHO HBsAg ELISA Test System 3 Ď rednio w czasie
odpowiednio 8 i 13 dni.
Panele, kt —
r e by ¸ y reaktywne w te Ď cie cobas TaqScreen MPX w czasie pierwszego pobrania i panele z przerw ¶ wi k sz ¶ ni Ŕ 21 dni pomi d zy
pierwszym reaktywnym pobraniem a wcze Ď niejszym pobraniem zosta ¸ y pomini t e w obliczeniach ko –c owych. Dodatkowo, jeden panel, kt r— y
by ¸ reaktywny w oznaczeniu Abbott PRISM HBsAg w czasie pierwszego pobrania, i jeden panel, kt r— y by ¸ reaktywny w te Ď cie cobas TaqScreen
MPX z przerwami przekraczaj ¶ cymi okres 97 dni zosta ¸ pomini t y w obliczeniach ko –c owych minimalnej, Ď redniej i maksymalnej liczby dni
wcze Ď niejszego wykrycia ni Ŕ HBsAg.
Tabela 13: Dzia ¸ anie testu cobas TaqScreen MPX w panelach serokonwersji dla wirusa HBV.
Wcze Ď niejsze wykrycie ni Ŕ HBsAg
HBV Panel
serokonwersji
Uwagi
ORTHO HBsAg ELISA Test
System 3
Abbott PRISM HBsAg Plus
Test cobas TaqScreen MPX
Bez rozcie c
–
zenia
1
E
2
3
A, B
4
5
B, C, D
6
B.
C.
D.
E.
Bez rozcie –c
zenia
1:6
-5
-7
22
20
18
16
16
14
35
35
35
35
31
24
21
14
7
43
-36
0
21
0
21
0
7
A, B
8
8
4
4
8
A, B
13
13
9
9
9
A, B
14
14
7
7
10
A, B
18
18
7
7
28
16
26
14
11
A.
1:6
12
A, B
7
7
2
2
13
A, B
19
19
12
12
14
21
12
23
14
15
21
9
19
7
16
26
0
8
-18
0
17
D
12
12
0
18
A, B
18
18
7
7
19
A, C, D
35
12
0
-23
20
21
17
18
14
Minimalnie
18
0
8
-18
Î rednio
24
13
19
8
Maksymalnie
31
24
26
14
Test cobas TaqScreen MPX by ¸ reaktywny podczas pierwszego pobrania z serii nierozcie –c zonych pr b— ek; pomini t y w obliczeniach ko
c– owych.
Test cobas TaqScreen MPX by ¸ reaktywny podczas pierwszego krwawienia z serii rozcie –c zonych w proporcji 1:6 pr b— ek; pomini t y
w obliczeniach ko –c owych.
Test Abbott PRISM HBsAg by ¸ reaktywny w pierwszym pobraniu z serii; pomini t y z oblicze – ko –c owych dla testu Abbott PRISM HBsAg.
Pomini t y w obliczeniach ko –c owych z powodu d ¸ ugiej przerwy pomi d zy pierwszym reaktywnym pobraniem badanym testem cobas
TaqScreen MPX a wcze Ď niejszym pobraniem (panel 5: 36 dni, panel 17: 146 dni, panel 19: 23 dni).
Reaktywne wyniki testu cobas TaqScreen MPX dla nierozcie –c zonych pr b— ek w dniach 4, 16 i 26 niezamieszczone w obliczeniach dla ăW
ykrycia we wczeĎniejszych dniachÓ od dni 7,19, 23, 76 i 101 by¸y niereaktywne. Reaktywne wyniki testu cobas TaqScreen MPX Test dnia
4 dla rozcie c– zonych w proporcji 1:6 pr b— ek nieuwzgl d nionych w obliczeniach dla ăW ykrycia we wcze Ď niejszych dniach Ó , poniewa Ŕ
nast p ne 8 pr b— ek (dni 7 do 106) by ¸ y niereaktywne. Ten panel r —
w nie Ŕ pomini t o w obliczeniach ko c– owych z powodu d ¸ ugiego
reaktywnego okresu z przerwami.
