EnVision™ FLEX Mini Kit, High pH, (Link)

EnVision™ FLEX Mini Kit, High pH, (Link)
Nr kat. K8023
trzecia edycja
Zestaw zawiera odczynniki wystarczające do wykonania 125-190 testów. Do aparatów Autostainer Link.
Odczynniki opcjonalne
Nr kat.
Nazwa produktu
Testy
K8004
EnVision™ FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x)
200-430
K8005
EnVision™ FLEX Target Retrieval Solution, Low pH (50x)
200-430
K8006
EnVision™ FLEX Antibody Diluent
400-600
K8007
EnVision™ FLEX Wash Buffer (20x)
K8008
EnVision™ FLEX Hematoxylin, (Link)
400-600
K8009
EnVision™ FLEX+ Rabbit (LINKER), (Link)
130-200
K8021
EnVision™ FLEX+ Mouse (LINKER), (Link)
130-200
FLEX IHC Microscope Slides
500
Inne opcje
K8020
(128330-001)
P04138PL_01_K8023/2015.04 p.1/12
Spis treści
Strona
Przeznaczenie .............................................................................................................................. 3
Streszczenie i informacje ogólne .................................................................................................. 3
Odczynniki .................................................................................................................................... 4
A. Materiały dostarczane.......................................................................................................... 4
B. Materiały wymagane, ale niedostarczane ............................................................................ 4
C. Odczynniki opcjonalne......................................................................................................... 5
Środki ostroŜności ........................................................................................................................ 5
Przechowywanie........................................................................................................................... 7
Przygotowanie odczynników......................................................................................................... 7
Pobieranie i przygotowanie próbek ............................................................................................... 8
Procedura..................................................................................................................................... 8
A. Obróbka wstępna................................................................................................................. 9
B. Procedura barwienia .......................................................................................................... 10
Kontrola jakości .......................................................................................................................... 11
Interpretacja wyników ................................................................................................................. 11
Ograniczenia metody.................................................................................................................. 11
Objaśnienie symboli.................................................................................................................... 12
(128330-001)
P04138PL_01_K8023/2015.04 p.2/12
Przeznaczenie
Do stosowania w diagnostyce in vitro.
System detekcji Dako EnVision™ FLEX jest przeznaczony do stosowania w immunohistochemii, w
aparatach Autostainer Link. System wykrywa pierwotne przeciwciała mysie i królicze, a zachodząca
reakcja jest wizualizowana przy uŜyciu chromogenu EnVision™ FLEX DAB+ Chromogen. W przypadku
uŜycia z odczynnikiem EnVision™ FLEX+ Rabbit (LINKER) (nr kat. K8009) lub EnVision™ FLEX+
Mouse (LINKER) (nr kat. K8021) istnieje moŜliwość wzmocnienia sygnału odpowiednio pierwotnych
przeciwciał króliczych lub pierwotnych przeciwciał mysich. Odczynniki EnVision™ FLEX są
przeznaczone do stosowania na skrawkach tkankowych utrwalanych w formalinie i zatopionych w
parafinie.
Streszczenie i informacje ogólne
System detekcji Dako EnVision™ FLEX opracowano z myślą o maksymalnej wszechstronności i
optymalnym wykonywaniu odczynów w aparatach Autostainer Link zgodnie z protokołem zalecanym w
niniejszej ulotce.
Przed przystąpieniem do wykonywania odczynu utrwalone w formalinie i zatopione w parafinie skrawki
tkankowe muszą zostać poddane procedurom odparafinowania, nawodnienia, a następnie cieplnego
odmaskowania epitopu (HIER) przy uŜyciu metody wskazanej w ulotce dołączonej do opakowania
przeciwciał pierwotnych. NaleŜy równieŜ zapoznać się z częścią Procedura przygotowania materiału
3-w-1. Produkt o nr kat. K8023 zawiera odczynnik EnVision™ FLEX Target Retrieval Solution, High pH
(50x) (DM828). Zamiast tych odczynników moŜna uŜywać zalecanych produktów EnVision™ FLEX
Target Retrieval Solution, High pH (50x) (nr kat. K8004) albo EnVision™ FLEX Target Retrieval
Solution, Low pH (50x) (nr kat. K8005). W przypadku niektórych pierwotnych przeciwciał zamiast
cieplnego odmaskowania epitopu (HIER) naleŜy przeprowadzić trawienie enzymatyczne.
Aktywność peroksydazy endogennej naleŜy zablokować odczynnikiem EnVision™ FLEX PeroxidaseBlocking Reagent (SM801) wchodzącym w skład zestawu. Z uwagi na zastosowanie wysoce skutecznej
procedury płukania i obecność białek stabilizujących w składzie odczynników Dako nie jest konieczne
wykonywanie dodatkowych procedur blokujących w celu osłabienia nieswoistego odczynu tła.
