Alpha-1-microglobulin - Serum Application Note

Alfa-1-mikroglobulina
Ogólny opis procedury
Opis procedury
Ogólne wytyczne do oznaczania
alfa-1-mikroglobuliny w moczu
Informacje ogólne
Przeznaczenie
Opis procedury dotyczy ilościowego oznaczenia alfa-1-mikroglobuliny w próbkach materiału pochodzenia ludzkiego
z wykorzystaniem urządzeń, dla których nie istnieją szczegółowe wytyczne (1). Należy sprawdzić wydajność
urządzenia wybranego przez klienta.
Zakres pomiarowy
Około 5–100 mg/L, w zależności od konkretnej partii kalibratora. Zakres może zostać poszerzony w przypadku
późniejszego zagęszczenia lub rozcieńczenia.
Zakres normy
0–7 mg/L (2). Zaleca się wyznaczenie zakresu normy dla lokalnej populacji.
Ustawienia urządzenia
Wytyczne odnośnie programowania urządzenia zamieszczono w punkcie „Sugerowane ustawienia urządzenia...” na
stronie 3.
Odczynniki
Przeciwciało
Bufor
Rozcieńczalnik
Kalibrator
Kontrole
Próbki
Mocz ludzki.
Stabilne przez 7 dni w temperaturze 2–8°C.
Stabilne przez 3 miesiące w temperaturze –20°C (przy jednorazowym zamrożeniu).
Zamrożone próbki należy rozmrażać w temperaturze 37°C i dobrze wymieszać przed wykonaniem oznaczenia.
Kalibrator
Rozcieńczenie standardów wykonuje się automatycznie w urządzeniu zgodnie z instrukcją lub ręcznie.
Bufor
Bufor jest gotowy do użytku. W analizatorze stabilne do 28 dni w temperaturze 2–12°C.
Przeciwciało
Przeciwciała należy wstępnie rozcieńczyć w zależności od końcowych ustawień.
W sporadycznych przypadkach wstępnie rozcieńczone przeciwciała są lekko mętne — zaleca się wówczas
przefiltrowanie ich przez filtr z błoną 0,22 µm.
Stabilność przeciwciał nierozcieńczonych: do terminu ważności podanego na etykiecie.
Stabilność przeciwciał rozcieńczonych: 28 dni w temperaturze 2–8°C.
Stabilność w urządzeniu: 28 dni w temperaturze 2–12°C.
Nr kat.
Q0495
S2007
S2005
X0975
X0976
X0977
Nazwa
Dako Polyclonal Rabbit Anti-Human Alpha-1-Microglobulin
Dako Reaction Buffer 1
Dako Dilution Buffer 1
Dako Human Urine Protein Calibrator
Dako Human Urine Protein Low Control
Dako Human Urine Protein High Control
Wydajność: 1 mL przeciwciał rozcieńczonych umożliwia dokonanie około 10 odczytów kuwet wzorców lub próbek
przy zastosowaniu 100 µL roztworu przeciwciał rozcieńczonych na test. Przy obliczaniu wymaganej objętości
odczynnika należy wziąć pod uwagę nieużyteczną objętość buteleczki.
Stabilność kalibracji
Zaleca się powtarzanie kalibracji co 28 dni, po zmianie partii odczynnika, przygotowaniu nowej porcji
rozcieńczonych przeciwciał, po przefiltrowaniu rozcieńczonych przeciwciał lub w przypadku, gdy jakość wyników
spadnie poniżej poziomu przyjętego w danym laboratorium. Należy jednak zweryfikować stabilność kalibracji dla
danego urządzenia.
Rozwiązywanie problemów
Jeśli wydajność jest nieakceptowalna, należy dokonać ponownej kalibracji. Zweryfikować odczynniki i procedurę.
Jeśli problem nie ustępuje, należy skontaktować się z dostawcą urządzenia lub obsługą techniczną firmy Dako.
(114734-001)
30 134.Q0495.01/PL/AHA/21.04.06 str. 1/3
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Alfa-1-mikroglobulina
Ogólny opis procedury
Przykładowe dane wydajnościowe na urządzeniu Hitachi 917
Czułość
Wartość gęstości optycznej (OD) około 0,40 w urządzeniu Hitachi 917 odpowiada stężeniu alfa-1-mikroglobuliny
wynoszącemu około 100 mg/L.
Limit detekcji
Szacunkowy limit detekcji wynosi 1,2 mg/L.
Precyzja
Precyzję wyznaczono metodą analizy ANOVA. W 6 seriach badano po trzy próbki z różnymi stężeniami alfa-1mikroglobuliny. W każdej serii każdą próbkę testowano 6 razy. Ponadto w każdej serii przeprowadzano nową
kalibrację.