17
Swoisto Ďľ analityczna Đ potencjalne mikroorganizmy mog ¶ ce wykazywa ľ reaktywno Ďľ krzy Ŕ ow ¶ i zak ¸—
c aj ¶ ce test
Analityczna specyficzno Ďľ testu cobas TaqScreen MPX zosta ¸ a oceniona przez badanie panelu 17 mikroorganizm —
w , w tym 12 izolat —
w
wirusowych, 4 szczep —
w bakteryjnych i jednego izolatu dro Ŕ d Ŕ y. Mikroorganizmy zosta ¸ y dodane do normalnego, pozbawionego wirus —
w
ludzkiego osocza i testowane z i bez wirusa HIV-1 grupy M, HIV-1 grupy O, HIV-2, HCV lub HBV dodanego do roztworu o st Ŕ eniu 3 x LOD dla
ka Ŕ dego wirusa w te Ď cie cobas TaqScreen MPX.
b ek mikroorganizm —
w bez dodanych wirus w
— HIV-1
Wyniki niereaktywne otrzymano za pomoc ¶ testu cobas TaqScreen MPX dla wszystkich pr —
grupy M, HIV-1 grupy O, HIV-2, HCV lub HBV. Badane mikroorganizmy nie daj ¶ reakcji krzy Ŕ owej w te Ď cie cobas TaqScreen MPX. Wyniki
reaktywne otrzymano dla wszystkich pr —
b ek mikroorganizm —
w z dodanymi wirusami HIV-1 grupy M, HIV-1 grupy O, HIV-2, HCV lub HBV. Badane
mikroorganizmy nie zak ¸—
c aj ¶ dzia ¸ ania testu cobas TaqScreen MPX.
Tabela 14: Badane mikroorganizmy
Analityczna specyficzno Ďľ Đ badane mikroorganizmy
Adenovirus 2
Wirus ludzki herpes 6
Staphylococcus aureus
Cytomegalowirus
Ludzki wirus T-limfotropowy, typ I
Candida albicans
Wirus Epstein-Barr
Ludzki wirus T-limfotropowy, typ II
Propionibacterium acnes
Wirus ospy wietrznej
Wirus zapalenia w ¶ troby typu A
Staphylococcus epidermis
Wirus Herpes simplex typu 1
Wirus grypy
Staphylococcus haemolyticus
Wirus Herpes simplex typu 2
Wirus zapalenia w ¶ troby typu G (GBV-C)
Specyficzno Ď c analityczna Đ inne stany chorobowe
Pr —
b ki osocza pobrane od 15 Đ 20 pacjent w
— z ka Ŕ dej z nast p uj ¶ cych kategorii chor b— (zaka Ŕ enie wirusem cytomegalii, zaka Ŕ enie wirusem
zapalenia w ¶ troby typu A, zaka Ŕ enie wirusem Epstein Barr i schorzenie autoimmunologiczne) zosta ¸ y przetestowane z lub bez wirusa HIV-1
grupy M, HIV-1 grupy O, HIV-2, HCV lub HBV dodanych do roztworu o st Ŕ eniu 3 x LOD dla ka Ŕ dego wirusa w te Ď cie cobas TaqScreen MPX.
Test cobas TaqScreen MPX daj ¶ cy niereaktywne wyniki dla wszystkich stan —
w chorobowych zawartych w pr —
b kach bez dodanych wirus —
w HIV1 grupy M, HIV-1 grupy O, HIV-2, HCV lub HBV, i reaktywne wyniki dla wszystkich stan w
— chorobowych zawartych w pr —
b kach z dodanymi
wirusami HIV-1 grupy M, HIV-1 grupy O, HIV-2, HCV lub HBV. Wy Ŕ ej wymienione stany chorobowe nie wp ¸ yn ¸ y na czu ¸ o Ďľ ani specyficzno Ďľ
testu cobas TaqScreen MPX.