Zalecany jest dostępny w zestawie rozcieńczony bufor EnVision™ FLEX Wash Buffer (20x) (DM831)
lub dostępny odczynnik opcjonalny (nr kat. K8007).
Zestaw nie zawiera przeciwciał pierwotnych. Zalecamy stosowanie przeciwciał z serii Dako FLEX
Ready-to-Use Primary Antibodies lub stęŜonych przeciwciał pierwotnych Dako. Do rozcieńczania
stęŜonych przeciwciał pierwotnych Dako zaleca się stosowanie odczynnika EnVision™ FLEX Antibody
Diluent (nr kat. K8006).
W celu opcjonalnego wzmocnienia sygnału króliczych przeciwciał pierwotnych moŜna zastosować
odczynnik EnVision™ FLEX+ Rabbit (LINKER) (nr kat. K8009). Informacje na temat wzmacniania
sygnału mysich przeciwciał pierwotnych moŜna znaleźć w dokumentacji produktu EnVision™ FLEX+
Mouse (LINKER) (nr kat. K8021 lub nr kat. K8002). Orientacyjnie: EnVision™ FLEX+ Rabbit (LINKER)
zapewnia 2- do 3-krotne wzmocnienie sygnału, a EnVision™ FLEX+ Mouse (LINKER) zapewnia 4- do
5-krotne wzmocnienie sygnału.
Odczynnik detekcyjny Dako EnVision™ FLEX /HRP (SM802) wchodzący w skład zestawu zawiera
szkielet dekstranowy, z którym sprzęŜonych jest wiele cząsteczek peroksydazy (HRP) i przeciwciał
wtórnych. Do przeprowadzenia reakcji sprzęŜenia stosowany jest specjalny odczynnik umoŜliwiający
związanie do 100 cząsteczek HRP i do 20 cząsteczek przeciwciał z jednym szkieletem.
System substratów w zestawie składa się z dwóch odczynników: EnVision™ FLEX DAB+ Chromogen
(DM827) – roztworu diaminobenzydyny (DAB) o wysokim stęŜeniu, oraz EnVision™ FLEX Substrate
Buffer (SM803) – zawierającego nadtlenek wodoru. Przed uŜyciem EnVision™ FLEX DAB+
Chromogen naleŜy rozcieńczyć w buforze EnVision™ FLEX Substrate Buffer. Produkt reakcji systemu
substratu ma kolor intensywnie brązowy i zlokalizowany jest w miejscu występowania antygenu.
Do barwienia kontrastowego zaleca się uŜycie odczynnika EnVision™ FLEX Hematoxylin
(nr kat. K8008). Odczynnik ten daje wyrazisty niebieski odczyn jądrowy.
(128330-001)
P04138PL_01_K8023/2015.04 p.3/12
Wybarwione skrawki tkankowe moŜna zatopić w środku wodnym lub opartym na rozpuszczalniku
organicznym.
Odczynniki
A. Materiały dostarczane
SM801
EnVision™ FLEX Peroxidase-Blocking Reagent
1 x 40 mL, gotowy do uŜycia
Bufor fosforanowy zawierający nadtlenek wodoru, 15 mmol/L NaN3 i
detergent.
SM802
EnVision™ FLEX /HRP
1 x 40 mL, gotowy do uŜycia
Dekstran sprzęŜony z peroksydazą i wtórnymi przeciwciałami kozimi
przeciwko immunoglobulinom króliczym i mysim. W buforowanym roztworze
zawierającym białko stabilizujące i konserwant.
DM827
EnVision™ FLEX DAB+ Chromogen
1 x 3 mL
Tetrachlorowodorek 3,3'-diaminobenzydyny w rozpuszczalniku organicznym.
Odczynnik ten moŜe mieć róŜny kolor, od wyraźnie fioletowego do
bezbarwnego, nie ma to jednak wpływu na działanie zestawu.
SM803
EnVision™ FLEX Substrate Buffer
5 x 20 mL
Roztwór buforowany zawierający nadtlenek wodoru i konserwant.
DM828
EnVision™ FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x)
3 x 30 mL, koncentrat 50x
Bufor Tris/EDTA, pH 9
DM831
EnVision™ FLEX Wash Buffer (20x)
2 x 1 L, koncentrat 20x
Roztwór soli fizjologicznej z buforem Tris o pH 7,6, zawierający preparat
Tween 20 (±0,1).