A1M
Próbka
Odchylenie standardowe
(mg/L)
Razem
Całk.
wsp.
zmienności (%)
n
0,23
0,28
2,9
36
0,34
0,57
0,67
1,3
36
0,51
0,94
1,07
1,5
36
Wartość
średnia
(mg/L)
W serii
Między
seriami
1
10
0,15
2
52
3
73
Dokładność
W przypadku kontroli Dako Human Urine Protein Low `ontrol, nr kat. X0976, i Dako Human Urine Protein High
Control, nr kat. X0977, można spodziewać się odzysku alfa-1-mikroglobuliny na poziomie 85–115%.
Liniowość
Test jest liniowy w zakresie 2,5–500 mg/L.
Bezpieczny zakres
Nie stwierdzono nadmiernego stężenia antygenu dla stężenia alfa-1-mikroglobuliny do 1165 mg/L.
Zakłócenia
Nie obserwowano reaktywności krzyżowej ze znanymi białkami.
Nie stwierdzono zakłóceń przy stężeniach do 5 g/L kreatyniny, 50 g/L mocznika, 100 g/L glukozy, 25 mmol/L
wapnia i 5 g/L albuminy.
W pobliżu początku zakresu pomiarowego (zakres niskich wartości) w próbkach zawierających hemoglobinę i/lub
bilirubinę może być wykrywane za wysokie stężenie alfa-1-mikroglobuliny.
W próbkach moczu przebadano wszystkie leki opisane w pozycji literaturowej (3), zgodnie z zamieszczonymi tam
zaleceniami (4). Nie stwierdzono żadnych zakłóceń.
Porównanie metod
Oznaczanie alfa-1-mikroglobuliny zgodnie z niniejszą procedurą porównano z innymi dostępnymi komercyjnie
testami turbidymetrycznymi. Dane dostępne są na życzenie.
Piśmiennictwo
1. Blirup-Jensen S. Protein Standardization III: Method optimization: Basic principles for quantitative determination
of human serum proteins on automated instruments based on turbidimetry or nephelometry. Clin Chem Lab
Med 2001; 39:1098-1109.
2. Tencer J, Thysell H, Grubb A. Analysis of proteinuria: reference limits for urine excretion of albumin,
protein HC, immunoglobulin G, к- and λ-immunoreactivity, orosomucoid and α1-antitrypsin. Scand J Clin Lab
Invest 1996;56:691-700.
3. Sonntag O, Scholer A. Drug interference in clinical chemistry: recommendation of drugs and their
concentrations to be used in drug interference studies. Ann Clin Biochem 2001;38:376-85.
(114734-001)
30 134.Q0495.01/PL/AHA/21.04.06 str. 2/3
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Alfa-1-mikroglobulina
Ogólny opis procedury
Sugerowane ustawienia urządzenia dla alfa-1-mikroglobuliny surowicy ludzkiej
Zalecenia specjalne
Zasadnicza długość fali powinna wynosić 415 nm.
* Parametr
Sugerowane
Light path (mm)
Incubation time (s)
Sample dilution (Dil. factor)
Volume of prediluted sample (µL)
Sample volume (µL) (=Neat)
Diluent+Flush (for Sample+Reag) (µL)
Reaction buffer volume (µL)
PEG-conc. in Reac. buffer (%)
PEG-conc. in incubation volume (%)
Incubation volume (µL)
Antibody dilution (Ab dil. factor)
Volume of diluted antibody (µL)
Antibody volume (µL) (=Neat)
Diluent+Flush (for Antibody) (µL)
Total volume (µL)
Reaction time (s)
Total analysis time (s)
10
120
1
60
60
0
660
4
3,7
720
1
200
200
80
1000
300
420
Stosunek
Sample vol.(Neat)
Antibody vol.(Neat)
0,30
[0,28 – 0,32]
Relacja
PEG - conc. inincub. vol.(%) * Sample vol.(Neat)
Incub. vol.
0,31
[0,28 – 0,32]
Stosunek
Sample vol.(Neat)
Total vol.
PEG-conc. in Total volume (%)
0,060
[0,055 – 0,065]
Standardy
2,6
Mnożnik rozc.
Std 1 (Highest conc.)
Std 2
Std 3
Std 4
Std 5
Std 6 (Lowest conc.)
1,00
1,50
4,00
20,00
30,00
40,00
[2,6 – 2,8]
Względne fi
mnożnik stęż.
1,000
0,667
0,250
0,050
0,033
0,025
*
Szczegółowe wyjaśnienia poszczególnych parametrów zamieszczono we wprowadzeniu do „Introduction to Dako General Application Notes”
(Wstęp do procedur ogólnych Dako), nr kat. 30134, dostępnym na życzenie lub na stronie www.Dako.com.
[ ] Oznacza akceptowalny zakres na różnych urządzeniach.
fi Względny współczynnik stężenia stosowany do wyliczania względnych stężeń (RC(i)) alfa-1-mikroglobuliny w standardach z konkretnych partii
kalibratora (C(Cal)); RC(i) = fi x C(Cal).
(114734-001)
30 134.Q0495.01/PL/AHA/21.04.06 str. 3/3
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17