Substancje potencjalnie wp ¸ ywaj ¶ ce na wynik testu
Endogenne substancje wp ¸ ywaj ¶ ce na wynik testu
Pr—
b ki osocza z nieprawid¸owo wysokim poziomem tr—
j gliceryd—
w (do wartoĎci 3186 mg/dl), hemoglobiny (do wartoĎci 472 mg/dl), niezwi¶zanej
bilirubiny (do 63 mg/dl), albumin (do 9,6 g/dl) oraz ludzkiego DNA (do 0,4 mg/dl) zosta ¸ y przetestowane z lub bez wirusa HIV-1 grupy M, HIV-1
grupy O, HIV-2, HCV i HBV dodane do roztworu o st Ŕ eniu 3 x LOD dla ka Ŕ dego wirusa w te Ď cie cobas TaqScreen MPX. Wy Ŕ ej wymienione
substancje endogenne nie wp ¸ yn ¸ y na czu ¸ o Ďľ ani specyficzno Ďľ testu cobas TaqScreen MPX. Pr —
b ki osocza z czerwonymi krwinkami
w nieprawid ¸ owo wysokim st Ŕ eniu (do 10% obj.) zosta ¸ y przetestowane z i bez wirusa HIV-1 grupy M, HIV-1 grupy O, HIV-2, HCV i HBV
dodanego do roztworu o st Ŕ eniu 3 x LOD dla ka Ŕ dego wirusa w te Ď cie cobas TaqScreen MPX. Osocze z czerwonymi krwinkami dodanymi do
2,5% (obj.) nie wp ¸ yn ¸ o na czu ¸ o Ďľ ani specyficzno Ďľ testu cobas TaqScreen MPX. Osocze z czerwonymi krwinkami dodanymi do 5,0% (obj.)
zmniejszy ¸ o czu ¸ o Ďľ testu cobas TaqScreen MPX dla wykrycia HCV. Osocze z czerwonymi krwinkami dodanymi do 10,0% (obj.) zak ¸—
c i¸o
czu ¸ o Ďľ cobas TaqScreen MPX dla wykrycia wirusa HBV, HCV, HIV-1 grupy O i HIV-2.
Substancje egzogenne wp ¸ ywaj ¶ ce na wynik testu
Normalne ludzkie pr b— ki osocza zawieraj ¶ ce nieprawid ¸ owo wysokie st Ŕ enie acetaminofenu (1324 µ mol/l), kwasu acetylosalicylowego
(3,62 µ mol/l), atorwastatyny (600 Eq/l), fluoksetyny (11,2 µ mol/l), loratadyny (0,78 µ mol/l), nadololu (3,88 µ mol/l), naproksenu (2170 µ mol/l),
paroksetyny (3,04 µ mol/l) i sertraliny (1,96 µ mol/l) testowano z i bez wirusa HIV-1 grupy M, HIV-1 grupy O, HIV-2, HCV i HBV dodano do roztworu
o st Ŕ eniu 3 x LOD dla ka Ŕ dego wirusa w te Ď cie cobas TaqScreen MPX. Wy Ŕ ej wymienione substancje egzogenne nie wp ¸ yn ¸ y na czu ¸ o Ďľ
ani specyficzno Ďľ testu cobas TaqScreen MPX.
SKUTECZNO Ďľ KLINICZNA
Reaktywno Ďľ w ca ¸ ej populacji dawc w
— krwi
Kliniczn ¶ specyficzno Ďľ testu cobas TaqScreen MPX okre Ď lono przez testowanie losowo wybranych donacji pe ¸ nej krwi w trzech zewn t rznych
laboratoriach. Badania przeprowadzono zar —
w no w pojedynczych donacjach krwi, jak i w pulach przygotowanych z r —
w nych obj t o Ď ci
pojedynczych donacji krwi. Ca ¸ kowita liczba 72.281 donacji krwi zosta ¸ a przetestowana za pomoc ¶ testu cobas TaqScreen MPX daj ¶ c
w rezultacie kliniczn ¶ specyficzno Ďľ 99,98% (72.266/72.281; 95% CI = 99,97 do 99,99) Dla pr —
b ek dawc —
w testowanych w formie spulowanej,
reaktywne pule by ¸ y dalej szczeg —
¸ owo analizowane przez dalsze testowanie pojedynczych donacji krwi sk ¸ adaj ¶ cych si na pul . Podczas
badania klinicznej specyficznoĎ ci, zosta¸ zidentyfikowany jeden dawca okre Ď lony jako ăp otencjalnie zaka Ůny Ó , dawca DNA HBV pozytywny, kt
r ego nie da ¸ o si wykry ľ przy zastosowaniu metod opartych na obecnych testach laboratoryjnych. Podsumowanie wynik w
—
— testu cobas
TaqScreen MPX w pulach przedstawiono w tabeli 15 poni Ŕ ej.