B. Materiały wymagane, ale niedostarczane
Aparat Autostainer Link
Aparat Dako PT Link
Dako Proteinase K, Ready-to-Use (w razie potrzeby)
Gotowe do uŜycia przeciwciała pierwotne Dako FLEX Ready-to-Use Primary Antibodies lub odpowiednio
rozcieńczone stęŜone pierwotne przeciwciała królicze lub mysie dostarczone przez firmę Dako
Dako FLEX Ready-to-Use Rabbit lub Mouse Universal Negative Control lub inny stosowny odczynnik
kontroli ujemnej dla przeciwciał pierwotnych
Przybory do aparatów Dako
Szkiełka mikroskopowe, np. FLEX IHC Microscope Slides
(128330-001)
P04138PL_01_K8023/2015.04 p.4/12
Odczynniki laboratoryjne ogólnego zastosowania do odparafinowania skrawków tkankowych
zatopionych w parafinie
Środek do zatapiania (wodny lub oparty na rozpuszczalniku organicznym) i szkiełka nakrywkowe
C. Odczynniki opcjonalne
K8004
DM828
EnVision™ FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x)
3 x 30 mL, koncentrat 50x
Bufor Tris/EDTA, pH 9
K8005
DM829
EnVision™ FLEX Target Retrieval Solution, Low pH (50x)
3 x 30 mL, koncentrat 50x
Bufor Citrate, pH 6,1
K8006
DM830
K8007
DM831
K8008
SM806
K8009
SM805
K8021
SM804
EnVision™ FLEX Antibody Diluent
120 mL, gotowy do uŜycia
Bufor Tris, pH 7,2, zawierający 15 mmol/L NaN3 i białko.
EnVision™ FLEX Wash Buffer (20x)
1 L, koncentrat 20x
Roztwór soli fizjologicznej z buforem Tris o pH 7,6, zawierający preparat Tween
20 (±0,1).
EnVision™ FLEX Hematoxylin
3 x 45 mL, gotowy do uŜycia
Wodny roztwór hematoksyliny.
EnVision™ FLEX+ Rabbit (LINKER)
40 mL, gotowy do uŜycia
Buforowany roztwór zawierający białko stabilizujące i środek przeciwbakteryjny.
Ilość odczynnika wystarcza na 130–200 testów przy załoŜeniu, Ŝe na jeden test
zuŜywa się 200–300 µL.
EnVision™ FLEX+ Mouse (LINKER)
40 mL, gotowy do uŜycia
Buforowany roztwór zawierający białko stabilizujące i środek przeciwbakteryjny.
Ilość odczynnika wystarcza na 130–200 testów przy załoŜeniu, Ŝe na jeden test
zuŜywa się 200–300 µL.
Środki ostroŜności
1.
Odczynniki są przeznaczone dla przeszkolonych uŜytkowników.
(128330-001)
P04138PL_01_K8023/2015.04 p.5/12
2.
3.
4.
Produkty EnVision™ FLEX /HRP, EnVision™ FLEX+ Mouse (LINKER) oraz EnVision™ FLEX+
Rabbit (LINKER) zawierają materiał pochodzenia zwierzęcego, a biorąc pod uwagę procedury
wytwarzania, nie moŜna wykluczyć, Ŝe znajdują się w niej śladowe ilości materiału pochodzenia
ludzkiego. Podobnie jak w przypadku kaŜdego produktu otrzymywanego z materiału biologicznego,
naleŜy stosować odpowiednie procedury postępowania.
W czasie procedury nie wystawiać odczynników EnVision™ FLEX Peroxidase-Blocking Reagent,
EnVision™ FLEX /HRP, EnVision™ FLEX Substrate Buffer, EnVision™ FLEX DAB+ Chromogen,
roztworu roboczego substratów EnVision™ FLEX Substrate Working Solution lub EnVision™
FLEX Hematoxylin na działanie silnego światła.
EnVision™ FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x) i EnVision™ FLEX Target Retrieval
Solution, Low pH (50x) zawiera 5-<10% Nonoxinol:
Uwaga
5.
H319
Działa draŜniąco na oczy.
H411
Działa toksycznie na organizmy wodne, powodując długotrwałe skutki.
P280
Stosować ochronę oczu lub twarzy.
P273
Unikać uwolnienia do środowiska.
P264
Dokładnie umyć ręce po uŜyciu.
P305 + P351 +
P338
W PRZYPADKU DOSTANIA SIĘ DO OCZU: OstroŜnie płukać wodą przez
kilka minut. Wyjąć soczewki kontaktowe, jeŜeli są i moŜna je łatwo usunąć.
Nadal płukać.
P337 + P313
Jeśli podraŜnienie oczu się utrzymuje: Zgłosić się do lekarza po poradę.
P501
Zawartość i pojemnik usuwać zgodnie z lokalnymi, regionalnymi, krajowymi i
międzynarodowymi przepisami.
EnVision™ FLEX Wash Buffer (20x) zawiera 10-30% 2-Amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol
hydrochloride:
Uwaga
H319
Działa draŜniąco na oczy.
H315
Działa draŜniąco na skórę.
P280
Stosować rękawice ochronne. Stosować ochronę oczu lub twarzy.
P264
Dokładnie umyć ręce po uŜyciu.
P302 + P352 +
P362-2 + P363
W PRZYPADKU KONTAKTU ZE SKÓRĄ: Umyć duŜą ilością wody z
mydłem. Zdjąć zanieczyszczoną odzieŜ. Wyprać zanieczyszczoną odzieŜ
przed ponownym uŜyciem.
P332 + P313
W przypadku wystąpienia podraŜnienia skóry: Zgłosić się do lekarza po
poradę.
P305 + P351 +
P338
W PRZYPADKU DOSTANIA SIĘ DO OCZU: OstroŜnie płukać wodą przez
kilka minut. Wyjąć soczewki kontaktowe, jeŜeli są i moŜna je łatwo usunąć.
Nadal płukać.
P337 + P313
Jeśli podraŜnienie oczu się utrzymuje: Zgłosić się do lekarza po poradę.
6. W przypadku EnVision™ FLEX Peroxidase-Blocking Reagent karta charakterystyki substancji
niebezpiecznej jest dostępna na Ŝądanie uŜytkowników.
(128330-001)
P04138PL_01_K8023/2015.04 p.6/12
7.
EnVision™ FLEX DAB+ Chromogen zawiera 1–5% tetrachlorowodorku 3,3’-diaminobenzydyny i
jest oznaczony jako:
H350
Niebezpieczeństwo
MoŜe powodować raka.
H341
Podejrzewa się, Ŝe powoduje wady genetyczne.
P201
Przed uŜyciem zapoznać się ze specjalnymi środkami ostroŜności.
P202
Nie uŜywać przed zapoznaniem się i zrozumieniem wszystkich środków
bezpieczeństwa.
P280
Stosować rękawice ochronne. Nosić okulary ochronne lub ochronę twarzy.
Stosować odzieŜ ochronną.
P308 + P313
W PRZYPADKU naraŜenia lub styczności: Zwrócić się o pomoc lekarską.
P405
Przechowywać pod zamknięciem.
P501
Zawartość i pojemnik usuwać zgodnie z lokalnymi, regionalnymi, krajowymi
i międzynarodowymi przepisami.
8. EnVision™ FLEX Antibody Diluent (nr kat. K8006) zawiera silnie toksyczny związek – azydek sodu
(NaN3), w czystej postaci. StęŜenie azydku sodu występujące w produkcie nie jest klasyfikowane
jako niebezpieczne. Jednak w wyniku reakcji azydku sodu z ołowiem lub miedzią, wchodzącymi w
skład instalacji kanalizacyjnych, mogą powstawać silnie wybuchowe azydki metali. Przy usuwaniu
resztek odczynnika uŜywać duŜych ilości wody do przepłukiwania, aby uniknąć gromadzenia się
azydków w instalacji kanalizacyjnej.
9. NaleŜy stosować właściwe wyposaŜenie ochronne, zabezpieczające przed kontaktem odczynnika
ze skórą bądź oczami.
10. Niewykorzystany odczynnik naleŜy usuwać zgodnie ze stosownymi przepisami lokalnymi i
krajowymi.
Przechowywanie
Odczynniki EnVision™ FLEX i EnVision™ FLEX+ naleŜy przechowywać w temperaturze 2–8°C.
Odczynniki EnVision™ FLEX Peroxidase-Blocking Reagent, EnVision™ FLEX /HRP i EnVision™
FLEX Substrate Buffer naleŜy przechowywać bez dostępu światła w temperaturze 2–8°C.
Odczynnik EnVision™ FLEX Hematoxylin (nr kat. K8008) naleŜy przechowywać w temperaturze
pokojowej, bez dostępu światła. Nie naleŜy uŜywać odczynników po upływie terminu waŜności
podanego na fiolce. JeŜeli odczynniki są przechowywane w warunkach innych niŜ podane na ulotce
dołączanej do opakowania, UŜytkownik powinien je zweryfikować. Przygotowany roztwór roboczy
substratów powinien być przechowywany w miejscu bez dostępu światła w temperaturze 2–8°C, i
zuŜyty w ciągu 5 dni. W wypadku nieoczekiwanego wyniku odczynu, którego nie moŜna wyjaśnić
róŜnicami w procedurach laboratoryjnych, gdy podejrzewa się problem z produktem, naleŜy się
skontaktować z działem wsparcia technicznego firmy Dako.
Przygotowanie odczynników
A.1 EnVision™ FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x) (DM828, nr kat. K8004)
NaleŜy rozcieńczyć roztwór EnVision™ FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x) w stosunku 1:50
w wodzie destylowanej lub dejonizowanej, w ilości wystarczającej do wykonania planowanej procedury.