Tabela 15: Reaktywno Ďľ w pulach od honorowych dawc w
— krwi
Kategoria
Pule
Procent
Pule testowane
10 090
100%
Pule niereaktywne
10 054
99,64%
Pule pocz ¶ tkowo reaktywne
36
0,36%
Pule pocz ¶ tkowo reaktywne ze stanem dawcy
dodatniego
23
0,23%
Dodatnie pule spowodowane przypadkiem ăp
otencjalnie zaka Ů nym Ó
1
0,01%
Pule pocz ¶ tkowo reaktywne ze stanem dawcy
ujmenego (wynik fa ¸ szywie dodatni)
12
0,12%
18
PI Î MIENNICTWO
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
16.
17.
18.
19.
20.
21.
22.
23.
24.
25.
26.
27.
28.
29.
Kahn JO, Walker BD. Current Concepts: acute human immunodeficiency virus type 1 infection.acute human immunodeficiency virus type 1
infection.N Engl J Med.
Department of Health and Human Services Centers for Disease Control and Prevention, National Center for HIV, STD and TB Prevention,
Divisions of HIV/AIDS Prevention. Fact Sheet Đ Human Immunodeficiency Virus Type 2. Available at:
http://www.cdc.gov/hiv/pubs/facts/hiv2.htm. Accessed June 30, 2005.
O'Brien TR. HIV-2 Transmission: implications for spread of HIV-1. JAMA. 1994;271(12):903-904,
Choo Q-L, Weiner AJ, Overby LR, et al. Hepatitis C Virus: the major causative agent of viral non-A, non-B hepatitis. Br Med Bull.
1990;46(2):423-441,
Alter HJ. Descartes before the horse: I clone, therefore I am: the hepatitis C virus in current perspective. Ann Intern Med. 1991;115(8):644649,
Beasley RP. Hepatitis B virus as etiologic agent in hepatocellular carcinoma Đ epidemiological considerations.Hepatitis B virus as etiologic
agent in hepatocellular carcinoma Đ epidemiological considerations.Hepatology. 1982;2(suppl):21S-26S.
Feitelsonn M. Hepatitis B virus infection and primary hepatocellular carcinoma. Clin Microbiol Rev. 1992;14:257-301,
Mast EE, Alter MJ. Epidemiology of viral hepatitis: an overview. Semin Virol. 1993;4:273-283,
Zuckerman AJ. More than a third of the world's population has been infected with hepatitis B virus [letter]. BMJ. 1999;318:1213.
Maddrey WC. Hepatitis B: an important public health issue. J Med Virol. 2000;61:362-366,
Murthy KK, Henrard DR, Eichberg JW, et al. Redefining the HIV-infectious window period in the chimpanzee model: evidence to suggest
that viral nucleic acid testing can prevent blood-borne transmission. Transfusion. 1999;39:688-693,
Stramer SL, Glynn SA, Kleinman SH, et al. Detection of HIV-1 and HCV infections among antibody-negative blood donors by nucleic acidamplification testing. N Engl J Med.: 347.
Busch MP, Glynn SA, Stramer SL, et al. A new strategy for estimating risks of transfusion-transmitted viral infections based on rates of
detection of recently infected donors. Transfusion. 1999;39:688-693
Offergeld R, Faensen D, Ritter S, Hamouda O. Human immunodeficiency virus, hepatitis C and hepatitis B infections among blood donors in
Germany 2000-2002: risk of virus transmission and the impact of nucleic acid amplification testing. Euro Surveill. 2005;10(2):8-11.
Hitzler WE, Runkel S. Routine HCV PCR screening of blood donations to identify early HCV infection in blood donors lacking antibodies to
HCV. Transfusion. 1999;39:688-693
Roth WK, Weber M, Petersen D, et al. NAT for HBV and anti-HBc testing increase blood safety. Transfusion. 1999;39:688-693
Biswas R, Tabor E, Hsia CC, et al. Comparative sensitivity of HBV NATs and HBsAg assays for detection of acute HBV infection.
Transfusion. 1999;39:688-693
Mingeshi K, Yoshikawa A, Kishimoto S, et al. Superiority of minipool nucleic acid amplification technology for hepatitis B virus over
chemiluminescence immunoassay for hepatitis B surface antigen screening. Vox Sang. 2003;84:287-291,
Kleinman SH, Strong DM, Tegtmeier GE, et al. Hepatitis B virus (HBV) DNA screening of blood donations in minipools with the COBAS
AmpliScreen HBV test. Transfusion. 1999;39:688-693
Busch MP, Lee LL, Satten FA, et al. Time course of detection of viral and serologic markers preceding human immunodeficiency type 1
seroconversion: implications for screening blood and tissue donors. Transfusion. 1999;39:688-693
Yoshikawa A, Gotanda Y, Itabashi M, et al. Hepatitis B NAT virus-positive blood donors in the early and late stages of HBV infection:
analyses of the window period and kinetics of HBV DNA. Vox Sang.