Jeśli aparat Dako PT Link jest uŜywany do obróbki wstępnej, naleŜy przygotować rozcieńczenie,
przelewając zawartość fiolki roztworu Target Retrieval Solution (50x) do zbiornika aparatu Dako PT
Link i dopełniając wodą destylowaną lub dejonizowaną do linii oznaczenia (Fill Line). NieuŜywany
rozcieńczony bufor moŜna przechowywać w temperaturze 2–8°C przez jeden miesiąc. W przypadku
zmętnienia roztwór nie nadaje się do uŜycia.
(128330-001)
P04138PL_01_K8023/2015.04 p.7/12
W przypadku wykorzystania w aparacie PT Link procedury do przygotowania preparatu 3-w-1 i
przechowywania w temperaturze pokojowej, rozcieńczonego roztworu moŜna uŜywać 3 razy dziennie
przez 5 dni.
A.2 EnVision™ FLEX Target Retrieval Solution, Low pH (50x) (DM829, nr kat. K8005)
NaleŜy rozcieńczyć roztwór EnVision™ FLEX Target Retrieval Solution, Low pH (50x) w stosunku 1:50
w wodzie destylowanej lub dejonizowanej, w ilości wystarczającej do wykonania planowanej procedury.
Jeśli aparat Dako PT Link jest uŜywany do obróbki wstępnej, naleŜy przygotować rozcieńczenie,
przelewając zawartość fiolki roztworu Target Retrieval Solution (50x) do zbiornika aparatu Dako PT
Link i dopełniając wodą destylowaną lub dejonizowaną do linii oznaczenia (Fill Line). NieuŜywany
rozcieńczony bufor moŜna przechowywać w temperaturze 2–8°C przez jeden miesiąc. W przypadku
zmętnienia roztwór nie nadaje się do uŜycia. W przypadku wykorzystania w aparacie PT Link
procedury do przygotowania preparatu 3-w-1 i przechowywania w temperaturze pokojowej,
rozcieńczonego roztworu moŜna uŜywać 3 razy dziennie przez 5 dni.
A.3 EnVision™ FLEX Wash Buffer (20x) (DM831, nr kat. K8007)
NaleŜy rozcieńczyć bufor EnVision™ FLEX Wash Buffer (20x) w stosunku 1:20 w wodzie destylowanej lub
dejonizowanej, w ilości wystarczającej do wykonania planowanej procedury. Rozcieńczyć przez dodanie
stęŜonego roztworu buforu do wstępnie odmierzonej ilości wody destylowanej lub dejonizowanej, aby
zminimalizować tworzenie piany. Mieszać delikatnie do momentu otrzymania jednorodnego
rozcieńczonego roztworu. NieuŜywany rozcieńczony roztwór moŜna przechowywać w temperaturze
2–8°C przez jeden miesiąc. W przypadku zmętnienia roztwór nie nadaje się do uŜycia. W przypadku
wykorzystania w aparacie PT Link procedury do przygotowania preparatu 3-w-1 i przechowywania w
temperaturze pokojowej, rozcieńczonego roztworu moŜna uŜywać 3 razy dziennie przez 5 dni.
A.4 EnVision™ FLEX Substrate Working Solution
Roztwór roboczy substratów DAB EnVision™ FLEX przygotowuje się, dokładnie mieszając 1 kroplę
odczynnika EnVision™ FLEX DAB+ Chromogen (DM827) na 1 mL odczynnika EnVision™ FLEX
Substrate Buffer (SM803). Roztwór roboczy substratów EnVision™ FLEX Substrate Working Solution
naleŜy zuŜyć w ciągu 5 dni (przechowywać w miejscu bez dostępu światła, w temperaturze 2–8°C).
Pobieranie i przygotowanie próbek
Próbki powinny mieć postać skrawków utrwalanych w formalinie i zatapianych w parafinie.
Czas utrwalania zaleŜy od substancji utrwalającej i typu/grubości tkanki. Na przykład bloczki preparatów
o grubości 3–4 mm naleŜy utrwalać w obojętnej zbuforowanej formalinie przez okres 18–24 godzin.
Optymalna grubość skrawków zatopionych w parafinie wynosi około 4 µm.
Próbki naleŜy zatapiać na szkiełkach mikroskopowych, np. FLEX IHC Microscope Slides (nr kat. K8020).
Próbki powinny być umieszczone na szkiełkach maksymalnie płasko i bez fałdowania. Zbyt duŜe
pofałdowanie będzie miało wpływ na wynik odczynu.
UWAGA: NaleŜy uŜywać szkiełek mikroskopowych o szerokości odpowiedniej do aparatu Autostainer
Link. Informacje na temat wymaganych parametrów szkiełek mikroskopowych moŜna znaleźć w
instrukcji obsługi uŜywanego aparatu Dako.
Skrawki parafinowe naleŜy zatapiać z podgrzanej łaźni wodnej z wodą destylowaną lub dejonizowaną.
Łaźnia wodna nie powinna zawierać Ŝadnych dodatków (takich jak Ŝelatyna, poli-L-lizyna itp.). Skrawki
powinny być suszone przez ogrzewanie, zasadniczo w temperaturze nieprzekraczającej 60°C przez co
najmniej 60 minut. Aby zapewnić właściwe przyleganie skrawków do szkiełek, waŜne jest osuszenie
wody spod skrawków przed rozpoczęciem suszenia.
Procedura
W aparatach Autostainer Link stosowane są róŜne techniki umoŜliwiające uzyskanie optymalnych
wyników barwienia. Przed uŜyciem wybranego protokołu w aparacie Autostainer Link naleŜy dokładnie
zapoznać się z instrukcją obsługi tego aparatu Dako.
W celu zapewnienia powtarzalności odmaskowywania epitopu zaleca się kaŜdorazowo wypełniać
uchwyt na szkiełka szkiełkami mikroskopowymi. UmoŜliwia to jednakowe ogrzewanie sekcji w
poszczególnych przebiegach.
(128330-001)
P04138PL_01_K8023/2015.04 p.8/12
A. Obróbka wstępna
Zalecana procedura przygotowania preparatu 3-w-1 przy uŜyciu aparatu PT Link:
Odparafinowanie, ponowne nawodnienie i cieplne odmaskowanie epitopu (HIER) moŜna wykonać na
utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawkach tkankowych przy uŜyciu procedury
przygotowania próbki 3-w-1:
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
Przygotować roztwór roboczy, rozcieńczając koncentrat EnVision FLEX Target Retrieval Solution
(50x) wodą destylowaną lub dejonizowaną w proporcji 1:50.
Wypełnić zbiorniki aparatu PT Link odpowiednią ilością (1,5 L) roztworu roboczego, tak aby zakrył
on skrawki tkankowe.
Ustawić w aparacie PT Link wstępne podgrzewanie roztworu w temp. 65°C.
Zanurzyć zamocowane, utrwalone w formalinie i zatopione w parafinie preparaty tkankowe we
wstępnie podgrzanym roztworze EnVision FLEX Target Retrieval Solution roztworze roboczym)
w zbiornikach aparatu PT Link, a następnie inkubować przez 20 minut w temperaturze 97°C.
Pozostawić preparaty w aparacie PT Link, dopóki temperatura nie opadnie do 65°C.
Usunąć statywy na szkiełka ze zbiornika aparatu PT Link i natychmiast zanurzyć szkiełka w
słoju/zbiorniku (np. PT Link Rinse Station, nr kat. PT109) wypełnionym rozcieńczonym buforem
EnVision FLEX Wash Buffer (20x) o temperaturze pokojowej.
Przez 1–5 minut trzymać szkiełka w rozcieńczonym buforze EnVision FLEX Wash Buffer (20x) o
temperaturze pokojowej.
Umieścić szkiełka w aparacie Autostainer Link i przeprowadzić barwienie. W trakcie
przygotowywania oraz podczas procedury barwienia immunohistochemicznego skrawki nie
powinny wyschnąć.
Po zabarwieniu zaleca się przeprowadzenie odwodnienia, oczyszczenia oraz trwałego zatopienia.
UWAGA: Jeśli w aparacie PT Link stosowana jest procedura przygotowywania preparatów 3-w-1,
a roztwory przechowywane są w temperaturze pokojowej, rozcieńczony roztwór Target Retrieval
Solution i rozcieńczony bufor Wash Buffer mogą być uŜyte 3-krotnie w ciągu 5 dni.
Procedura HIER przy uŜyciu aparatu PT Link:
Po odparafinowaniu i nawodnieniu buforem (wodą) skrawki tkankowe powinny być poddane cieplnemu
odmaskowaniu epitopu (HIER).
1.
Przygotować roztwór roboczy, rozcieńczając koncentrat EnVision FLEX Target Retrieval Solution
(50x) wodą destylowaną lub dejonizowaną w stopsunku 1:50.
2. Wypełnić zbiorniki aparatu PT Link odpowiednią ilością (1,5 L) roztworu roboczego, tak aby zakrył
on skrawki tkankowe.
3. Ustawić w aparacie PT Link wstępne podgrzewanie roztworu w temp. 65°C.
4. Ręcznie odparafinować i ponownie nawodnić skrawki tkankowe osadzone na szkiełkach.
5. Zanurzyć preparaty tkankowe o temperaturze pokojowej we wstępnie podgrzanym roztworze
EnVision FLEX Target Retrieval Solution (roztworze roboczym), a następnie inkubować przez 20
minut w temperaturze 97°C.
6. Pozostawić preparaty w aparacie PT Link, dopóki temperatura nie opadnie do 65°C.
7. Usunąć statywy na szkiełka ze zbiornika aparatu PT Link i natychmiast zanurzyć szkiełka w
słoju/zbiorniku (np. PT Link Rinse Station, nr kat. PT109) wypełnionym rozcieńczonym buforem
EnVision FLEX Wash Buffer (20x) o temperaturze pokojowej.