Longo MC, Berninger MS, Hartley JL. Use of uracil DNA glycosylase to control carry-over contamination in polymerase chain reactions.
Gene. 1990;93:125-128,
Savva R, McAuley-Hecht K, Brown T, Pearl L. The structural basis of specific base-excision repair by uracil-DNA glycosylase. Nature.
1995;373:487-493,
Mol CD, Arvai AS, Slupphaug G, et al. Crystal structure and mutational analysis of human uracil-DNA glycosylase: structural basis for
specificity and catalysis. Cell. 1995;80:869-878,
Higuchi R, Dollinger G, Walsh PS, Griffith, R. Simultaneous amplification and detection of specific DNA sequences. Biotechnology (NY).
Heid CA, Stevens J, Livak JK, Williams PM. Real time quantitative PCR. Genome Res. 1996;6:986-994,
Richmond JY, McKinney RW, eds. Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories. HHS Publication Number (CDC) 99-8395,
1999.
Clinical and Laboratory Standards Institute. Protection of Laboratory Workers from Infectious Disease Transmitted by Blood, Body Fluids
and Tissue. Approved Guideline. CLSI Document M29-A. Villanova, PA:CLSI, 1997.
International Air Transport Association. Dangerous Goods Regulations. 41st ed. Quebec, Canada. 2000.
19
Ú
Distributed by:
Roche Molecular Systems, Inc., Branchburg, NJ 08876 USA
Cz ¸ onek Grupy Roche
Roche Diagnostics
Indianapolis, IN 46256 USA
(For Technical Assistance call the
Roche Response Center
toll-free: 1-800 526 1247)
Roche Diagnostics
H7V 4A2 Laval, Quebec
(For Technical Assistance call:
Pour toute assistance technique,
appeler le: 1-877 273 3433)
Roche Diagnostics (Schweiz) AG
CH-6343 Rotkreuz
Roche Diagnostics
F-38240 Meylan
Roche Diagnostics GmbH
D-68298 Mannheim, Germany
Distributore in Italia:
Roche Diagnostics SpA
Piazza Durante 11
I-20131 Milano
Roche Diagnostics S.L.
E-08006 Barcelona
Distribuidor em Portugal:
Roche Farmacêutica Química, Lda
P-2700 Amadora
ROCHE, COBAS, TAQMAN, TAQSCREEN, AMPLISCREEN, AMPLICOR, AMPLILINK, AMPERASE oraz AMPLIPREP s ¶ znakami towarowymi
firmy Roche.
ROCHE RESPONSE CENTER jest znakiem us ¸ ugowym firmy Roche.
Microlab ¨ i STAR s ¶ zarejestrowanymi znakami towarowymi Hamilton Company.
Armored RNA jest nazw ¶ opatentowanej technologii, opracowanej wsp —
l nie przez firm Ambion, Inc. oraz firm Cenetron Diagnostics LLC.
Produkt chroniony patentami zarejestrowanymi w USA pod numerami: 5 677 124, 5 919 625 oraz 5 939 262, a tak Ŕ e patentami zg ¸ oszonymi
w trakcie rejestracji. Armored RNA jest zarejestrowanym znakiem towarowym, nale Ŕ¶ cym do firmy Ambion oraz firmy Cenetron.
ProClin ¨ jest zarejestrowanym znakiem towarowym firmy Rohm i Haas Company.
Microcide SQ Ş jest znakiem towarowym firmy Global Biotechnologies, Inc.
PRISM ¨ jest zarejestrowanym znakiem towarowym firmy Abbott Laboratories.
ORTHO ¨ jest zarejestrowanym znakiem towarowym firmy Ortho-Clinical Pharmaceuticals, Inc.
Copyright 2006, Roche Molecular Systems, Inc. Wszystkie prawa zastrze Ŕ one.
4/2006
04788397001-03 ENGL
04877993001-01
Doc Rev. 1.0
20