8. Przez 1–5 minut trzymać szkiełka w rozcieńczonym buforze EnVision FLEX Wash Buffer (20x) o
temperaturze pokojowej.
9. Umieścić szkiełka w aparacie Autostainer Link i przeprowadzić barwienie. W trakcie
przygotowywania oraz podczas procedury barwienia immunohistochemicznego skrawki nie
powinny wyschnąć.
10. Po zakończeniu barwienia szkiełka naleŜy zatopić w wodnym lub trwałym środku do zatapiania.
(128330-001)
P04138PL_01_K8023/2015.04 p.9/12
UWAGA: Jeśli w aparacie PT Link stosowana jest procedura HIER, a roztwory przechowywane są
w temperaturze pokojowej, rozcieńczony roztwór Target Retrieval Solution i rozcieńczony bufor
Wash Buffer mogą być uŜyte 3-krotnie w ciągu 5 dni.
Procedura HIER przy uŜyciu naczyń Coplin:
Po odparafinowaniu i nawodnieniu buforem (wodą) skrawki tkankowe powinny być poddane cieplnemu
odmaskowaniu epitopu (HIER).
1. Umieścić naczynia do barwienia z rozcieńczonym roztworem EnVision™ FLEX Target Retrieval
Solution (50x) w łaźni wodnej.
2. Doprowadzić łaźnię wodną i naczynia z roztworem EnVision™ FLEX Target Retrieval Solution
(roztworze roboczym) do temperatury 95–99°C. Osłoni ć naczynia pokrywkami w celu
ustabilizowania temperatury i eliminacji parowania.
3. Zanurzyć skrawki o temperaturze pokojowej w podgrzanym roztworze EnVision FLEX Target
Retrieval Solution (roztworze roboczym) znajdującym się w naczyniach do barwienia.
4. Ponownie podnieść temperaturę łaźni wodnej z roztworem EnVision™ FLEX Target Retrieval
Solution do 95–99°C. Inkubowa ć przez 20 (±1) minut w temperaturze 95–99°C.
5. Wyjąć całe naczynie zawierające preparaty z łaźni wodnej. Odczekać 20 (±1) minut w
temperaturze pokojowej, dopóki nie nastąpi schłodzenie w roztworze EnVision™ FLEX Target
Retrieval Solution.
6. Przelać roztwór EnVision™ FLEX Target Retrieval Solution i przepłukać w ciągu 1–5 minut skrawki
rozcieńczonym buforem EnVision™ FLEX Wash Buffer (20x) o temperaturze pokojowej.
7. WłoŜyć magazynek z przepłukanymi skrawkami do aparatu Autostainer Link. Niezwłocznie
rozpocząć zaprogramowany cykl barwienia.
UWAGA: Jeśli w naczyniach Coplin stosowana jest procedura HIER, rozcieńczony roztwór Target
Retrieval Solution i rozcieńczony bufor Wash Buffer moŜe być uŜyty tylko jeden raz.
Niektóre, nieliczne epitopy nie są odporne na cieplne odmaskowanie (HIER), a niektóre wymagają
wstępnego trawienia enzymatycznego. Odpowiednie instrukcje moŜna znaleźć w ulotce dołączonej do
opakowania uŜywanych przeciwciał pierwotnych Dako.
W trakcie przygotowywania i procedury barwienia immunohistochemicznego skrawki nie powinny
wyschnąć. W celu uzyskania lepszego przylegania skrawków do szkiełek podstawowych zaleca się
stosowanie szkiełek FLEX IHC Microscope Slides (nr kat. K8020).
B. Procedura barwienia
Przeciwciała pierwotne Dako FLEX Ready-to-Use Primary Antibodies mogą być uŜywane z systemem
detekcji Dako EnVision™ FLEX do skrawków tkanek utrwalanych w formalinie i zatopionych w parafinie.
Instrukcja rozcieńczania stęŜonych przeciwciał pierwotnych Dako znajduje się w ulotce dołączonej do
opakowania przeciwciał.
StęŜone przeciwciała pierwotne moŜna rozcieńczać w odczynniku EnVision™ FLEX Antibody Diluent
(DM830, nr kat. K8006).
Kolejne etapy barwienia oraz zalecane czasy inkubacji są wstępnie zaprogramowane za pomocą
oprogramowania Autostainer Link jako protokoły systemu wizualizacji:
FLEX i FLEX 2x5 DAB (protokoły FLEX)
FLEX+ Mouse i FLEX+ Mouse 2x5 DAB (Protokoły FLEX+ Mouse (LINKER))
FLEX+ Rabbit i FLEX+ Rabbit 2x5 DAB (Protokoły FLEX+ Rabbit (LINKER))
Zalecana objętość aplikacji odczynnika wynosi 1 x 200 µL lub 2 x 150 µL na szkiełko. Jeśli w
uŜywanym aparacie Autostainer Link protokoły nie są dostępne, naleŜy skontaktować się z działem
wsparcia technicznego firmy Dako.
Optymalne czasy inkubacji przeciwciał pierwotnych i odczynników EnVision™ FLEX /HRP zaleŜą od
rodzaju zastosowanych przeciwciał pierwotnych. Odpowiednie instrukcje moŜna znaleźć w ulotce
dołączonej do opakowania uŜywanych przeciwciał pierwotnych Dako. UŜytkownik musi zweryfikować
stosowany protokół.
(128330-001)
P04138PL_01_K8023/2015.04 p.10/12
Po zakończeniu procedury wykonania odczynu próbki naleŜy zatopić. Jeśli szkiełka przygotowano przy
uŜyciu procedury przygotowania preparatu 3-w-1, zaleca się przeprowadzenie odwodnienia,
oczyszczania oraz trwałego zatapiania. Szkiełka przygotowane za pomocą procedury HIER moŜna
zatopić w wodnym lub trwałym środku do zatapiania. W celu zatapiania przy uŜyciu środka
rozpuszczalnego w wodzie zaleca się stosowanie preparatów Dako Glycergel™ Mounting Medium
(nr kat. C0563) lub Faramount Aqueous Mounting Medium (nr kat. S3025).
Kontrola jakości
W kaŜdej serii odczynów naleŜy uwzględnić jedną dodatnią próbkę kontrolną, co pozwoli potwierdzić
prawidłowe działanie wszystkich zastosowanych odczynników. JeŜeli za pomocą kontroli dodatniej nie
udaje się potwierdzić dodatniego odczynu, naleŜy uznać, Ŝe wyniki preparatów badanych są niewaŜne.
Do kaŜdej próbki naleŜy zastosować odczynnik kontroli ujemnej w celu wykrycia ewentualnego
odczynu nieswoistego. Jeśli nie jest moŜliwe jednoznaczne odróŜnienie odczynu nieswoistego od
swoistego, naleŜy uznać, Ŝe wyniki preparatów badanych są niewaŜne.
Interpretacja wyników
Roztwór roboczy substratów zawierający diaminobenzydynę powoduje brązowe zabarwienie w
miejscach występowania wykrywanych antygenów rozpoznawanych przez przeciwciała pierwotne.
Brązowe zabarwienie powinno być widoczne w dodatniej próbce kontrolnej w oczekiwanych miejscach
występowania wykrywanego antygenu. Jeśli dojdzie do powstania odczynu nieswoistego, moŜna
będzie go rozpoznać jako rozmyte, brązowe odczyny na szkiełkach poddanych działaniu odczynnika
kontroli ujemnej. Jądra komórkowe w barwieniu kontrastowym hematoksyliną barwią się na niebiesko.
Ograniczenia metody
1. Wyłącznie do automatycznego uŜycia w aparatach Autostainer Link. Podczas przeprowadzania
ręcznego oznaczania odczynu optymalna procedura powinna zostać ustalona i zweryfikowana
przez uŜytkownika, jeśli nie określono w ulotce dołączonej do opakowania danego przeciwciała
pierwotnego Dako.
2. Stosować do skrawków utrwalanych w formalinie i zatapianych w parafinie. Podczas uŜywania
zamroŜonych skrawków lub utrwalonych rozmazach cytologicznych optymalna procedura powinna
zostać ustalona i zweryfikowana przez uŜytkownika, jeśli nie określono w ulotce dołączonej do
opakowania danego przeciwciała pierwotnego Dako. Zmiany w procedurach mogą mieć wpływ na
liczbę testów dostarczonych z zestawem.
(128330-001)
P04138PL_01_K8023/2015.04 p.11/12
Objaśnienie symboli
N umer ka ta log owy
Tempe ratura p rzecho wywan ia
N umer serii
Pikto gram GH S (d ział
środ ki ostroŜno ści)
Wyró b me dyczny d o
d ia gno styki in vitro
Przech owy wać w
ci emnym mie jscu
ZuŜyć pr zed
Pikto gram GH S (d ział
środ ki ostroŜno ści)
Sp rawd zić w in stru kcji
sto sowan ia
Zawa rto ść wysta rcza na
<n> testów
Pro duce nt
Systemy Dako EnVision™ są chronione patentem USA nr 5,543,332 i patentem europejskim nr 594,772.
Producent:
Dako North America, Inc.
Wyprodukowano dla:
Dako Denmark A/S
Produktionsvej 42
DK-2600 Glostrup
Denmark
Tel. +45 44 85 95 00
Faks+45 44 85 95 95
(128330-001)
P04138PL_01_K8023/2015.04 p.12/12